腎細胞癌(RCC)是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,約占惡性腫瘤的2-3%。由于缺乏典型的臨床癥狀和早期腎癌的篩查標志,20-30%的腎癌在診斷時就已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移,導致腎癌的預后不良。轉(zhuǎn)移性腎癌對現(xiàn)有的治療方式(放療、化療、IFN免疫治療等)不敏感,且大部分患者在靶向治療6-15月后對靶向治療藥物產(chǎn)生耐藥,導致腎癌患者的5年生存率≦10%。因此,探索一新的腎細胞癌診斷、治療方案已成為臨床上亟待解決的問題。白花丹素(Plumbagin,PLB)是從植物白花丹根部提取的一種黃色結(jié)晶狀萘醌類化合物。目前經(jīng)體內(nèi)、外實驗已證實PLB具有抗過敏、神經(jīng)保護、抗腫瘤、降血脂、抗動脈粥樣硬化、抗細菌與真菌等多種藥理學活性。此外,PLB對乳腺癌、肝細胞癌、前列腺癌等腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移均具有較強的抑制作用。PLB可通過多個分子靶點或信號通路(CDK1/CDC2、Cyclin B1、Cyclin D1、NF-KB,P53、P21、PI3K/AKT/m TOR、Ras、STAT3/PLK1/AKT和Wnt等)促進腫瘤細胞的凋亡、自噬以及細胞周期阻滯,同時也可抑制腫瘤新生血管的形成、侵襲和轉(zhuǎn)移。迄今為止,PLB對腎...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
第一部分：Plumbagin通過PI3K/AKT抑制腎細胞癌的增殖和侵襲轉(zhuǎn)移
    前言
    材料與方法
        1 材料
            1.1 細胞株
            1.2 藥物及化合物
            1.3 主要試劑
            1.4 主要儀器及設(shè)備
        2 實驗方法
            2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2 MTT法檢測PLB對786-0、769p細胞增殖的影響
            2.3 平板克隆檢測PLB對786-0、769p細胞增殖的影響
            2.4 流式細胞儀檢測PLB786-0、769p凋亡的影響
            2.5 劃痕實驗檢測PLB對786-0、769p遷移的影響
            2.6 Transwell檢測PLB對786-0、769p侵襲的影響
            2.7 Western blot檢測PLB對786-0、769P細胞中PI3K/AKT等蛋白的影響
            2.8 裸鼠皮下成瘤
            2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    結(jié)果
        1 PLB對腎癌細胞786-0、769p增殖的影響
            1.1 MTT實驗結(jié)果
            1.2 平板克隆實驗結(jié)果
        2 PLB對腎癌細胞786-0、769p凋亡的影響
            2.1 流式細胞儀檢測結(jié)果
            2.2 Western blot檢測結(jié)果
        3 PLB對腎癌細胞786-0、769p侵襲、轉(zhuǎn)移的影響
            3.1 劃痕實驗結(jié)果
            3.2 Transwell實驗結(jié)果
            3.3 Western blot檢測結(jié)果
        4 PLB對人786-0、769p細胞中PI3K/AKT信號通路的影響
            4.1 PLB對 PI3K/AKT相關(guān)蛋白的影響
            4.2 PLB和 PI3K/AKT激動劑對786-0、769p細胞增殖的影響
        5 PLB對裸鼠皮下腫瘤生長的影響
    討論
    小結(jié)
第二部分：MCM5 促進腎細胞癌增殖并與腫瘤的進展、預后密切相關(guān)
    前言
    材料與方法
        1 材料
            1.1 細胞株
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器及設(shè)備
        2 實驗方法
            2.1 臨床腎細胞癌臨床標本的收集
            2.2 免疫組化(IHC)
            2.3 Western blot
            2.4 細胞培養(yǎng)
            2.5 細胞轉(zhuǎn)染
            2.6 MTT檢測細胞增殖
            2.7 平板克隆實驗
            2.8 RT-PCR
            2.9 裸鼠皮下成瘤實驗
            2.10 生物信息學分析
            2.11 統(tǒng)計分析
    結(jié)果
        1 MCMs在腎細胞癌組織及腎癌細胞系中的差異表達
        2 MCM5 與腎癌的臨床病理特點密切相關(guān)
        3 MCM5 可促進腎癌的增殖
    討論
    小結(jié)
第三部分：Plumbagin通過MCM5 抑制腎細胞癌的發(fā)生、發(fā)展
    前言
    材料與方法
        1 材料
            1.1 細胞株
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器及設(shè)備
        2 實驗方法
            2.1 實驗的分組
            2.2 細胞培養(yǎng)
            2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染
            2.4 Western blot
            2.5 MTT檢測腎癌細胞增殖
            2.6 統(tǒng)計分析
    結(jié)果
        1 PLB可顯著下調(diào)腎癌細胞MCM5 的表達
        2 PLB可通過MCM5 抑制腎癌細胞的增殖。
    討論
    小結(jié)
全文總結(jié)
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3739053