目的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究Pygo2在腎癌OS-RC-2細(xì)胞增值、侵襲性發(fā)生的作用，體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證Pygo2在腫瘤生長(zhǎng)的作用以及與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 方法通過慢病毒介導(dǎo)三質(zhì)粒重組，建立Pygo2沉默組,Pygo2過表達(dá)組以及相應(yīng)的對(duì)照組。利用慢病毒感染腎癌OS-RC-2細(xì)胞，并用WesternBlot檢測(cè)感染Pygo2改變的效率。通過MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)各組細(xì)胞的增值能力。Transwell實(shí)驗(yàn)研究Pygo2在侵襲方面的作用。通過篩選細(xì)胞建立穩(wěn)定細(xì)胞系，并將4種腎癌OS-RC-2細(xì)胞植于裸鼠腋下，連續(xù)觀察裸鼠皮下腫瘤及肺部轉(zhuǎn)移瘤的生長(zhǎng)情況。HE染色觀察肺部轉(zhuǎn)移瘤情況。免疫組化實(shí)驗(yàn)測(cè)定各組腫瘤組織的侵襲性蛋白（MMP-9、MMP-7和VEGF）。 結(jié)果Pygo2的下調(diào)，腎癌OS-RC-2細(xì)胞增值能力和侵襲性明顯降低。成功篩選出Pygo2shRNA（Pygo2的抑制組）、Pygo2scrRNA(空載體）、GFP（對(duì)照組）和Pygo2OE（Pygo2的過表達(dá)）的穩(wěn)定感染細(xì)胞株，并成功構(gòu)建裸鼠荷瘤模型，Pygo2shRNA組的腫瘤生長(zhǎng)明顯受到抑制，Pygo2OE組肺部有轉(zhuǎn)移瘤。免疫組化實(shí)驗(yàn)...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3-1各組Pygo2蛋白質(zhì)表達(dá)情況

圖3-1各組Pygo2蛋白質(zhì)表達(dá)情況gure3-1WecanseethatPygo2proteinsuppressiongroupoup,wh....

圖3-2抑制Pygo2對(duì)OS-RC-2增值的影響

圖3-1各組Pygo2蛋白質(zhì)表達(dá)情況Figure3-1WecanseethatPygo2proteinsuppressiongroupislo....

圖3-3抑制Pygo2對(duì)細(xì)胞集落形成的影響

測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與Pygo2OE、GFP及Pygo2scrRNA相比較,Pygo2顯受到抑制。（P<0.01）隆形成（colonyformati....

圖3-4抑制Pygo2對(duì)細(xì)胞侵襲性的影響

如果抑制Pyo2的表達(dá)，細(xì)胞侵襲能力明顯減弱。說明Py應(yīng)的靶基因激活，增加細(xì)胞外基質(zhì)的分解，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散結(jié)果發(fā)現(xiàn)：穿透Matrigel膠....

本文編號(hào)：3964595