本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對高糖培養(yǎng)的大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞SRIT1及NADPH氧化酶-p47蛋白表達(dá)的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：糖尿�。╠iabetes mellitus，DM）是一種無法治愈的慢性疾病。目前全球糖尿病的患病率逐年升高，其慢性大血管并發(fā)癥包括高血壓、冠心病、腦血管疾病及周圍血管疾病，是糖尿病患者的主要健康威脅，尤其是心血管疾病已經(jīng)成為糖尿病患者發(fā)病率和致死率最高、危害最大的慢性并發(fā)癥之一。糖尿病大血管病變的主要病理基礎(chǔ)是動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）。在高糖、炎癥因子等刺激下，血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）激活，發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，由收縮型轉(zhuǎn)化成合成型，遷移至內(nèi)膜下層并大量增殖，是AS發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。此外，高糖可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞活性氧（reactive oxygen species，ROS）生成，如NADPH氧化酶(nicotinamide vadenine dinucleotide phosphateoxidase，NOX)、黃嘌呤氧化酶、線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體、內(nèi)皮型一氧化氮合酶及脂氧合酶等，其中NADPH氧化酶是血管內(nèi)皮細(xì)胞ROS的主要來源，NADPH氧化酶是由p47phox、p67phox、p40phox、小G蛋白Rac1或Rac2五個亞基組成的酶復(fù)合體，其中p47是NADPH氧化酶的關(guān)鍵亞基，NADPH氧化酶亞單位表達(dá)及活性的改變在AS中扮演著重要角色。 白藜蘆醇（Resveratrol，Res）因其多重生物活性倍受關(guān)注。白藜蘆醇化學(xué)名稱為3，4'，5-三羥基二苯乙烯(trans-3,4',5-trihybdroxystilbene)，是一種天然的多酚類化合物，存在于多種中草藥和其他植物中。諸多研究表明，白藜蘆醇具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎、降低血糖、減少血小板聚集、促進(jìn)血管舒張、心血管保護(hù)以及對抗2型糖尿病及其相關(guān)并發(fā)癥等作用。此外，白藜蘆醇還可干預(yù)體外高糖培養(yǎng)的大鼠VSMCs的異常增殖。有報道稱，Res能減弱高糖培養(yǎng)的大鼠VSMCs的異常增殖，其在一定程度上與SIRT1（NAD+依賴的去乙�；福┑谋磉_(dá)相關(guān)。Res是目前最強(qiáng)的SIRT1的天然激活物，但白藜蘆醇對于SIRT1及其相關(guān)信號通路在抑制高糖誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖作用的機(jī)制尚不明確。本實驗以高糖誘導(dǎo)的大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞為研究對象，，探討白藜蘆醇對VSMCs增殖活性的影響及其潛在作用靶點(diǎn)沉默信息調(diào)節(jié)子（SIRT1）抑制細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶-p47蛋白生成通路的作用，為防治糖尿病及其并發(fā)癥提供新的理論依據(jù)。 方法： 1細(xì)胞培養(yǎng)的方法如下：用大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞株A7r5(細(xì)胞株購自中國培養(yǎng)物典藏中心)作為研究對象。將凍存的血管平滑肌細(xì)胞株立刻投入37℃溫水中，同時搖動凍存管使其快速解凍，解凍后以800轉(zhuǎn)/min離心5min，棄上清，加入含20%FBS的DMEM培養(yǎng)基5ml并混勻，接種于培養(yǎng)瓶中，放置于37℃、5%CO2的孵箱中孵育，待細(xì)胞鋪滿瓶底的90%時進(jìn)行傳代。取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞分別接種在50ml培養(yǎng)瓶和96孔培養(yǎng)板上，培養(yǎng)24小時后，再更換為無血清DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24小時，讓細(xì)胞處于饑餓狀態(tài)且同步于G0/Gl期，然后分8組進(jìn)行實驗： ①正常對照組（control組）：5.5mmol/L葡萄糖 ②高糖培養(yǎng)組（25G組）：25mmol/L葡萄糖 ③高糖+SIRT1抑制劑組（25G+Sirtionl組）：25mmol/L葡萄糖+50μmol/L Sirtionl ④高糖+NADPH氧化酶抑制劑組（25G+Apocynin組）：25mmol/L葡萄糖+1mmol/LApocynin ⑤甘露醇對照組（Mannitol組）：5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇 ⑥高糖+25R組（25G+25Res組）：25mmol/L葡萄糖+25μmol/L白藜蘆醇 ⑦高糖+50R組（25G+50Res組）：25mmol/L葡萄糖+50μmol/L白藜蘆醇 ⑧高糖+100R組（25G+100Res組）：25mmol/L葡萄糖+100μmol/L白藜蘆醇 2采用MTT法檢測高糖孵育下，不同濃度Res對VSMCs增殖活性的影響。 