本文關(guān)鍵詞：亮氨酸對2型糖尿病的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南京醫(yī)科大學(xué)》 2015年

PKR激活通過SUMO化修飾上調(diào)P53抑制胰島β細(xì)胞增殖

宛曉夢  

【摘要】：目的:PKR(double-stranded RNA-dependent protein kinase)是雙鏈RNA依賴性蛋白激酶,參與多種刺激因子介導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯和生長抑制。PKR的激活能通過抑制胰島β細(xì)胞增殖和阻滯細(xì)胞周期G1期參與2型糖尿病的發(fā)病過程。研究表明,細(xì)胞周期抑制蛋白P53的上調(diào)是PKR激活誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞增殖抑制的重要信號分子,而其調(diào)控機(jī)制并不清楚。本研究旨在探討PKR通過SMUO化上調(diào)P53途徑誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞周期阻滯的調(diào)控機(jī)制。方法:采用轉(zhuǎn)染wt-PKR質(zhì)粒構(gòu)建PKR過表達(dá)的MIN-6(小鼠)胰島β細(xì)胞系。使用低濃度BEPP(1μM),糖脂毒性(16.7m M葡萄糖+0.1m M棕櫚酸)或前炎癥因子TNF-α(80n M)刺激MIN-6細(xì)胞,誘導(dǎo)PKR特異性激活。Ed U熒光標(biāo)記、Hoechst 33258染色和流式細(xì)胞術(shù)分別評價(jià)胰島β細(xì)胞的增殖以及細(xì)胞周期進(jìn)程的變化。免疫印跡檢測p-PKR和p-e IF-2α蛋白水平來分析PKR是否激活。免疫共沉淀技術(shù)檢測PKR-Ubc9,P53-Ubc9及P53-SUMO-1蛋白結(jié)合水平繼而分析P53的SUMO化修飾,并采用免疫印跡檢測SUMO-1,Ubc9及P53蛋白表達(dá),對P53進(jìn)行蛋白半定量分析,且運(yùn)用免疫熒光觀察PKR和Ubc9的細(xì)胞共定位。最后給予PKR抑制劑2-AP,神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑FUMO B1及SUMO化修飾抑制劑Spectomycin B1預(yù)處理MIN-6細(xì)胞,重復(fù)上述實(shí)驗(yàn),探討其相關(guān)分子機(jī)制。結(jié)果:在PKR過表達(dá)的MIN-6細(xì)胞中,低濃度BEPP、糖脂毒性及前炎癥因子TNF-α均能特異性激活PKR,使PKR和e IF-2α發(fā)生磷酸化。PKR的激活能夠抑制胰島β細(xì)胞增殖,并使其細(xì)胞周期阻滯于G1期。其周期阻滯的主要機(jī)制是激活的PKR與Ubc9相互結(jié)合,激活的Ubc9能作為SUMO E2連接酶誘導(dǎo)P53發(fā)生SUMO化修飾。同時(shí)發(fā)現(xiàn)PKR和Ubc9主要共定位于胞漿。Spectomycin B1能抑制P53的SUMO化修飾和蛋白水平上調(diào)。同樣,給予PKR抑制劑或神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑FUMO B1也可以通過抑制PKR活化和第二信使神經(jīng)酰胺積累來抑制P53的SUMO化修飾。結(jié)論:本研究揭示了2型糖尿病存在的誘發(fā)風(fēng)險(xiǎn)因素,能激活ceramide/PKR/Ubc9信號通路,通過促進(jìn)P53的SUMO化修飾上調(diào)P53蛋白水平和蛋白穩(wěn)定性,抑制胰島β細(xì)胞周期G1期和細(xì)胞增殖,參與了機(jī)體胰島β細(xì)胞整體功能障礙調(diào)控,而其功能失代償促進(jìn)了2型糖尿病的發(fā)生和病程發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1
【目錄】：

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