本文關(guān)鍵詞：促甲狀腺激素對(duì)脂肪細(xì)胞促炎癥因子分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：近年來,人們逐漸認(rèn)識(shí)到脂肪組織不僅是能量的儲(chǔ)備場(chǎng)所,同樣也是重要的內(nèi)分泌器官,脂肪細(xì)胞可以通過旁分泌、自分泌和遠(yuǎn)距離分泌方式分泌多種生物活性因子,如腫瘤壞死因子-a (TNF-α)、白介素-6(IL-6)、瘦素及抵抗素等,引發(fā)機(jī)體炎癥反應(yīng),與胰島素抵抗(R)的發(fā)生相關(guān)聯(lián)。IR是引起葡萄糖耐量受損、2型糖尿病(T2DM)、高血壓、血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化等多種非感染性亞臨床炎癥反應(yīng)性疾病發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié),因此,探索脂肪細(xì)胞分泌促炎癥因子的始動(dòng)因素逐漸成為IR病因?qū)W研究的熱點(diǎn)。目前,促甲狀腺激素(TSH)促進(jìn)脂肪細(xì)胞分泌促炎癥因子的研究主要集中在亞臨床甲狀腺功能減退及心血管疾病方面,且研究發(fā)現(xiàn)TSH受體(TSHR)存在于除甲狀腺外的多種組織及細(xì)胞表面,故本研究擬探討TSH是否與脂肪細(xì)胞表面TSHR結(jié)合后,刺激TNF-α的分泌,進(jìn)而可能參與脂肪細(xì)胞IR的發(fā)生發(fā)展。 方法：體外培養(yǎng)并誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞為成熟脂肪細(xì)胞。以成熟脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象,利用小干擾RNA (siRNA)技術(shù)針對(duì)TSHR基因構(gòu)建質(zhì)粒,并分別轉(zhuǎn)染成熟脂肪細(xì)胞,通過western blotting方法檢測(cè)TSHR蛋白表達(dá)情況,以驗(yàn)證RNA干擾效果并篩選能成功沉默TSHR的質(zhì)粒。雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)方法分別檢測(cè)0.1mIU/ml牛TSH刺激沉默TSHR前、后成熟脂肪細(xì)胞0-24h培養(yǎng)基中的TNF-a水平,確定產(chǎn)生最佳效應(yīng)時(shí)間。然后,以不同濃度牛TSH (0.01mIU/ml、0.1mIU/ml、1mIU/ml)刺激沉默前、后的成熟脂肪細(xì)胞,應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)培養(yǎng)基中TNF-α水平。 結(jié)果：1.3T3-L1前體脂肪細(xì)胞在換用含有誘導(dǎo)劑的細(xì)胞培養(yǎng)液至第10天后,誘導(dǎo)為成熟脂肪細(xì)胞。2.利用siRNA技術(shù)設(shè)計(jì)4組TSHR shRNA質(zhì)粒,與正常對(duì)照組相比,shRNA1組、shRNA2組與shRNA3組TSHR蛋白明顯減少(0.07+0.03,0.04±0.01,0.19a=0.04),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；與shRNA3組相比,shRNA1組與shRNA2組TSHR蛋白減少具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；shRNA1組與shRNA2組之間TSHR蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與正常對(duì)照組相比,2ug-24h組、4ug-24h組蛋白表達(dá)減少(0.32±0.10,0.314±0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),4ug-48h組TSHR蛋白表達(dá)明顯減少(0.17±0.04),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),2ug-12h組、2ug-48h組、4ug-12h組及6ug組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.0.1mIU/ml牛TSH刺激成熟脂肪細(xì)胞Oh至24h培養(yǎng)基中,TNF-α水平隨時(shí)間延長(zhǎng)呈增加趨勢(shì),4h培養(yǎng)基中TNF-α水平最高(537.07±45.19ng/L),與24h差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(547.94±32.32ng/L, P0.05);0.1mIU/ml牛TSH刺激已沉默TSHR的成熟脂肪細(xì)胞,在刺激Oh至24h培養(yǎng)基中,TNF-α水平隨時(shí)間延長(zhǎng)緩慢上升,與對(duì)照組相比,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.與空白對(duì)照組相比,不同濃度牛TSH (0.01mIU/ml、0.1mIU/ml、1.0mIU/ml)刺激正常成熟脂肪細(xì)胞4h后培養(yǎng)基中TNF-α水平均呈上升趨勢(shì),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(522.67±36.22vs431.51±30.10、411.08±12.03、341.85±12.00ng/L, P0.05或P0.01)；5.