多囊腎病(polycystic kidney disease,PKD)是指雙側(cè)腎臟發(fā)生多個(gè)囊腫且進(jìn)行性長大而導(dǎo)致腎臟結(jié)構(gòu)和功能損害的一種單基因遺傳性疾病。根據(jù)遺傳方式的不同多囊腎可以分為兩種：常染色體顯性遺傳性多囊腎病和常染色體隱性遺傳性多囊腎病。在北美大約有500,000受累ADPKD的發(fā)病率為1/500-1000,ARPKD的發(fā)病率為1/40000。B6C3Fe ala-bpck是一種常染色體隱性遺傳性多囊腎(ARPKD)的動(dòng)物模型。缺失的TMEM67基因與人類的MKS3以及Wistar大鼠多囊腎模型具有同源性。 目的： 在確定此模型作為ARPKD研究的可行性后,構(gòu)建含目的基因TMEM67全長的載體pFlag-CMV-TMEM67.將其轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中,使TMEM67過表達(dá),檢測HEK293細(xì)胞中蛋白的表達(dá),以分析TMEM67在ARPKD中可能參與的信號通路。同時(shí)應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片篩選與正常小鼠相比,突變體小鼠差異表達(dá)的基因,初步探討TMEM67引起的ARPKD的機(jī)制。 方法： 1設(shè)計(jì)引物,取小鼠尾尖,進(jìn)行PCR,鑒定小鼠基因型后,取不同時(shí)期WT(野生型)和MUT(突變體)...

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、常染色體隱性遺傳性多囊腎小鼠模型的鑒定
    1.1 對象和方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.2 主要試劑
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 野生型小鼠PCR結(jié)果測序
        1.2.2 常染色體隱性遺傳性多囊腎小鼠模型的鑒定
    1.3 討論
二、pFlag-CMV-TMEM67載體的構(gòu)建
    2.1 對象和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 總RNA的提取
        2.2.2 PCR cDNA第一條鏈的合成
        2.2.3 TMEM67全長的cDNA的克隆
        2.2.4 PCR純化試劑盒純化cDNA的PCR產(chǎn)物
        2.2.5 酶切cDNA得到TMEM67全長DNA片段
        2.2.6 酶切質(zhì)粒PFlag-CMV-ErbB4,得到空載體
        2.2.7 將TMEM67FL連接到空載體pFlag-CMV
        2.2.8 將TMEM67FL-pFlag-CMV轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞中
        2.2.9 挑40個(gè)單菌落
        2.2.10 酶切40管質(zhì)粒
        2.2.11 選取其中4個(gè)質(zhì)粒做轉(zhuǎn)化
        2.2.12 挑單菌落
        2.2.13 粗提質(zhì)粒
        2.2.14 雙酶切并測序
    2.3 討論
三、TMEM67蛋白在信號通路中研究
    3.1 對象和方法
        3.1.1 細(xì)胞系
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及配制
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.3 討論
四、組織芯片篩查常染色體隱性多囊腎的差異基因
    4.1 對象和方法
        4.1.1 組織來源
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)耗材
        4.1.5 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
        4.1.6 Real time PCR檢測Affymetrix 430 2.0數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.3 討論
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 多囊腎病的研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3947672