研究背景及目的： 誘導多能干細胞（Induced pluripotent stem cells，iPS）是目前干細胞與組織再生研究領域的一項重大突破，因為其解決了胚胎干細胞來源有限和倫理學障礙的難題，在醫(yī)學領域展示了廣闊的應用前景。腎臟疾病發(fā)展到終末期都需要腎移植等替代治療，干細胞移植是治療腎臟疾病的理想治療方式，但有關iPS細胞在腎臟再生領域的研究較少。本文旨在建立iPS細胞向腎臟前體細胞定向分化的體外誘導培養(yǎng)技術體系，觀察iPS細胞來源的腎臟前體細胞在動物模型體內腎臟組織中的存活及分化能力，以及對大鼠腎缺血再灌注損傷的修復作用，探討其作用機制，為iPS細胞在腎臟疾病方面的再生治療提供實驗依據(jù)。 方法： 1體外誘導iPS細胞向腎臟前體細胞分化 1) iPS細胞的培養(yǎng)：從胎鼠獲得小鼠胚胎成纖維細胞（mouse embryonic fibroblasts，MEF），傳至第3代，用γ射線輻照處理后凍存。MEF作為飼養(yǎng)層細胞，iPS細胞接種在飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)，正常傳代、擴增。 2)擬胚體（embryonic body，EB）的培養(yǎng)：iPS細胞用去除白血病抑制因子（leukemiainhibi...

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1PCR循環(huán)示意圖

上游引物（10μM）0.8μl0.4μM下游引物（10μM）0.8μl0.4μM樣品溶液2μlTotalvolume20μl每個指標在定量時均進行三復孔重復，進一步保證結果的準確。2)步驟1配置的PCR反應溶液置于RealtimePCR儀上進行....

圖1-2iPS細胞培養(yǎng)及誘導過程中的細胞形態(tài)學觀察（相差顯微鏡下觀察：AiPS細胞在飼養(yǎng)層細胞上生長；B懸浮培養(yǎng)第二天的EB；CEB貼壁誘導培養(yǎng)第一天；DEB誘導培養(yǎng)第三天；EREGM誘導培養(yǎng)第一天；FREGM誘導培養(yǎng)第五天

29圖1-2iPS細胞培養(yǎng)及誘導過程中的細胞形態(tài)學觀察顯微鏡下觀察：AiPS細胞在飼養(yǎng)層細胞上生長；B懸浮培養(yǎng)第二天的E培養(yǎng)第一天；DEB誘導培養(yǎng)第三天；EREGM誘導培養(yǎng)第一天；FREG。×100）Cellmorphologicalobservatio....

圖1-73組誘導培養(yǎng)的細胞中腎臟發(fā)育調控因子的轉錄水平變化

1-73組誘導培養(yǎng)的細胞中腎臟發(fā)育調控因子的轉錄水平變化igure1-7Transcriptionallevelchangesofregulatoryfactorsinvolvedinkidneydevelopmentinnductioncultu....

圖1-8流式細胞技術檢測3組中Pax2、Bry、WT1、E-cadherin、CD24陽性細胞的比例Figure1-8FlowcytometrytechnologydetectstheproportionofPax2+、Bry+、WT1+、E-cadherin+andCD24+cellsamongthreeGroups.討論

321-8流式細胞技術檢測3組中Pax2、Bry、WT1、E-cadherin、CD24陽性細胞的比例igure1-8FlowcytometrytechnologydetectstheproportionofPax2+、Bry+、WT1+、E-cad....

本文編號：3973164