本文關(guān)鍵詞：M3受體、MLCK及p-MLC在1型糖尿病小鼠膀胱組織中的表達(dá)及意義

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【摘要】：目的:糖尿病(diabetes mellitus,DM)是由多種病因所引起的以慢性血糖升高為主要表現(xiàn)的代謝性疾病,是由于胰島素分泌不足和(或)其作用缺陷引起的。糖尿病隨著病程的進(jìn)展會(huì)出現(xiàn)心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及泌尿系統(tǒng)等多系統(tǒng)慢性進(jìn)行性病變。糖尿病泌尿系統(tǒng)發(fā)癥中最常見的是糖尿病膀胱功能障礙(DBD)。糖尿病膀胱功能障礙(DBD)目前是指一組臨床癥候群,主要包括儲(chǔ)尿期及排尿期功能障礙,臨床表現(xiàn)有膀胱過度活動(dòng)(OAB)、膀胱感覺減退、排尿后膀胱殘余尿量增加和逼尿肌收縮力下降。因其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,尚未被完全闡明,故該病診治目前仍比較困難。毒蕈堿型受體M3受體與乙酰膽堿(ACh)結(jié)合后會(huì)直接引起平滑肌細(xì)胞興奮收縮。肌球蛋白輕鏈激酶(myosin light chain kinase,MLCK),是調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞收縮的關(guān)鍵蛋白。目前普遍認(rèn)為,副交感神經(jīng)釋放的乙酰膽堿與膀胱平滑肌細(xì)胞上M3受體結(jié)合后使胞漿內(nèi)游離鈣濃度迅速升高。升高的鈣離子與胞漿中無(wú)活性鈣調(diào)蛋白(calmodulin,Ca M)結(jié)合后成為具有活性的Ca~(2+)-Ca M復(fù)合體并使細(xì)胞內(nèi)MLCK激活,被激活的MLCK使肌球蛋白輕鏈(MLC)磷酸化(即p-MLC),從而使肌球蛋白頭部Mg~(2+)-ATP酶被激活,此酶水解ATP產(chǎn)生的能量使肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白相互作用,從而引發(fā)膀胱平滑肌收縮。這一機(jī)制在糖尿病小鼠模型中是否發(fā)生障礙,目前國(guó)內(nèi)外還未見相關(guān)研究報(bào)道。我們使用C57BL/6小鼠建立1型糖尿病模型,應(yīng)用免疫組化及Western blot的實(shí)驗(yàn)方法研究M3受體、MLCK及p-MLC在小鼠膀胱組織中的表達(dá),從而探究DBD的發(fā)病機(jī)制。方法:1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:36只C57BL/6小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后被隨機(jī)分為6組,即正常對(duì)照組A1、B1、C1,1型糖尿病組A2、B2、C2,每組各6只。A1及A2組、B1及B2組、C1及C2組分別于糖尿病病程8周、20周及24周時(shí)處死小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2 1型糖尿病小鼠模型制備:將小鼠禁食8小時(shí)后稱取其體重,按0.2mg/g的劑量腹腔注射已配制好的STZ溶液,72小時(shí)后尾靜脈取血使用血糖儀及血糖試紙監(jiān)測(cè)小鼠的血糖變化,空腹血糖連續(xù)3次檢測(cè)大于18mmol/l即認(rèn)定為1型糖尿病模型制備成功。3于糖尿病病程8周、20周及24周時(shí)處死小鼠取出膀胱組織,進(jìn)行膀胱組織的固定、包埋和切片。4蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosinstaining,HE)觀察小鼠膀胱組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。5免疫組化檢測(cè)小鼠膀胱組織上M3受體、MLCK、p-MLC的表達(dá)及定量分析。6 Western blot檢測(cè)小鼠膀胱組織上M3受體、MLCK、p-MLC的表達(dá)及定量分析。結(jié)果:1給予C57BL/6小鼠腹腔注射STZ后,72小時(shí)后尾靜脈取血測(cè)空腹血糖,血糖均大于18mmol/L,所以認(rèn)定1型糖尿病小鼠模型造模成功。在第8周(P0.05)、20周(P0.05)及24周(P0.05)時(shí)分別檢測(cè)小鼠體重后發(fā)現(xiàn),和正常對(duì)照組小鼠相比,1型糖尿病組小鼠體重均明顯下降。經(jīng)STZ腹腔注射處理的C57BL/6小鼠血糖與正常對(duì)照組小鼠相比,于第8周(P0.05)、20周(P0.05)及24周(P0.05)時(shí)顯著升高。2病理形態(tài)學(xué)觀察與正常對(duì)照組相比,1型糖尿病組小鼠膀胱尿路上皮完整,細(xì)胞排列整齊,無(wú)上皮糜爛及潰瘍形成,膀胱平滑肌細(xì)胞無(wú)明顯變性、肥大及萎縮。3免疫組化實(shí)驗(yàn)3.1 M3受體主要在小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞胞漿、膀胱尿路上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá),部分膀胱平滑肌細(xì)胞膜上可見表達(dá)。