本文關(guān)鍵詞：糖尿病性大鼠膀胱平滑肌表型轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 糖尿病 膀胱平滑肌 myocardin 表型轉(zhuǎn)化

【摘要】：背景與目的糖尿病為嚴(yán)重危害人類健康的常見(jiàn)病和多發(fā)病,是一種慢性全身性代謝疾病,2013年調(diào)查研究顯示中國(guó)成年人糖尿病患病率為11.6%。同時(shí),超過(guò)50%的糖尿病患者合并有膀胱功能障礙。糖尿病所致的膀胱功能障礙為泌尿外科常見(jiàn)疾病,既往考慮存在三種病理改變,即：膀胱感覺(jué)功能下降、膀胱容量增加和膀胱排空功能下降致殘余尿量增多,然而臨床上可表現(xiàn)為明顯的下尿路癥狀,包括膀胱過(guò)度活動(dòng)綜合癥(尿頻、尿急)、排尿功能障礙、尿潴留等。臨床研究報(bào)道22.5%糖尿病患者中存在膀胱過(guò)度活動(dòng)綜合癥,其中有48.0%伴有尿失禁。目前,糖尿病并發(fā)膀胱功能改變的診斷以尿動(dòng)力學(xué)檢查結(jié)果為基礎(chǔ),治療目標(biāo)為緩解癥狀、預(yù)防與治療泌尿系感染及提高膀胱排空效率,治療方法包括行為治療、藥物與手術(shù)治療。然而糖尿病對(duì)膀胱的影響因素為多方面的,糖尿病所致的膀胱功能障礙伴有多種病理生理變化,其中以逼尿肌改變、神經(jīng)損害以及尿路上皮損害為糖尿病對(duì)膀胱主要的影響因素。糖尿病所致的膀胱功能障礙的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,明確糖尿病所致的膀胱功能障礙的發(fā)病機(jī)制、尋求有效的治療措施具有重要的意義。膀胱壁從內(nèi)到外由三層組織組成,分別為粘膜層,肌層和外膜層。肌層亦稱為逼尿肌,主要由平滑肌細(xì)胞組成,當(dāng)逼尿肌收縮,可使膀胱內(nèi)壓升高,導(dǎo)致尿液由尿道排出。平滑肌細(xì)胞通過(guò)獨(dú)特的生理機(jī)能和收縮性能調(diào)節(jié)血管的壓力、胃腸功能以及泌尿生殖系統(tǒng)的功能。相對(duì)于橫紋肌細(xì)胞,平滑肌細(xì)胞具有收縮型和增殖型兩種類型,收縮型的主要功能是收縮和舒張,在維持組織器官的正常形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能上起著重要的作用,而增殖型主要在細(xì)胞增生、遷移、降解胞外蛋白及分泌等方面發(fā)揮作用,平滑肌細(xì)胞具有根據(jù)細(xì)胞的局部環(huán)境變化重塑其表型雙向分化的能力。當(dāng)機(jī)體受到某些因素刺激,平滑肌細(xì)胞由收縮型向合成型轉(zhuǎn)化的過(guò)程,稱為表型轉(zhuǎn)化。膀胱平滑肌與血管平滑肌在結(jié)構(gòu)和功能上類似,研究報(bào)道膀胱平滑肌細(xì)胞也可以發(fā)生表型轉(zhuǎn)化。有研究對(duì)膀胱出口梗阻的患者及兔模型取材檢測(cè),發(fā)現(xiàn)膀胱出口梗阻時(shí)膀胱平滑肌存在表型轉(zhuǎn)化,提示膀胱平滑肌表型轉(zhuǎn)化參與了膀胱出口梗阻后膀胱功能障礙發(fā)病的病理生理機(jī)制。糖尿病是否引起膀胱平滑肌表型轉(zhuǎn)化,目前還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。平滑肌細(xì)胞由收縮型向增殖型轉(zhuǎn)化,這種表型轉(zhuǎn)化主要表現(xiàn)為細(xì)胞增殖率、遷移率增加,炎癥因子和細(xì)胞收縮相關(guān)基因,如SMA,SMMHC,肌滑蛋白(smoothelin),堿性調(diào)寧蛋白(calponin)及結(jié)蛋白等表達(dá)下降。平滑肌細(xì)胞根據(jù)機(jī)體在發(fā)育的不同階段或不同疾病狀態(tài)下所發(fā)生的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的轉(zhuǎn)變?yōu)槠交〖?xì)胞的表型轉(zhuǎn)化。nyocardin屬于SAP(SAF-A/B,Acinus,PIAS)核蛋白超家族成員,通過(guò)與血清應(yīng)答因子(SRF)及CArG反應(yīng)元件形成三元復(fù)合物,激活一系列受SRF調(diào)控、可編碼細(xì)胞支架蛋白和收縮相關(guān)蛋白的基因轉(zhuǎn)錄,從而調(diào)控平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化。Myocardin為平滑肌細(xì)胞表型調(diào)控過(guò)程中重要的調(diào)控因子,有研究證明myocardin是平滑肌細(xì)胞保持收縮型表型的必須因子,myocardin具有調(diào)控平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的能力,組織中myocardin表達(dá)量與收縮型平滑肌細(xì)胞成正比,平滑肌細(xì)胞收縮表型的維持依賴于myocardin的功能激活。同時(shí),本課題組前期研究表明,myocardin在陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化過(guò)程中起關(guān)鍵作用,糖尿病ED的大鼠陰莖海綿體中myocardin明顯下降,并且陰莖海綿體過(guò)表達(dá)myocardin能夠逆轉(zhuǎn)陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化和改善糖尿病性ED大鼠的勃起功能。