發(fā)布時(shí)間：2017-05-03 22:09

  本文關(guān)鍵詞：FKBP51在抵制高脂誘導(dǎo)肥胖中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的] 甾體激素在哺乳動(dòng)物的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、生殖等諸多方面都起著重要的調(diào)控作用,這些激素主要是通過(guò)與作為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄因子的特定甾體激素受體蛋白結(jié)合,從而達(dá)到調(diào)控目的基因表達(dá)的作用。糖皮質(zhì)激素受體(GR)屬于甾體激素受體超家族的成員之一,在機(jī)體內(nèi)廣泛表達(dá),并介導(dǎo)糖皮質(zhì)激素實(shí)現(xiàn)對(duì)機(jī)體行為及代謝等功能的調(diào)控,近年來(lái)的研究表明,GR對(duì)機(jī)體新陳代謝調(diào)控具有重要意義。FKBP51是一種具有肽基脯氨酰順-反異構(gòu)酶(PPIase)活性的免疫親和蛋白,它含有多肽重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域(TPR),能夠介導(dǎo)蛋白與蛋白之間的相互作用。它作為一種共伴侶蛋白,能夠直接與伴侶蛋白(熱休克蛋白Hsp90/70等)結(jié)合并參與激素-受體復(fù)合物的形成和調(diào)控。FKBP51對(duì)多種甾體激素受體轉(zhuǎn)錄活性起到調(diào)控作用,可負(fù)向調(diào)控糖皮質(zhì)激素受體。已有研究表明,FKBP51在脂肪生成中發(fā)揮重要的作用,且下丘腦中的FKBP51的高表達(dá)與肥胖有關(guān)。因此,我們通過(guò)對(duì)FKBP51基因敲除小鼠表型的分析,來(lái)探究FKBP51的缺失與肥胖的關(guān)系。[方法]通過(guò)對(duì)高脂誘導(dǎo)的FKBP51基因敲除小鼠表型的研究,來(lái)分析FKBP51基因的缺失對(duì)機(jī)體的影響。1)FKBP51基因敲除小鼠的表型分析及高脂喂養(yǎng)。將實(shí)驗(yàn)小鼠分為四組,分別為正常飲食野生型小鼠(N WT)、正常飲食FKBP51基因敲除小鼠(N KO)、高脂飲食野生型小鼠(HF WT)和高脂飲食FKBP51基因敲除小鼠(HF KO),分別測(cè)定四組小鼠4-10周齡的體重和攝食量；2)脂肪含量分析。為了驗(yàn)證HF KO和HF WT的脂肪含量,分別對(duì)兩組小鼠進(jìn)行核磁共振成像分析,并計(jì)算脂肪的相對(duì)面積；3)肝臟病理學(xué)分析。對(duì)四組小鼠肝臟切片,分別進(jìn)行HE染色、油紅O染色和電鏡分析,來(lái)研究小鼠肝臟組織病理學(xué)的變化；4)能量代謝水平分析。運(yùn)用MM-100代謝監(jiān)測(cè)系統(tǒng),對(duì)四組小鼠的代謝情況(02消耗量、C02產(chǎn)量、呼吸商和產(chǎn)熱量)監(jiān)測(cè)24小時(shí),記錄的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；5)RNA表達(dá)譜測(cè)序。分別提取四組小鼠肝臟組織的RNA,利用第二代測(cè)序技術(shù),對(duì)N WT、NKO、HF WT和HF KO的肝臟RNA進(jìn)行測(cè)序分析,以探尋FKBP51 KO小鼠與WT小鼠在正常飲食和高脂飲食條件下基因表達(dá)的差異；6)利用Real-time PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn),對(duì)RANseq中與肝脂脂類(lèi)代謝和自噬相關(guān)基因在肝臟中的表達(dá)情況進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證。7)脂肪誘導(dǎo)分化。對(duì)野生型和FKBP51基因敲除小鼠的永生化成纖維細(xì)胞(MEF)進(jìn)行脂肪誘導(dǎo)分化,觀察FKBP51缺失對(duì)體外脂肪分化的影響。[結(jié)果] 1)在高脂飼養(yǎng)條件下,FKBP51 KO和WT小鼠的攝食量基本相同,但基因敲除小鼠體重明顯低于野生型小鼠;2)通過(guò)核磁影像分析發(fā)現(xiàn)FKBP51 KO基因敲除小鼠高脂飲食后體內(nèi)脂肪明顯少于野生型小鼠；3)肝臟病理學(xué)分析發(fā)現(xiàn),FKBP51基因敲除小鼠高脂誘導(dǎo)后,肝臟中脂滴的積累明顯少于野生型小鼠,同時(shí)未出現(xiàn)脂肪肝；4)通過(guò)電鏡觀察發(fā)現(xiàn),在FKBP51KO小鼠肝臟中自噬小體增多,并通過(guò)Real-time PCR和免疫印跡得到驗(yàn)證；5)通過(guò)代謝籠分析發(fā)現(xiàn),FKBP51基因敲除小鼠代謝水平增強(qiáng)；6)RNAseq結(jié)果揭示FKBP51的缺失會(huì)引起一些能量代謝、脂質(zhì)代謝相關(guān)基因變化明顯；利用Real-time PCR和免疫印跡驗(yàn)證FKBP51KO小鼠肝臟中能量代謝和脂質(zhì)代謝相關(guān)酶ATPase、 LPL等表達(dá)上調(diào)；7)脂肪誘導(dǎo)分化后,FKBP51KOMEF細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯少于野生型MEF細(xì)胞。[結(jié)論]1)FKBP51基因敲除小鼠對(duì)高脂誘導(dǎo)的肥胖有抵制作用；2)FKBP51基因敲除小鼠肝臟中脂滴聚集較少,自噬小體增多；3)FKBP51基因敲除小鼠呼吸能量代謝水平較旺盛,脂質(zhì)代謝與能量代謝相關(guān)酶LPL、UCP-1、ATPase等表達(dá)增加；4)FKBP51基因敲除小鼠MEF細(xì)胞脂肪誘導(dǎo)分化受阻。
【關(guān)鍵詞】：FKBP51 基因敲除小鼠 能量代謝 肝臟病理學(xué) RNA-seq
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R589.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-15
• 實(shí)驗(yàn)材料15-22
• 實(shí)驗(yàn)方法22-37
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-59
• 討論59-63
• 結(jié)論63-64
• 英文縮略表64-65
• 參考文獻(xiàn)65-73
• 致謝73-74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ;Molecular mechanism and regulation of autophagy[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年12期

  本文關(guān)鍵詞：FKBP51在抵制高脂誘導(dǎo)肥胖中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：343846