本文關(guān)鍵詞：21-羥化酶缺陷癥基因診斷方法的建立及應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立一種熒光偏振檢測技術(shù)聯(lián)合直接測序法診斷先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥中21-羥化酶缺陷癥的新方法,并對中國人群中最常見的2種基因缺失和8種點突變進(jìn)行檢測。方法收集40例健康者及2例患者外周血,提取基因組DNA。設(shè)計通用引物,同時擴增CYP21A2和CYP21A1P等位基因片段,然后用序列特異的TAMRA熒光標(biāo)記探針對擴增產(chǎn)物進(jìn)行雜交檢測,利用熒光偏振儀檢測擴增雜交的熒光偏振值,確定是否存在該基因的缺失,同時用直接測序法驗證檢測結(jié)果;對Exon3Del 8bp(GAGACTAC)缺失進(jìn)行檢測時,將缺失的8個堿基設(shè)計在引物上,確保引物的特異性。同時根據(jù)CYP21A2基因與其假基因序列差異,設(shè)計5對特異性引物擴增CYP21A2基因,PCR后直接測序檢測中國人群中最常見的8種點突變,包括P30L、i2g、I172N、E6Cluster、V281L、920-921insT、Q218X、R356W。結(jié)果熒光偏振法未檢測到CYP21A2基因大片段缺失,檢測結(jié)果與直接測序法結(jié)果對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),一致率達(dá)100%,40例健康者未檢測到點突變,1例患者檢測出Exon1G56R,Exon7c.920-921InsT插入雜合突變,1例患者檢測出Exon4I172N、Exon8Q318X雜合突變。結(jié)論熒光偏振檢測法聯(lián)合直接測序法診斷21-OHD是一種高效的檢測手段,可以廣泛用于臨床,不僅能對患者基因突變類型進(jìn)行分析,在指導(dǎo)遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷方面亦發(fā)揮重要作用。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【關(guān)鍵詞】： 先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥 -羥化酶缺乏癥 熒光偏振 CYPA基因
【分類號】：R440;R586
【正文快照】： 先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥(CAH)是一組由于腎上腺皮質(zhì)激素合成途徑中的必需酶基因的缺陷所引起的一種常染色體隱性遺傳病,是引起兩性畸形最常見的病因[1]。其中,90%~95%的CAH由21-羥化酶基因缺陷所致[2]。由21-羥化酶缺陷引起的先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥的發(fā)病率為1∶16 000~1∶20

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本文編號：269259