本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞提取的微囊對大鼠腎缺血再灌注損傷腎組織中HIF-1α表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的:腎缺血再灌注損傷(Renal ischemia reperfusion injury,RIRI)是急性腎動脈阻斷和腎臟移植等臨床治療過程中比較常見的病理生理過程,為腎移植、休克腎、腎部分切除、腎盂積水等疾病的常見并發(fā)癥。缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxiainduciblefactor,HIF-1)是一種缺氧條件下于人和哺乳動物體內(nèi)廣泛存在的轉(zhuǎn)錄因子,可以激活許多缺氧反應(yīng)性基因的表達(dá),從而維持細(xì)胞在缺血缺氧狀態(tài)下的生存。作為HIF-1活性的主要控制亞基,HIF-1α在缺血再灌注組織中的表達(dá)頗受關(guān)注。間充質(zhì)干細(xì)胞能夠通過旁分泌或內(nèi)分泌的方式來減輕急慢性腎損害,而目前微囊被人們認(rèn)為是細(xì)胞間彼此交流的重要媒介,能發(fā)揮和干細(xì)胞類似的腎保護(hù)功能。我們實驗小組前期的實驗發(fā)現(xiàn)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)提取的微囊(microvesicles,MVs)對急性腎損傷有保護(hù)作用,然而其具體機制尚不完全清楚。因此本實驗希望通過觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞提取的微囊對大鼠腎缺血再灌注損傷后腎組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)表達(dá)的影響,初步探討HIF-1α在人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞提取的微囊發(fā)揮腎保護(hù)作用中可能的機制。方法:健康成年SD雄性大鼠30只,隨機分為假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(ischemia-reperfusion ijury group以下稱IRI組)和微囊治療組(MVs treatment group,以下稱MVs組),每組10只。采用右腎切除左腎缺血的方法制備腎臟缺血再灌注損傷模型,術(shù)中三組大鼠均切除右腎,IRI組及MVs組術(shù)中予動脈夾夾閉左腎動脈45min后松開,假手術(shù)組模擬手術(shù)操作過程但不夾閉左腎動脈。MVs組手術(shù)同時經(jīng)尾靜脈給予含100ug蛋白量的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HMSCs)提取的MVs;,缺血再灌注組及Sham組術(shù)中經(jīng)尾靜脈注射等容量生理鹽水;24h后急性處死大鼠立即通過下腔靜脈采血,檢測血Scr、BUN含量并同時切除左腎,取二分之一左腎置入4%多聚甲醛液中固定,以便進(jìn)行切片PAS染色;二分之一左腎保存于-80℃冰箱中,以便采用weston-blot法進(jìn)行檢測各組腎組織HIF-1α表達(dá)水平。結(jié)果:與Sham組相比,IRI組腎臟病理損傷較重,表現(xiàn)為不同程度腎小球、腎間質(zhì)充血,腎小管上皮細(xì)胞水腫、細(xì)胞內(nèi)玻璃樣變及脂肪變性,腎小管腔內(nèi)蛋白管型明顯,HIF-1α表達(dá)及血Scr、BUN水平表達(dá)明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而MVs組與Sham組相比較腎臟病理損傷略加重,血Scr、BUN水平表達(dá)略有升高,HIF-1α表達(dá)略有下降,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與IRI組比較,MVs組腎臟病理損傷明顯減輕,表現(xiàn)為個別標(biāo)本存在蛋白管型,輕度水腫,血Scr、BUN水平顯著降低,HIF-1α表達(dá)明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.缺血再灌注損傷后腎組織HIF-1α的表達(dá)明顯升高2.HUMSCs提取的MVs可以顯著改善大鼠腎缺血再灌注腎損傷,具有腎保護(hù)作用3.HUMSCs提取的MVs能夠降低缺血腎組織中HIF-1α的表達(dá)4.HIF-1α可能可以作為一個評估腎損傷程度的檢測指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：腎缺血再灌注損傷 缺氧誘導(dǎo)因子-1α 微囊
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 中英文名詞對照12-13
• 前言13-15
• 第一章 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞提取的微囊的獲取和大鼠腎缺血再灌注模型的建立15-23
• 1.1 緒論15
• 1.2 材料與方法15-20
• 1.2.1 臍帶的獲取15
• 1.2.2 主要試劑15-16
• 1.2.3 主要儀器16-17
• 1.2.4 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞微囊的獲取17
• 1.2.5 細(xì)胞的傳代17-18
• 1.2.6 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇18
• 1.2.7 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞微囊透射電鏡檢測18
• 1.2.8 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的微囊的表面marker鑒定18-19
• 1.2.9 大鼠腎缺血再灌注模型的建立19-20
• 1.3 結(jié)果20-21
• 1.3.1 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)20
• 1.3.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的微囊透射電鏡檢測20-21
• 1.3.3 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的微囊表面marker流式分析鑒定21
• 1.4 討論21-22
• 1.5 結(jié)論22-23
• 第二章 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞提取的微囊對大鼠腎缺血再灌注損傷腎組織中HIF-1α表達(dá)的影響23-36
• 2.1 緒論23-24
• 2.2 實驗方法24-29
• 2.2.1 實驗動物24-25
• 2.2.2 主要試劑25-26
• 2.2.3 主要儀器26
• 2.2.4 各組大鼠的治療干預(yù)及腎臟標(biāo)本的取材與固定26-27
• 2.2.5 腎臟標(biāo)本PAS染色：27
• 2.2.6 腎臟標(biāo)本W(wǎng)estern Blot檢測27-28
• 2.2.7 腎臟組織中PKH-26 標(biāo)記微囊的追蹤28
• 2.2.8 腎功能檢測情況28-29
• 2.2.9 統(tǒng)計學(xué)處理29
• 2.3 結(jié)果29-32
• 2.3.1 各組大鼠腎臟組織PAS染色29-30
• 2.3.2 各組大鼠腎功能及HIF-α表達(dá)的檢測30-31
• 2.3.3 尾靜脈注射臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的微囊后在大鼠腎內(nèi)的追蹤31-32
• 2.4 討論32-35
• 2.5 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 致謝41

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本文編號：483652