免疫組化定量分析顯示,糖尿病病程8周、20周及24周時(shí),M3受體在1型糖尿病小鼠膀胱平滑肌中表達(dá)均高于正常對(duì)照組(P0.05),M3受體在1型糖尿病小鼠膀胱尿路上皮中表達(dá)在糖尿病病程8周時(shí)高于正常對(duì)照組(P0.05),在糖尿病病程20周和24周時(shí)與正常對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.2 MLCK主要在小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞及膀胱尿路上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá),在膀胱尿路上皮細(xì)胞下層中毛細(xì)血管內(nèi)皮也可見表達(dá);免疫組化定量分析顯示,糖尿病病程8周、20周及24周時(shí),MLCK在1型糖尿病小鼠膀胱平滑肌中表達(dá)均高于正常對(duì)照組(P0.05),在1型糖尿病小鼠膀胱尿路上皮中表達(dá)與正常對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.3 p-MLC主要在小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞及膀胱尿路上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá),在膀胱尿路上皮細(xì)胞下層中毛細(xì)血管內(nèi)皮也可見表達(dá);免疫組化定量分析顯示,糖尿病病程8周、20周及24周時(shí),p-MLC在1型糖尿病小鼠膀胱平滑肌中表達(dá)均高于正常對(duì)照組(P0.05),在1型糖尿病小鼠膀胱尿路上皮中表達(dá)與正常對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4 Western blot實(shí)驗(yàn)4.1 M3受體在1型糖尿病小鼠膀胱組織中的表達(dá)于糖尿病病程8周、20周及24周時(shí)均高于正常對(duì)照組(P0.05)。4.2 MLCK在1型糖尿病小鼠膀胱組織中的表達(dá)于糖尿病病程8周、20周及24周時(shí)均高于正常對(duì)照組(P0.05)。4.3 p-MLC在1型糖尿病小鼠膀胱組織中的表達(dá)于糖尿病病程8周、20周及24周時(shí)均高于正常對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論:1糖尿病病程8周、20周及24周時(shí),M3受體、MLCK及p-MLC在1型糖尿病小鼠膀胱組織中表達(dá)均高于正常對(duì)照組,且主要在膀胱平滑肌細(xì)胞中表達(dá)增高,表明在糖尿病發(fā)病過程中,M3受體介導(dǎo)的膀胱平滑肌細(xì)胞收縮機(jī)制被激活。2糖尿病病程8周時(shí),M3受體、MLCK及p-MLC在1型糖尿病小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞中表達(dá)增高,理論上可引起膀胱平滑肌收縮增強(qiáng),這可能是DBD早期膀胱過度活動(dòng)(OAB)產(chǎn)生的原因之一。3糖尿病病程20周及24周時(shí),M3受體、MLCK及p-MLC在1型糖尿病小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞中表達(dá)增高,這與DBD進(jìn)展期膀胱收縮功能障礙的表現(xiàn)不平行,考慮此時(shí)三者表達(dá)增高為膀胱平滑肌細(xì)胞代償性變化,但DBD的發(fā)病為多種因素所致,最終膀胱平滑肌收縮功能隨著糖尿病的進(jìn)展會(huì)出現(xiàn)失代償變化,具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 糖尿病膀胱功能障礙 M3受體 MLCK p-MLC 免疫組化
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R694
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-26
• 結(jié)果26-30
• 附圖30-43
• 附表43-46
• 討論46-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 綜述 糖尿病膀胱功能障礙的研究進(jìn)展53-66
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 致謝66-67
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 高宏飛;王東文;;2型糖尿病膀胱重構(gòu)的受體機(jī)制研究[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2013年06期

2 雙衛(wèi)兵;王東文;吳博威;;糖尿病大鼠逼尿肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2006年04期

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本文編號(hào)：597143