與對(duì)照組相比,1.0mIU/ml牛TSH刺激轉(zhuǎn)染前、后成熟脂肪細(xì)胞4h后,空白及陰性組培養(yǎng)基中TNF-α水平均呈上升趨勢(shì),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(522.67±36.22vs341.85±12.00ng/L,521.26±34.23vs340.54±12.53, p0.05); shRNA組培養(yǎng)基中TNF-α水平較前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(368.50±26.11vs339.62±14.39,P0.05)。 結(jié)論：TSH與脂肪細(xì)胞表面TSHR結(jié)合后,時(shí)間依賴性及劑量依賴性地刺激TNF-α的分泌；臨床上通過密切監(jiān)測(cè)血清TSH水平,預(yù)防亞臨床甲狀腺功能減退及其相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展,可能有助于降低炎癥因子的水平,進(jìn)而阻止或延緩IR等相關(guān)疾病的出現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：促甲狀腺激素 3T3-L1 脂肪細(xì)胞 促甲狀腺激素受體 shRNA 腫瘤壞死因子-α
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 對(duì)象和方法15-27
• 1 3T3-L1細(xì)胞的培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染15-21
• 1.1 主要試劑15
• 1.2 主要儀器15-16
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)16-18
• 1.4 質(zhì)粒的提取與轉(zhuǎn)染18-21
• 1.5 干預(yù)實(shí)驗(yàn)具體過程21
• 2 細(xì)胞培養(yǎng)基TNF-α濃度的測(cè)定21-22
• 2.1 主要試劑及儀器21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)原理21
• 2.3 實(shí)驗(yàn)步驟21-22
• 3 TSHR總蛋白的Western Bloting檢測(cè)22-26
• 3.1 主要試劑22-23
• 3.2 主要儀器23
• 3.3 實(shí)驗(yàn)原理23
• 3.4 實(shí)驗(yàn)步驟23-26
• 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法26-27
• 結(jié)果27-37
• 1 3T3-L1前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化27-28
• 2 TSHR shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞及TSHR蛋白表達(dá)情況28-32
• 2.1 TSHR shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率28
• 2.2 不同組TSHR shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48h對(duì)TSHR蛋白表達(dá)的影響28-30
• 2.3 不同時(shí)間、質(zhì)量TSHR shRNA轉(zhuǎn)染對(duì)TSHR蛋白表達(dá)的影響30-32
• 3 TSH對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞分泌TNF-α的影響32-37
• 3.1 0.1mIU/ml牛TSH刺激正常成熟脂肪細(xì)胞確定最佳時(shí)間段32
• 3.2 O.1mIU/ml牛TSH刺激已沉默TSHR的成熟脂肪細(xì)胞不同時(shí)間段培養(yǎng)液TNF-a的水平32
• 3.3 不同濃度牛TSH刺激成熟脂肪細(xì)胞4h后培養(yǎng)液TNF-α的水平32-33
• 3.4 1.0mIU/ml牛TSH刺激轉(zhuǎn)染前后成熟脂肪細(xì)胞4h后培養(yǎng)液TNF-α的水平33-37
• 討論37-48
• 1 3T3-L1脂肪細(xì)胞37-38
• 2 促甲狀腺激素38-43
• 3 小干擾RNA43-44
• 4 腫瘤壞死因子-α44-46
• 5 TSH與炎癥因子46-48
• 結(jié)論48-49
• 不足和展望49-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明57-58
• 綜述 TSH的甲狀腺外作用58-76
• 綜述參考文獻(xiàn)68-76
• 致謝76

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王鳳龍,銀梅,日穆德瑪;雞腫瘤壞死因子的誘生及活性檢測(cè)[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2003年05期

2 呂紅彬;閆乃紅;羅清禮;夏慶杰;曹桂群;張發(fā)強(qiáng);;促甲狀腺素受體在BALB/c小鼠主要組織和器官的分布及其意義[J];解剖學(xué)雜志;2006年05期

3 葛勤敏;蘇青;;促甲狀腺激素受體的裂解和脫落[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年03期

  本文關(guān)鍵詞：促甲狀腺激素對(duì)脂肪細(xì)胞促炎癥因子分泌的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：419537