本文關(guān)鍵詞：腺苷在視網(wǎng)膜新生血管形成中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景： 視網(wǎng)膜新生血管性疾病如糖尿病性視網(wǎng)膜病變(proliferative diabetic retinopathy，PDR)、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞等造成的滲出、出血等病理改變可導(dǎo)致嚴(yán)重的視力損害，甚至失明。對于此類疾病，目前應(yīng)用最廣的抗VEGF治療和其它方法均不足以持續(xù)高效抑制血管生成，而玻璃體切除手術(shù)也只是對其造成視網(wǎng)膜脫離等并發(fā)癥的無奈之舉。視網(wǎng)膜新生血管的形成是一個非常復(fù)雜的過程，在此過程中，腺苷具有重要作用。研究表明，腺苷或其擬似物可以通過上調(diào)VEGF、IGF-1、bFGF、IL-8、Ang-2等促血管生成因子，以及下調(diào)抑制血管生成因子，如TNF-a等，來誘導(dǎo)血管新生。這就提示，腺苷作為體內(nèi)廣泛存在的生理調(diào)質(zhì)，對于視網(wǎng)膜血管生成可能具有重要啟動作用，因此，開展從源頭上抑制視網(wǎng)膜新生血管產(chǎn)生的研究，具有重要意義。 目的： 本研究擬通過探討臨床視網(wǎng)膜新生血管性疾病患者玻璃體腔腺苷濃度與血管生成間的關(guān)系，結(jié)合動物實驗明確阻斷腺苷作用對于視網(wǎng)膜血管新生的抑制效應(yīng)，從而證實腺苷具有促進(jìn)視網(wǎng)膜新生血管形成的作用，為視網(wǎng)膜新生血管性疾病的發(fā)病機制和干預(yù)策略提供新的研究方向和治療靶點。 方法： 1.收集在本院眼科行玻璃體切除手術(shù)的患者共30例，根據(jù)患者有無視網(wǎng)膜新生血管，分為增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變(PDR共16例16眼）組和對照組（孔源性視網(wǎng)膜脫離、黃斑前膜、特發(fā)性黃斑裂孔共14例14眼）。于患者玻璃體切除手術(shù)中收集玻璃體、視網(wǎng)膜增殖膜及黃斑前膜。應(yīng)用HPLC檢測患者玻璃體腺苷的濃度和誘導(dǎo)腺苷生成的關(guān)鍵酶-CD73的活性，Western Blot檢測膜樣本中CD73蛋白的表達(dá)。 2.選用C57BL/6J健康新生鼠建立OIR（Oxygen-induced retinopathy，氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變）動物模型，出生后第7天（P7）放入高氧環(huán)境中連續(xù)飼養(yǎng)5天，然后置入空氣中繼續(xù)飼養(yǎng)。正常對照組小鼠在空氣中飼養(yǎng)。模型組和正常對照組小鼠于P17天行DiI心臟灌注視網(wǎng)膜鋪片，熒光顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜新生血管形態(tài)；視網(wǎng)膜組織切片HE染色后計數(shù)突破視網(wǎng)膜前膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)目。于P13、P15、P17天提取兩組小鼠視網(wǎng)膜組織，高效液相色譜儀（HPLC）檢測視網(wǎng)膜腺苷濃度；Western Blot檢測視網(wǎng)膜CD73的表達(dá)差異。隨機選取模型組小鼠在出氧倉后連續(xù)5天腹腔內(nèi)注射非選擇性腺苷受體拮抗劑XAC（Xanthine amine congener,黃嘌呤胺同源物），陰性對照組小鼠腹腔內(nèi)注射同等劑量的0.1%DMSO（Dimethyl Sulfoxide,二甲基亞砜），觀察XAC對視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。 結(jié)果： 1. HPLC檢測人眼玻璃體腺苷濃度在PDR組表達(dá)高于對照組[(63.50±11.60) μmol/Lvs (30.34±6.41)μmol/L]，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）。 2. PDR組患者的年齡、糖尿病病程、術(shù)前空腹血糖均與玻璃體腺苷濃度無相關(guān)關(guān)系（r=0.255，P=0.340；r=0.318，P=0.230；r=0.341，P=0.197）。 3. Western Blot檢測增殖膜CD73酶在PDR組表達(dá)高于對照組（0.84±0.08vs0.39±0.05），差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.002）。 