本文關(guān)鍵詞：MicroRNA126對人正常肝細(xì)胞葡萄糖代謝的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:糖尿病是一種復(fù)雜的代謝紊亂性疾病,血糖代謝紊亂是其主要特征。研究表明,葡萄糖的代謝紊亂可能與高血糖代謝記憶、炎癥反應(yīng)以及線粒體功能異常有關(guān),但有關(guān)糖尿病的具體發(fā)病機(jī)制,到目前仍不明確。Micro RNAs(mi RNAs)是一類序列短小的、進(jìn)化上高度保守的、非編碼的RNA,由20-25個(gè)單核苷酸組成。mi RNAs通過與靶基因3’非編碼區(qū)結(jié)合,導(dǎo)致m RNA降解或直接抑制m RNA的翻譯,對基因轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行調(diào)控,從而參與許多生理病理過程的精細(xì)調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn),mi RNAs在細(xì)胞增殖和凋亡、炎癥反應(yīng)、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞代謝以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起到至關(guān)重要的作用。大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)[1]表明,mi RNAs在維持機(jī)體葡萄糖的穩(wěn)態(tài)和糖尿病的發(fā)展中有重要的調(diào)節(jié)作用。Anna Zampetaki等人發(fā)現(xiàn)在糖尿病患者的血漿中micro RNA126(mi R-126)的相對表達(dá)量明顯降低,提出mi R-126能準(zhǔn)確鑒別糖尿病高危者和健康人,可以作為糖尿病疾病發(fā)展的標(biāo)志物。同時(shí),我課題組在前期研究發(fā)現(xiàn),mi R-126在1型和2型糖尿病患者血漿中水平降低,其表達(dá)水平與炎癥反應(yīng)以及脂代謝紊亂等多種糖尿病危險(xiǎn)因素相關(guān)。肝臟是人體主要的葡萄糖代謝場所,在糖尿病的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。mi R-126對人正常肝細(xì)胞葡萄糖代謝的具體作用如何呢?本研究針對改變chang liver細(xì)胞mi R-126的表達(dá)量,以探討mi R-126表達(dá)水平改變時(shí)對細(xì)胞胰島素反應(yīng)的敏感性和葡萄糖代謝的影響,以進(jìn)一步了解糖尿病的發(fā)病機(jī)理。材料和方法:1.Chang liver細(xì)胞分為3組,正常對照組、negative control FAM(NC-FAM)組、micro RNA inhibitor NC-FAM(IN-NC-FAM)組,分別用不同濃度10、20、40、80n M在lipofectamine2000(Lip2000)作用下轉(zhuǎn)染細(xì)胞,確定最佳轉(zhuǎn)染條件。2.將chang liver細(xì)胞分為6組,分別為micro RNA126 mimic(mi R-126)組、negative control(NC)組、micro RNA126 inhibitor(In-mi R-126)組、micro RNA inhibitor negative control(In-NC)組、lipofectamine2000(Lip2000)組和正常細(xì)胞對照組,按照上述優(yōu)化的轉(zhuǎn)染條件將對應(yīng)的人工合成的核苷酸序列轉(zhuǎn)染入相應(yīng)的細(xì)胞組。3.實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)(q RT-PCR)檢測各組細(xì)胞mi R-126表達(dá)水平。4.將步驟2中各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48h,用人工合成胰島素(100n M)刺激12小時(shí),用GOD-POD法測上清葡萄糖濃度,BCA法測板下層細(xì)胞蛋白濃度,蒽酮法測定細(xì)胞糖原含量,乳酸測定試劑盒測定乳酸生成量,丙酮酸激酶測試盒測定丙酮酸激酶活力,用糖原含量/蛋白含量(μmol·mg-1)表示細(xì)胞糖原合成量;在乳酸作用下,用上清葡萄糖生成量/蛋白濃度(mmol·mg-1)的值表示細(xì)胞糖異生量;在高糖環(huán)境(葡萄糖濃度11.1mmol/L)下,用乳酸生成量/蛋白濃度(mmol·mg-1)的值和丙酮酸激酶活力/蛋白濃度(U/gprot)表示細(xì)胞糖酵解量,從而觀察mi R-126在正常肝細(xì)胞含量不同時(shí),對細(xì)胞葡萄糖利用率、糖原合成、糖異生以及糖酵解作用的影響。結(jié)果:1.在無血清無抗生素的培養(yǎng)基中,轉(zhuǎn)染6小時(shí),熒光顯微鏡下觀察,FAM標(biāo)記的無意對照序列(NC-FAM、IN-NC-FAM)能夠有效轉(zhuǎn)染人正常肝細(xì)胞,且呈濃度依賴性,確定80n M為適宜轉(zhuǎn)染濃度。2.q RT-PCR結(jié)果顯示:mi R-126組與其他各組相比較,mi R-126組mi R-126相對表達(dá)量明顯高于其余的各實(shí)驗(yàn)組以及對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);In-mi R-126組、NC組、In-NC組、lip2000組與正常對照組相比較mi R-126的相對表達(dá)量變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.將各核苷酸序列轉(zhuǎn)染至對應(yīng)細(xì)胞后,mi R-126組較正常對照組葡萄糖消耗量下降(33.66±2.55 vs 59.12±4.03 P0.05),糖原合成量明顯下降(4.35±0.33 vs 8.42±0.56 P0.05),細(xì)胞乳酸生成量明顯下降(12.28±1.72 vs 22.51±1.25 P0.05),丙酮酸激酶活力下降(120.87±26.23 vs 277.39±57.60 P0.05),其余各組相比較差異不顯著;mi R-126組與正常對照組相比糖異生量增加(17.05±0.88 vs 13.05±0.41P0.05),In-mi R-126組與正常對照組相比較糖異生量下降(7.41±1.39 vs13.05±0.41 P0.05),其余各組相比較無顯著差異。結(jié)論:mi R-126在人正常肝細(xì)胞過表達(dá)時(shí),細(xì)胞葡萄糖利用率減少,對胰島素的敏感性降低,通過減少細(xì)胞糖原合成、增加糖異生、減少乳酸生成以及丙酮酸激酶活力的途徑調(diào)節(jié)肝臟葡萄糖代謝,可能增加肝糖輸出。
【關(guān)鍵詞】：microRNA126 人正常肝細(xì)胞株 葡萄糖代謝 糖尿病
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英文縮寫詞12-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-32
• 結(jié)果32-39
• 討論39-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 綜述 Micro RNA126的生物學(xué)研究進(jìn)展48-64
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 個(gè)人簡歷、在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64-65
• 致謝65-66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 胡燕;李永菊;陳超;朱順飛;郭萌萌;劉思靜;鄭靜;秦娜琳;徐林;;microRNA-126基因敲減小鼠的鑒定及其血糖水平變化[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年01期

2 錢榮立;金世鑫;;糖尿病分子生物學(xué)研究的新領(lǐng)域:微RNAs(miRNAs)與β細(xì)胞生物學(xué)、胰島素抵抗、糖尿病及其并發(fā)癥[J];中國糖尿病雜志;2011年11期

3 任彥紅;黃婷;時(shí)學(xué)秀;閆丹丹;栗夏連;;循環(huán)miRNA-126在2型糖尿病患者中的表達(dá)變化及其相關(guān)性研究[J];中國糖尿病雜志;2014年07期

  本文關(guān)鍵詞：MicroRNA126對人正常肝細(xì)胞葡萄糖代謝的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：349712