目的觀察人甲狀旁腺激素(PTH)的N端活性片段PTH(1-34)對(duì)人成骨肉瘤細(xì)胞MG63基質(zhì)Gla蛋白(MGP)表達(dá)的影響,以及PTH通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路介導(dǎo)MGP表達(dá)調(diào)控的作用,探討PTH(1-34)在防治骨質(zhì)疏松癥作用中可能的分子機(jī)制。方法(1)用不同濃度PTH(1-34)(10-9、10-8、10-7mol/L),單獨(dú)或聯(lián)合Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制劑DKK-1(200 ng/m L)干預(yù)MG63細(xì)胞;(2)檢測(cè)堿性磷酸酶(ALP)染色及活力測(cè)定用于判斷細(xì)胞分化情況;(3)MGP及Wnt/β-catenin信號(hào)通路各組分的m RNA及蛋白的表達(dá)分別采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR及Western blotting方法。結(jié)果 (1)PTH(1-34)上調(diào)MGP基因的表達(dá),MGP m RNA的表達(dá)分別是對(duì)照組的2.56倍、4.14倍、7.81倍(P<0.05或P<0.01),且呈劑量依賴(lài)性增高;(2)PTH增強(qiáng)MG63細(xì)胞ALP活力,Dkk-1抑制ALP活性,Dkk-1與PTH聯(lián)用部分阻斷PTH上調(diào)ALP活力(P<0.05);(3)PTH上調(diào)M...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 試劑
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及藥物干預(yù)
    1.3 堿性磷酸酶(ALP)活性檢測(cè)
    1.4 熒光實(shí)時(shí)定量PCR(q PCR)檢測(cè)m RNA表達(dá)
    1.5 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 PTH上調(diào)MG63細(xì)胞MGP表達(dá),且呈劑量依懶性
    2.2 PTH增加MG63細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性
    2.3 PTH及Dkk-1對(duì)人MG63細(xì)胞MGP及wnt/β-catenin經(jīng)典信號(hào)通路相關(guān)因子基因表達(dá)的影響
    2.4 PTH(1-34)及DKK-1對(duì)MG63細(xì)胞MGP及Wnt/β-catenin信號(hào)通路中相關(guān)因子蛋白表達(dá)的影響
3 討論



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