研究背景 順鉑是一種常見的用于治療癌癥的化療藥物,尤其是對睪丸癌患者的治愈率非常高。目前睪丸癌治療中面臨的最大的問題是患者經(jīng)過藥物順鉑化療之后,出現(xiàn)的毒副作用嚴重影響了病人的生活質(zhì)量。所以開發(fā)新的順鉑增敏劑,提高順鉑的治療效率,減少順鉑治療帶來的副作用是解決這一問題的關(guān)鍵點。 microRNA (miRNA,即微小RNA)是一類長約21～25個核苷酸的非編碼小分子RNA。一般情況下,成熟的miRNA可以通過與其靶基因的特定mRNA完全或不完全配對,降解其mRNA或抑制其轉(zhuǎn)錄后翻譯來調(diào)控基因的表達。近年來,許多文獻報道m(xù)iRNA在化療藥物治療癌癥的過程中起到非常重要的作用,甚至調(diào)節(jié)癌癥細胞對化療藥物的敏感性。這對研究腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及診斷、治療和預后都有非常重要的作用。目前的研究發(fā)現(xiàn),在惡性生殖細胞瘤中miR-302a過表達,而在良性生殖細胞瘤中卻未發(fā)現(xiàn),說明miR-302a可以成為一種惡性生殖細胞瘤的血清學分子標志物。但是,miR-302a是否參與到順鉑治療睪丸癌的過程中及miR-302a是否與順鉑誘導的睪丸癌細胞凋亡敏感性有關(guān)卻未見報道。 研究目的 研究miR-302a對人睪丸癌細...

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 睪丸癌的發(fā)生和治療
        1.2.1 睪丸癌的發(fā)生
        1.2.2 睪丸癌的組織學分類
        1.2.3 睪丸癌的治療方法
        1.2.4 化療藥物順鉑的作用機制
        1.2.5 順鉑誘導的睪丸癌細胞的凋亡
        1.2.6 小結(jié)
    1.3 miRNA參與化療過程
        1.3.1 miRNA的生成及其作用機制
        1.3.2 miRNA與疾病的關(guān)系
        1.3.4 miRNA與化療
        1.3.5 miR-302簡介
        1.3.6 miR-302與睪丸癌
        1.3.7 小結(jié)
第二章 miR-302a提高順鉑敏感性并促進順鉑誘導的凋亡
    2.1 前言
    2.2 實驗結(jié)果
        2.2.1 順鉑誘導miR-302a產(chǎn)生
        2.2.2 miR-302a抑制細胞增殖并提高順鉑敏感性
        2.2.3 miR-302a促進順鉑誘導的凋亡
        2.2.4 pFUM3GW促進順鉑誘導的凋亡
    2.3 結(jié)果分析與討論
第三章 miR-302a促進順鉑誘導的G2/M期的停滯
    3.1 前言
    3.2 實驗結(jié)果
        3.2.1 miR-302a對細胞周期的影響
        3.2.2 miR-302a聯(lián)合順鉑對細胞周期的影響
        3.2.3 miR-302a抑制劑對細胞周期的影響
    3.3 結(jié)果分析與討論
第四章 miR-302a協(xié)同順鉑易于臨床應用
    4.1 前言
    4.2 實驗結(jié)果
        4.2.1 miR-302a提高順鉑對NT2細胞的殺傷效應
        4.2.2 miR-302a對其他細胞系的影響
        4.2.3 miR-302a提高順鉑對NCCIT2細胞的殺傷效應
    4.3 結(jié)果分析與討論
第五章 miR-302a促進順鉑凋亡效應的分子機制
    5.1 前言
    5.2 實驗結(jié)果
        5.2.1 miR-302a通過靶基因p21調(diào)控順鉑效應
            5.2.1.1 沉默p21對細胞周期的影響
            5.2.1.2 miR-302a通過p21促進順鉑效應
        5.2.2 沉默p53可以提高順鉑誘導的凋亡效應
            5.2.2.1 沉默p53提高miR-302a表達
            5.2.2.2 沉默p53和miR-302a轉(zhuǎn)錄因子之間的關(guān)系
    5.3 結(jié)果分析與討論
第六章 實驗總結(jié)和討論
第七章 實驗材料儀器與方法
    7.1 實驗材料及方法
        7.1.1 實驗試劑
        7.1.2 細胞系、細胞培養(yǎng)、復蘇及凍存
            7.1.2.1 細胞系
            7.1.2.2 細胞培養(yǎng)
            7.1.2.3 細胞復蘇
            7.1.2.4 細胞凍存
        7.1.3 質(zhì)粒及寡聚核苷酸的轉(zhuǎn)染
        7.1.4 RNA提取以及實時定量熒光PCR分析(real-time PCR)
        7.1.5 免疫印跡分析(Western blotting)
        7.1.6 細胞增殖和藥物敏感性試驗
            7.1.6.1 細胞活力實驗
            7.1.6.2 藥物敏感性試驗
        7.1.7 流式細胞術(shù)分析
            7.1.7.1 細胞周期檢測
            7.1.7.2 細胞凋亡檢測
        7.1.8 統(tǒng)計分析
    7.2 主要儀器設(shè)備
參考文獻
致謝
在讀期間發(fā)表的學術(shù)論文與取得的研究成果



本文編號：3892711