目的:觀察補體C3在糜酶促進腎間質纖維化中的作用。方法:第一部分:C3基因敲除對單側輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠的影響。建立UUO小鼠模型,將12只野生型C57BL/6小鼠隨機分為WTcontrol組和WTuuo組,將12只C3基因敲除(C3 gene knockout,C3KO)的C57BL/6小鼠隨機分為C3KOcontrol組和C3KOuuo組。第二部分:糜蛋白酶抑制劑chymostatin對UUO小鼠的影響。將18只野生型C57BL/6小鼠隨機分為WTcontrol組、WTuuo組和WTuuo+chymostatin組。其中WTuuo+chymostatin組在術后第1天至第14天腹腔注射10mg/Kg的chymostatin。所有小鼠均在第14天處死,取術側腎組織,用Masson染色法觀察腎間質纖維化程度;免疫組化對C3、胰蛋白酶(tryptase)、血管緊張素II(angiotensin II,Ang II)、轉化生長因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基質金屬蛋白...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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英文摘要
前言
材料
    1.1 實驗對象
    1.2 主要試劑
    1.3 主要實驗儀器及耗材
    1.4 各種緩沖液配制
方法
    2.1 動物培養(yǎng)
    2.2 C3 鼠尾基因組的提取及小鼠基因組的鑒定
    2.3 UUO小鼠模型的建立及組織獲取
    2.4 HE染色與腎小管-間質損傷評估
    2.5 腎臟纖維化的半定量評估：Masson三色染色法
    2.6 腎組織相關指標免疫熒光、免疫組化檢測
    2.7 腎組織 chymase 活性測定
    2.8 腎組織 renin 基因表達 Q-PCR 測量
    2.9 腎組織目的蛋白western blot檢測
    2.10 腎組織目的蛋白El ISA檢測
結果
    第一部分：C3缺陷小鼠對UUO小鼠的影響
        1. 腎臟病理改變
            1.1 腎小管-間質損傷
            1.2 腎小管-間質損傷指數(shù)評分
            1.3 膠原纖維沉積
        2. 腎組織C3/C3a表達
            2.1 腎組織C3表達
            2.2 腎組織C3a表達
        3. 腎組織MC浸潤結果
            3.1 腎組織tryptase、chymase陽性細胞檢測
            3.2 腎組織chymase蛋白表達
        4. 腎組織RAS激活
            4.1 腎組織renin表達
                4.1.1 腎組織renin mRNA表達
                4.1.2 腎組織renin蛋白表達
            4.2 腎組織Ang II表達
        5．腎組織TGF-β1 表達
        6．腎組織MMP9表達
    第二部分：糜酶抑制劑對UUO小鼠的影響
        7. 腎臟病理改變
            7.1 腎小管-間質損傷
            7.2 腎小管-間質損傷指數(shù)評分
            7.3 膠原纖維沉積
        8. 腎組織chymase活性測試
        9. 腎組織Ang II表達
        10．腎組織TGF-β1 表達
        11．腎組織MMP9表達
討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝



本文編號：3968520