4. HPLC檢測2組臨床膜樣本E-ADO的生成量，結(jié)果顯示反應(yīng)20min時，PDR組生成E-ADO的量較對照組高（54.1±7.1vs21.9±2.9），差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.002)。 5. P17行心臟灌注視網(wǎng)膜鋪片結(jié)果顯示：模型組小鼠視網(wǎng)膜自視乳頭向中周部大片無灌注區(qū)，視網(wǎng)膜大血管走行迂曲，不規(guī)則擴張，可見新生血管叢；正常對照組小鼠視網(wǎng)膜血管未見明顯異常。視網(wǎng)膜組織切片HE染色結(jié)果顯示：模型組小鼠可見大量突破視網(wǎng)膜前膜血管內(nèi)皮細(xì)胞核，，與正常對照組P17小鼠相比其突破視網(wǎng)膜前膜血管內(nèi)皮細(xì)胞核計數(shù)具有顯著性差異[(41.7±6.1)個/片vs (2.7±1.9)個/片；p=0.000]。 6.正常對照組小鼠在P13、P15、P17天每毫克視網(wǎng)膜腺苷含量分別為：（0.048±0.008）ng、（0.069±0.004）ng、（0.52±0.007）ng；OIR模型組小鼠在P13、P15、P17天每毫克視網(wǎng)膜腺苷含量分別為：（0.839±0.043）ng、（1.066±0.108）ng、（1.369±0.107）ng。在P13、P15、P17天，兩組視網(wǎng)膜組織腺苷水平相比，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。 7. OIR模型組和正常對照組相比，CD73蛋白在P13、P15、P17天時OIR模型組視網(wǎng)膜組織中均表達(dá)上調(diào)（P=0.003；P=0.001；P=0.000）。 8. P17行DiI心臟灌注視網(wǎng)膜鋪片結(jié)果顯示：XAC注射組小鼠視網(wǎng)膜較DMSO注射組視網(wǎng)膜無灌注區(qū)及新生血管叢數(shù)量減少。視網(wǎng)膜組織切片HE染色結(jié)果顯示：XAC注射組突破視網(wǎng)膜前膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)目較DMSO注射組減少，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義[（17.3±3.9）個/片vs（38.1±5.6）個/片；p=0.000]。 結(jié)論： 1.視網(wǎng)膜新生血管性疾病患者玻璃體及增殖膜腺苷濃度和CD73表達(dá)均高于對照組，提示腺苷及誘導(dǎo)其生成的酶CD73可能參與了視網(wǎng)膜新生血管性疾病的病理過程。 2.動物實驗進(jìn)一步證實腺苷及CD73蛋白參與了鼠視網(wǎng)膜新生血管的發(fā)病過程。腺苷穩(wěn)態(tài)失衡可能是視網(wǎng)膜新生血管生成的啟動因素。 3.腺苷受體拮抗劑可抑制OIR模型視網(wǎng)膜新生血管的形成，提示腺苷受體有可能成為視網(wǎng)膜新生血管疾病的治療靶點。
【關(guān)鍵詞】：腺苷 CD73 視網(wǎng)膜新生血管 增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變 氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R774.1;R587.2
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• Abstract6-9
• 摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變患者視網(wǎng)膜新生血管與玻璃體腺苷濃度關(guān)系的研究14-27
• 2.1 研究對象與方法14-23
• 2.2 結(jié)果23-25
• 2.3 討論25-27
• 第三章 腺苷在視網(wǎng)膜新生血管形成中的作用研究27-41
• 3.1 材料和方法27-33
• 3.2 結(jié)果33-38
• 3.3 討論38-41
• 全文結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 文獻(xiàn)綜述46-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章55-56
• 致謝56

【參考文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王麗;CD73在腫瘤血管新生中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

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本文編號：264507