本文關鍵詞：人工蟲草對STZ誘導的糖尿病大鼠肝臟保護作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：不少研究顯示糖尿病患者不同臟器和組織存在淋巴細胞侵潤和免疫復合物的沉積,提示糖尿病慢性并發(fā)癥的形成有多種免疫異常機制參與。糖尿病肝臟疾病(diabetic liver disease,DLD)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)的慢性并發(fā)癥之一,其肝臟病變也可能存在免疫異常和免疫損傷。目前研究多認為慢性低度炎癥是DLD的主要發(fā)病機制之一。DLD早期表現(xiàn)為谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高,隨之肝細胞出現(xiàn)脂質(zhì)變性,壞死,肝Kuffer細胞和肝星狀細胞活化,細胞外基質(zhì)異常分泌時,最終導致肝纖維化。單核細胞趨化因子-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)是一種強效趨化因子,可使各種炎性細胞尤其是單核細胞向病變部位聚集,現(xiàn)有研究認為MCP-1的過度趨化單核細胞聚集從而引起肝內(nèi)炎癥的發(fā)生,可能在糖尿病性肝臟疾病中起著重要的作用。TNF-α是一種單核因子,主要由巨噬細胞和單核細胞產(chǎn)生,中性粒細胞、肝Kuffer細胞、內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞亦可產(chǎn)生TNF-α,Kuffer細胞是肝臟局部TNF-α的主要來源。TNF-α具有復雜的生物學活性,包括抗腫瘤、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)和誘發(fā)炎癥反應等,其在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展中占有重要地位。IL-6是由單核巨噬細胞、T淋巴細胞分泌,并具有某些非特異性免疫調(diào)節(jié)作用和在炎癥反應中起重要作用的細胞因子,其在肝臟的生理和病理過程中的作用已引起廣大學者的關注。活化的肝星狀細胞和肝成纖維細胞是肝臟IL-6的主要來源,IL-6和TNF-α與肝壞死及肝纖維化程度密切相關,在肝硬化的發(fā)生發(fā)展中參與肝臟的損傷-修復循環(huán),最終引起肝臟大量細胞外基質(zhì)的合成和沉積,從而導致肝臟纖維化。吡格列酮(Pglitazone,P)是噻唑烷二酮類藥物,其可以通過調(diào)節(jié)糖脂代謝、改善胰島素抵抗、改善炎癥等途徑發(fā)揮肝臟保護作用。冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk.)Sacc,)為麥角菌科真菌寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座及幼蟲尸體的復合體,既往不少研究顯示冬蟲夏草有免疫調(diào)節(jié)作用,補腎益肺之功效,但對糖尿病肝臟病變研究并不多,有研究認為冬蟲夏草對糖尿病肝臟病變有一定的保護作用,但具體機制尚不明確。本研究通過一次性尾靜脈注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)的方法,建立1型糖尿病大鼠模型,并應用人工發(fā)酵蟲草菌絲體干粉,即人工蟲草(CS,經(jīng)人工發(fā)酵培養(yǎng)獲得發(fā)酵蟲草菌絲體,化學組成、藥理作用與天然的冬蟲夏草基本一致)和吡格列酮進行干預,觀察實驗動物肝臟組織中MCP-1、TNF-α、IL-6表達變化情況,探討MCP-1、TNF-α、IL-6在糖尿病肝臟損傷發(fā)生發(fā)展中的潛在聯(lián)系,以及CS的肝臟保護作用機制及量效關系。 方法：從90只雄性8周齡SD大鼠中隨機抽取10只作為正常對照組(N組),其余作為實驗組。實驗組大鼠一次性尾靜脈注射大劑量STZ(45mg/kg)。所有成模大鼠根據(jù)血糖水平分層后,隨機分為糖尿病組(D組),CS小劑量組(L組,0.6g/kg.d),CS中劑量組(M組,2.5g/kg.d),CS大劑量組(H組,5g/kg.d)和吡咯列酮組(P組,4mg/kg.d)。成模8周處死。留取血標本分別檢測肝功能、血脂。光鏡下觀察各組大鼠肝臟病理組織學改變,通過免疫組化觀察炎癥反應標志物MCP-1、TNF-α、IL-6表達水平的變化,RT-PCR檢測肝組織中MCP-1、TNF-α、IL-6的表達。 結(jié)果：1.HE染色：正常組大鼠HE染色顯示肝細胞形態(tài)正常,肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝細胞索排列整齊,肝竇正常連接成網(wǎng)狀,無炎癥細胞浸潤。D組大鼠肝臟顯示肝細胞邊界不清,肝細胞內(nèi)出現(xiàn)大量大小不一脂肪空泡即肝細胞脂肪變性,并可見大量炎性細胞侵潤,肝小葉結(jié)構(gòu)模糊不清,肝細胞索排列紊亂,部分肝臟可見肝竇擴張。P組和各CS干預組與D組比較,肝細胞形態(tài)尚正常,肝小葉結(jié)構(gòu)和肝細胞索排列有不同程度恢復,有少量脂肪變性,肝實質(zhì)點狀和灶狀炎細胞侵潤。2.Masson染色：正常組大鼠Masson染色僅見血管周圍輕微的藍綠色膠原著色,肝臟實質(zhì)未見著色。糖尿病未干預組大鼠肝臟實質(zhì)內(nèi)可見大量的膠原沉積,呈彌漫性分布,血管膠原沉積增厚；P和各CS干預組肝臟病變均明顯輕于D組,肝臟病纖維化程度明顯改善,呈小灶狀、點狀改變。3.D組大鼠肝臟MCP-1表達較N組明顯增加,與D組比較P組和各CS干預組大鼠肝臟MCP-1表達水平均有不同程度降低,其中H組和P組結(jié)果類似,明顯優(yōu)于L、M組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.D組大鼠肝臟TNF-α表達較N組明顯增加,與D組比較P組和各CS治療組大鼠肝臟TNF-α表達水平均有不同程度降低,其中H組和P組結(jié)果類似,明顯優(yōu)于L、M組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.D組大鼠肝臟IL-6表達水平較N組明顯增加,與D組比較P組和各CS治療組大鼠肝臟IL-6表達水平均有不同程度降低,其中H組和P組結(jié)果類似,明顯優(yōu)于L、M組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結(jié)論：1.STZ誘導建立的DM大鼠模型,可出現(xiàn)明顯的肝功能異常和肝臟病理學改變。HE染色可見肝細胞脂質(zhì)變性,大量炎性細胞侵潤,部分肝臟可見肝竇擴張；Masson染色可見肝臟實質(zhì)內(nèi)有大量的膠原沉積,呈彌漫性分布,血管膠原沉積增厚。2.糖尿病肝臟病變時MCP-1、TNF-α、IL-6的異常表達增加,并且其表達水平與肝臟纖維化存在一定的聯(lián)系。3.CS的肝細胞保護作用可能是抑制了過度表達的MCP-1、TNF-α、IL-6水平,減少其免疫損傷,并有一定的量效關系,而且獨立于降糖作用之外。
【關鍵詞】：糖尿病性肝臟疾病 人工蟲草 單核細胞趨化蛋白-1 腫瘤壞死因子-α 白介素-6 吡格列酮 肝Kuffer細胞 肝星狀細胞
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-14
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-14
• 對象和方法14-23
• 結(jié)果23-33
• 討論33-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明45-46
• 附錄46-51
• 綜述 糖尿病的肝臟損傷51-62
• 綜述參考文獻58-62
• 致謝62

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：人工蟲草對STZ誘導的糖尿病大鼠肝臟保護作用及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：393786