3采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測高糖孵育下，不同濃度Res對VSMCs細(xì)胞周期進(jìn)程的影響。 4采用Western blot技術(shù)檢測不同濃度Res對高糖孵育下VSMCs細(xì)胞SIRT1、NADPH氧化酶-p47蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果: 1采用MTT法檢測VSMCs的增殖活性，結(jié)果顯示：在高糖誘導(dǎo)下，VSMCs增殖顯著（P＜0.05），而對高滲組細(xì)胞的增殖活性無明顯影響；Res（25、50、100μmol/L）可顯著抑制高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的VSMCs增殖（P＜0.05），并呈濃度依賴性。 2采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期時相分布情況，結(jié)果顯示：高糖（25mmol/L）能夠顯著誘導(dǎo)G0/G1期細(xì)胞向S期的轉(zhuǎn)化（P＜0.05），細(xì)胞周期進(jìn)程在高滲對照組無明顯改變；Res（25、50、100μmol/L）能夠顯著抑制高糖誘導(dǎo)下的G0/G1期細(xì)胞向S期的轉(zhuǎn)化，G0/G1期細(xì)胞數(shù)目明顯增多，S期細(xì)胞數(shù)目明顯減少（P＜0.05）。 3Western blot技術(shù)檢測白藜蘆醇對VSMCs SIRT1、 NADPH氧化酶-p47蛋白表達(dá)量的影響，結(jié)果顯示：高糖能使NADPH氧化酶-p47蛋白表達(dá)明顯增加，SIRT1蛋白表達(dá)減少（P＜0.05）；用Apocynin預(yù)處理后，NADPH氧化酶受到抑制，NADPH氧化酶-p47蛋白表達(dá)減少，SIRT1蛋白表達(dá)增加（P＜0.05）；用Sirtionl預(yù)處理后，SIRT1受到抑制，SIRT1蛋白表達(dá)減少，NADPH氧化酶-p47蛋白表達(dá)增加；而高滲組無明顯改變；Res（25、50、100μmol/L）能顯著降低高糖環(huán)境下NADPH氧化酶蛋白的表達(dá)，增加SIRT1蛋白的表達(dá)，并呈濃度依賴性（P＜0.05）。 結(jié)論： 1高糖可促進(jìn)體外培養(yǎng)的VSMCs的增殖，促使細(xì)胞由G0/G1期向S期轉(zhuǎn)化。其機(jī)制可能是高糖激活SIRT1/NADPH氧化酶-p47蛋白信號通路，抑制SIRT1蛋白表達(dá)，促進(jìn)p47蛋白表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。高糖狀態(tài)誘導(dǎo)的細(xì)胞異常增殖可能是糖尿病大血管病變的發(fā)病機(jī)制之一。 2白藜蘆醇通過干預(yù)SIRT1/NADPH氧化酶-p47蛋白信號通路，使SIRT1蛋白表達(dá)上調(diào)，抑制NADPH氧化酶-p47蛋白表達(dá)，抑制VSMCs增殖，減少進(jìn)入S期的細(xì)胞數(shù)目，使細(xì)胞阻滯在G0/G1期，且呈濃度依賴性。提示白藜蘆醇可能通過SIRT1/NADPH氧化酶-p47蛋白信號通路干預(yù)高糖誘導(dǎo)的VSMCs的增殖，對2型糖尿病的大血管病變起到防治作用。
【關(guān)鍵詞】：2型糖尿病 動脈粥樣硬化 白藜蘆醇 增殖 細(xì)胞周期 SIRT1 p47
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R587.1;R965
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-27
• 附圖27-31
• 附表31-33
• 討論33-38
• 結(jié)論38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 綜述 SIRT1研究現(xiàn)狀43-54
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 致謝54-55
• 個人簡歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 朱玉;楊菊紅;王楠;李冰;王巍;趙榮蘭;梁東春;馮憑;;自發(fā)性2型糖尿病大鼠腹主動脈SIRT1的表達(dá)及二甲雙胍的干預(yù)研究[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年03期

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  本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對高糖培養(yǎng)的大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞SRIT1及NADPH氧化酶-p47蛋白表達(dá)的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：401453