綜上所述,我們猜想,糖尿病性大鼠膀胱平滑肌組織中是否也存在myocardin表達(dá)下調(diào),進(jìn)而出現(xiàn)表型轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象。由于關(guān)于糖尿病是否引起膀胱平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化未見(jiàn)報(bào)道,因此,本研究通過(guò)測(cè)定糖尿病性大鼠膀胱平滑肌中myocardin、α-SMA、SMMHC的表達(dá)變化來(lái)初步探討糖尿病性大鼠膀胱平滑肌表型轉(zhuǎn)化的情況,為糖尿病所致膀胱功能障礙的治療提供理論基礎(chǔ)和新靶標(biāo)。方法利用鏈脲佐菌素誘導(dǎo)Ⅰ型糖尿病大鼠模型的建立和取材Ⅰ型糖尿病大鼠模型的建立：按照我們已報(bào)道的方法,32只SPF級(jí)8周齡體質(zhì)量200-220g雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后平均隨機(jī)分成糖尿病組和非糖尿病組。禁食不禁水12h后,糖尿病組大鼠按60mg/kg體重一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(60mg/kg,溶于pH4.5,0.1mmol/L的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液)建立糖尿病模型。正常組大鼠腹腔注射等量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液作為對(duì)照。72h后取尾靜脈血,測(cè)定大鼠隨機(jī)血糖,以大鼠明顯消瘦,多飲、多尿,隨機(jī)血糖水平16.6mmol/L為糖尿病動(dòng)物建模成功標(biāo)準(zhǔn)。所有的SD大鼠在溫度恒定(25±1oC)和光線12h循環(huán)中喂養(yǎng),定期更換潔凈墊料。9周后,分別取出糖尿病組和正常對(duì)照組大鼠的膀胱,排空膀胱內(nèi)尿液,稱取各組的膀胱濕重后反復(fù)用PBS液清洗,一部分予4%多聚甲醛溶液固定,一部分剔除膀胱的漿膜層和粘膜層,置入液氮速凍后放入-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?.膀胱組織HE染色和Masson's Trichrome染色9周后,分別對(duì)糖尿病性大鼠和正常對(duì)照大鼠膀胱組織進(jìn)行HE染色、Masson's Trichrome染色,觀察各組膀胱組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。1.分別測(cè)定Myocardin生糖尿病組大鼠和正常對(duì)照組大鼠膀胱組織中的表達(dá)。9周后,使用qRT-PCR和western blot分別檢測(cè)myocardin在糖尿病組大鼠和正常對(duì)照組大鼠膀胱組織中的表達(dá),并比較兩組間myocardin的表達(dá)差異。2.分別測(cè)定α-SMA在糖尿病組大鼠和正常對(duì)照組大鼠膀胱組織中的表達(dá)。9周后,使用qRT-PCR和western blot分別檢測(cè)α-SMA在糖尿病組大鼠和正常對(duì)照組大鼠膀胱組織中的表達(dá),并比較兩組間a-SMA的表達(dá)差異。3.分別測(cè)定SMMHC在糖尿病組大鼠和正常對(duì)照組大鼠膀胱組織中的表達(dá)。9周后,使用qRT-PCR和western blot分別檢測(cè)SMMHC在糖尿病組大鼠和正常對(duì)照組大鼠膀胱組織中的表達(dá),并比較兩組間SMMHC的表達(dá)差異。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組間差異的比較用兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1、成功建立鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的Ⅰ型糖尿病大鼠模型造模前,初始體重比較,糖尿病組大鼠體重(215.9±25.0g)與正常對(duì)照組大鼠體重(218.7±28.8g)無(wú)明顯差異(P0.05)；造模后,糖尿病大鼠較正常對(duì)照組大鼠明顯消瘦,出現(xiàn)多飲、多尿,造模9周時(shí),糖尿病組大鼠體重(286.3±71.2g)比正常對(duì)照組大鼠(412.7±102.7g)明顯下降,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異p=0.001,糖尿病組大鼠膀胱濕重(0.34±0.19g)比正常對(duì)照組大鼠(0.15±0.05g)明顯增高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.002),造模過(guò)程中,糖尿病組大鼠出現(xiàn)2只死亡,而正常對(duì)照組大鼠無(wú)死亡。2、各組膀胱組織HE染色和Masson's Trichrome染色通過(guò)HE染色,觀察糖尿病組大鼠與正常對(duì)照組大鼠的膀胱組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)：糖尿病組膀胱平滑肌細(xì)胞排列紊亂、細(xì)胞外基質(zhì)沉積,結(jié)構(gòu)松散,而正常對(duì)照組膀胱組織平滑肌細(xì)胞排列整齊緊密,細(xì)胞外充滿結(jié)締組織。