本文關鍵詞：尿酸在氧化應激狀態(tài)下對血管內皮細胞損傷機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：尿酸是人體內嘌呤代謝的最終產物,隨著人們生活水平的提高、飲食條件的改善及環(huán)境與遺傳因素的改變,高尿酸血癥已成為威脅人類身體健康疾病之一。越來越多的流行病學研究發(fā)現(xiàn)尿酸的升高與心血管疾病、腎臟疾病以及代謝綜合征等密切相關。研究發(fā)現(xiàn)尿酸可為一種抗氧化物質,生理濃度下的尿酸對內皮細胞可起到一定的保護作用,也有研究證實高濃度的尿酸也會轉化為促氧化物質而對內皮細胞進行損害。那么輕度的尿酸升高是否也會影響內皮細胞的增殖及死亡,給予一定的氧化刺激后是否會加重內皮細胞的損傷,目前缺乏這方面的研究。通過對不同濃度的尿酸和氧化應激狀態(tài)下尿酸升高對內皮細胞損傷機制的研究,期望有助于探討臨床無癥狀高尿酸血癥或伴有高脂血癥、糖尿病等造成氧化應激狀態(tài)情況下尿酸升高是否要進行早期預防與治療。目的：1)通過不同濃度的尿酸(UA)及H202刺激體外培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)后的增殖情況,一氧化氮(NO)的合成,膜脂過氧化產物丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的分泌,觀察氧化應激狀態(tài)下UA升高對血管內皮細胞功能的影響；2)通過觀察氧化應激狀態(tài)下不同濃度UA對HUVECs p38MAPK蛋白表達的變化及使用p38MAPK特異性抑制劑SB203580干預后它們的改變,探討p38MAPK信號通路是否參與氧化應激狀態(tài)下UA對HUVECs損傷機制的研究。方法：1)以原代HUVECs 4-6代為實驗對象,設立單純尿酸組(0、4、6、8、10mg/dlUA)及尿酸+過氧化氫組(0、4、6、8、10mg/dl UA+100μmol/l H2O2)兩個實驗組。2)UA及H202刺激HUVECs 24h后,通過CCK-8法檢測HUVECs的活力,硝酸還原酶法檢測細胞培養(yǎng)上清液中NO的含量,化學發(fā)光法測定超氧化物歧化酶(SOD)水平,硫代巴比妥法測定細胞膜脂過氧化產物丙二醛(MDA)的含量；3) Western blot檢測氧化應激狀態(tài)下UA刺激HUVECs后p38MAPK蛋白的表達情況。結果：1)CCK-8結果測定顯示：UA(8、10mg/dl)組HUVECs活力較對照組(0 mg/d1)有顯著降低(P0.05); H202+UA (6、8、10mg/dl)組與對照組(H202+UA 0mg/dl)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2)MDA含量結果測定顯示：UA (8、10mg/dl)組HUVECs MDA含量較對照組(0 mg/dl)有顯著增高(P0.05); H2O2+UA (6、8、10mg/dl)組與對照組(H2O2+UA 0mg/dl)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3)SOD含量測定結果顯示：UA (8、10mg/dl)組HUVECs SOD含量較對照組(0 mg/d1)有顯著降低(P0.05); H202+UA (6、8、10mg/dl)組與對照組(H2O2+UA Omg/dl)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),4)Western blot測定結果顯示：1)不同濃度的UA (0、4、6、8、1mg/dl)刺激HUVECs后磷酸化p38MAPK (phosphorylation-p38MAPK p-p38MAPK)和p38MAPK蛋白表達雖隨著UA濃度的升高而增強,但均不明顯；與對照組Om/dl UA組相比,p值均0.05,差異無統(tǒng)計學意義；2)氧化應激狀態(tài)下不同濃度的UA隨著UA濃度的升高,p-p38MAPK蛋白表達逐漸增強,且與對照組Omg/dl UA組比較,6mg/dl、8mg/dl、10mg/dl UA組p值均0.05,具有統(tǒng)計學意義,而p38MAPK蛋白表達變化均不明顯,p值均0.05,無統(tǒng)計學意義；3)加入p38MAPK特異性抑制劑SB203580后,氧化應激狀態(tài)下的不同濃度UA組p-p38MAPK及p38MAPK蛋白表達均未有明顯變化(p0.05)；4)與對照組(8mg/dl UA組)相比,H202組及H202+UA+SB203580組p-p38MAPK和p38MAPK的蛋白表達p值均0.05,均無統(tǒng)計學意義；而H2O2+UA組p-p38MAPK蛋白表達p值0.05,有顯著性差異。結論：1)尿酸濃度達8mg/dl后,體外刺激24h就可損傷HUVECs,提示輕度的尿酸升高也會對HUVECs的功能造成一定的影響；2)H202刺激后UA濃度達6mg/dl時,就會引起細胞的損傷,提示氧化應激狀態(tài)下UA (6mg/dl)生理濃度下也會引起人血管內皮細胞的損傷；3)尿酸對HUVECs的損傷會引起p38MAPK蛋白表達增強,提示氧化應激狀態(tài)下尿酸升高對HUVECs的損傷可能部分與p38MAPK信號通路有關。
【關鍵詞】：尿酸 臍靜脈內皮細胞 氧化應激 p38MAPK
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R589.7
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 英文縮略詞表11-13
• 第一部分 不同濃度尿酸在氧化應激狀態(tài)下對HUVECs損傷機制研究13-38
• 前言13-14
• 實驗材料與方法14-23
• 結果23-28
• 討論28-34
• 結論34-35
• 參考文獻35-38
• 第二部分 p38MAPK通路與氧化應激狀態(tài)下尿酸對HUVECs損傷之間的關系38-55
• 前言38-39
• 實驗材料與方法39-45
• 結果45-49
• 討論49-52
• 結論52-53
• 參考文獻53-55
• 論文綜述55-65
• 參考文獻61-65
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表文章目錄65-66
• 致謝66

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本文編號：270914