利用Masson's Trichrome染色來(lái)觀察兩組間膀胱組織的平滑肌細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞外基質(zhì)的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)糖尿病組大鼠膀胱組織較正常組平滑肌細(xì)胞質(zhì)減少,細(xì)胞外纖維化增多。4、myocardi、α-SMA、SMMHC分別在糖尿病組大鼠和正常對(duì)照組大鼠膀胱組織中的表達(dá)水平差異熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組比較,糖尿病組大鼠膀胱組織中myocardin mRNA表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05)；同時(shí)收縮型相關(guān)蛋白α-SMAmRNA表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)和SMMHC mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)；western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,糖尿病組大鼠膀胱組織中myocardin蛋白表達(dá)減少(P0.05)；同時(shí)收縮型相關(guān)蛋白α-SMA蛋白表達(dá)減少(P0.05)和SMMHC蛋白表達(dá)減少(P0.05)�？梢�(jiàn),糖尿病組大鼠膀胱組織中存在Myocardin及收縮型表型標(biāo)志物α-SMA、SMMHC表達(dá)的下調(diào)現(xiàn)象,進(jìn)而說(shuō)明糖尿病性大鼠膀胱組織中平滑肌細(xì)胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)化。結(jié)論1、造模9周后,糖尿病性大鼠較正常對(duì)照組大鼠明顯消瘦,伴有多飲、多尿,糖尿病性大鼠膀胱濕重較正常對(duì)照組增加,提示糖尿病性大鼠膀胱可能出現(xiàn)病理變化和舒縮功能障礙。2、造模9周時(shí),收縮型表型標(biāo)志物α-SMA、SMMHC在糖尿病性大鼠膀胱平滑肌組織中表達(dá)下降,提示糖尿病性大鼠膀胱組織中平滑肌細(xì)胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)化,可能參與引起膀胱平滑肌舒縮障礙的病理生理機(jī)制。3、myocardin在糖尿病性大鼠膀胱平滑肌組織中表達(dá)下降,myocardin的表達(dá)下降可能參與了糖尿病性大鼠膀胱組織中平滑肌細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化的過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 膀胱平滑肌 myocardin 表型轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R694
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-17
• 前言17-23
• 第一章 Ⅰ型糖尿病大鼠模型的建立和取材23-27
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 2. 結(jié)果和附圖24-27
• 第二章 糖尿病性大鼠膀胱組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化27-33
• 1. 糖尿病大鼠與正常對(duì)照組膀胱組織的HE染色27-29
• 2. 糖尿病大鼠與正常對(duì)照組膀胱組織的masson染色29-33
• 第三章 MYOCARDIN和收縮型相關(guān)蛋白標(biāo)志物A-SMA,SMMHC在糖尿病性大鼠膀胱平滑肌組織中的表達(dá)及意義33-48
• 1 實(shí)驗(yàn)材料33-37
• 2. qRT-PCR方法檢測(cè)大鼠膀胱組織中α-SMA,SMMHC和myocardinmRNA的表達(dá)37-40
• 3 利用Western Blots方法檢測(cè)大鼠膀胱組織中myocardin,α-SMA和SMMHC的蛋白表達(dá)水平40-44
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理44
• 5 結(jié)果和附圖44-48
• 第四章 討論48-54
• 1. 利用鏈脲佐菌素構(gòu)建Ⅰ型糖尿病大鼠模型50
• 2. 糖尿病性大鼠與正常對(duì)照組膀胱組織的HE染色和masson染色50-51
• 3. 糖尿病性大鼠膀胱平滑肌組織中收縮相關(guān)型標(biāo)記物的表達(dá)水平變化51-52
• 4. 糖尿病性大鼠膀胱平滑肌組織中myocardin的表達(dá)水平變化52-54
• 第五章 全文小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-64
• 縮寫詞簡(jiǎn)表64-65
• 碩士研究生期間發(fā)表論文情況65-66
• 致謝66-68

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳同度,張昌穎;素食大鼠的貧血現(xiàn)象[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);1957年04期

2 陳偉強(qiáng);趙善廣;;自制注射用大鼠固定裝置[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1992年04期

3 肖柳英,林培英,馮昭明,張丹;不同周齡的SD大鼠生理、生化及體重的正常值測(cè)定[J];中藥新藥與臨床藥理;1996年03期

4 李淑云;簡(jiǎn)易大鼠灌胃器的制作[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年04期

5 楊明智,陳積圣;一種大鼠抓取與固定的新工具介紹[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2001年03期

6 戴英,陸群;復(fù)方H_(505)對(duì)Wistar大鼠外周血的血液流變學(xué)指標(biāo)的影響[J];中國(guó)血液流變學(xué)雜志;2001年01期

7 韋應(yīng)波,孫喜慶,曹新生,姚永杰,馮岱雅,楊長(zhǎng)斌;+Gz暴露時(shí)間對(duì)大鼠記憶功能和行為的影響[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2003年01期

8 呂學(xué)軍,郭俊生,李敏,周利梅,張永娟;暈船大鼠體內(nèi)鐵含量的變化[J];中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué);2003年04期

9 湯仁仙,王迎偉,王慧,周峰;201A中藥合劑對(duì)大鼠抗腎小球基底膜腎炎病變的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年06期

10 孫同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陳偉;介紹一種簡(jiǎn)易的大鼠保定方法[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2004年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對(duì)大鼠顳頜關(guān)節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國(guó)顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2011年

2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號(hào)：690209