發(fā)布時間：2017-05-17 15:03

  本文關(guān)鍵詞：尿毒癥血清蛋白對血管內(nèi)皮細胞的損傷作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:最新統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明,成年慢性腎臟疾病(chronic kidney disease,CKD)的患病率已超過了10%,由CKD導(dǎo)致的終末期腎衰也在逐年增長[1]。隨著腎功能逐漸減退,患者會出現(xiàn)各種并發(fā)癥。流行病學(xué)結(jié)果示,即使在腎功能輕度損傷的患者,心、腦血管疾病的發(fā)病率就較同年齡、同性別的非腎臟病人群顯著增高,心、腦血管事件是尿毒癥患者最常見的并發(fā)癥和致死原因[2-4]。研究發(fā)現(xiàn)尿毒癥毒素是促使CKD患者心、腦血管疾病高患病率的獨立危險因素[5,6]。尿毒癥毒素分為蛋白結(jié)合尿毒癥毒素和游離毒素,游離毒素能被透析清除,而蛋白結(jié)合毒素卻不能通過常規(guī)透析清除,隨著時間的推移,蛋白結(jié)合毒素會在體內(nèi)蓄積,引起組織細胞損傷。由于血液內(nèi)的蛋白結(jié)合毒素與血管內(nèi)皮細胞接觸的機會多,故極有可能引起內(nèi)皮細胞損傷。內(nèi)皮細胞的形態(tài)和功能正常是避免各種血管疾病發(fā)生的基礎(chǔ);內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)受損、功能不全是血管疾病發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[7]。國內(nèi)外大量研究證實,游離的硫酸對甲酚、硫酸吲哚酚等毒素能通過氧化應(yīng)激反應(yīng)等機制導(dǎo)致血管內(nèi)皮的損傷,進而促使血管疾病的發(fā)生[8-11]。然而蛋白結(jié)合的尿毒癥毒素是否也能導(dǎo)致血管內(nèi)皮的損傷,目前尚無這方面文獻報道。目的:本研究觀察體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)被尿毒癥患者血清蛋白刺激后的增殖能力、一氧化氮分泌量、一氧化氮合酶活性、內(nèi)皮源性膜微粒脫落率以及凋亡等指標;探討蛋白結(jié)合尿毒癥毒素(protein-bound uremic toxins,PBUTs)對人血管內(nèi)皮細胞的損傷作用。方法:選取第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院腎內(nèi)科透析室維持性血液透析的尿毒癥患者20例(男女各10例)和第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院健康管理科健康志愿者20例(男女各10例),每例各抽取靜脈全血10ml,經(jīng)過血清分離、透析、低溫真空凍干等處理后提取血清蛋白[12],用細胞培養(yǎng)基將血清蛋白配制成0.4%、1.0%、2.0%、4.0%四種濃度,以尿毒癥血清蛋白溶液(0.4%、1.0%、2.0%、4.0%)、正常血清蛋白溶液(0.4%、1.0%、2.0%、4.0%)刺激HUVEC細胞,設(shè)置空白對照組,刺激24h、48h、72h共3個實驗時間點,檢測以下指標:1)cck-8法測定尿毒癥血清蛋白對huvec細胞的增殖能力的影響;2)倒置相差顯微鏡觀察尿毒癥血清蛋白對huvec細胞的形態(tài)的影響;3)一氧化氮試劑盒(硝酸還原酶法)測定尿毒癥血清蛋白對huvec細胞分泌一氧化氮量的影響;4)一氧化氮合成酶檢測試劑盒(熒光法)測定尿毒癥血清蛋白對huvec細胞一氧化氮合酶活性的影響;5)用cd144抗體經(jīng)流式細胞儀檢測尿毒癥血清蛋白對huvec細胞的內(nèi)皮源性膜微粒脫落率的影響;6)用annexinv/pi雙染細胞凋亡試劑盒經(jīng)流式細胞儀和dapi染核法檢測尿毒癥血清蛋白對huvec細胞凋亡的影響。結(jié)果:1.尿毒癥血清蛋白對huvec細胞增殖能力的影響在相同實驗時間點(24h、48h或者72h),尿毒癥組huvec細胞od值,均比空白對照組以及相同濃度的正常組明顯降低(p0.05);在相同實驗時間點(24h、48h或者72h),隨著血清蛋白溶液濃度的增加,與相同濃度的正常組相比,尿毒癥組huvec細胞od值均明顯減低,呈現(xiàn)濃度依賴性(p0.05);對于相同濃度的血清蛋白溶液,隨實驗時間的延長,與正常組相比,尿毒癥組huvec細胞od值均明顯減低,呈現(xiàn)時間依賴性(p0.05)。2.尿毒癥血清蛋白對huvec細胞形態(tài)的影響空白組huvec細胞,細胞大小均一、邊界清晰,呈短梭形、單層鵝卵石樣鋪列;正常組的huvec細胞,細胞大小稍不均一,細胞膜表面欠光滑,細胞觸角、突起增多;可觀察到細胞分泌的胞漿顆粒增多;尿毒癥組的huvec細胞,細胞生長狀態(tài)差,大小明顯不均一,細胞間隙明顯增寬,細胞膜表面粗糙,細胞觸角、突起明顯增多,部分觸角、突起交織呈網(wǎng)狀,觀察到細胞分泌的胞漿顆粒明顯增多。3.尿毒癥血清蛋白對huvec細胞一氧化氮分泌的影響干預(yù)72h后,空白組huvec細胞no的分泌量約為(13.24±0.32)umol/l,0.4%、1.0%、2.0%、4.0%正常組huvec細胞no的分泌量約為(12.68±0.55)umol/l、(10.10±0.30)umol/l、(7.86±0.49)umol/l、(7.40±0.14)umol/l;0.4%、1.0%、2.0%、4.0%尿毒癥組huvec細胞no的分泌量約為(9.46±0.29)umol/l、(6.64±0.28)umol/l、(5.42±0.50)umol/l、(3.92±0.34)umol/l;隨著血清蛋白溶液濃度呈梯度增加,尿毒癥組HUVEC細胞的NO分泌量逐漸減少,且呈現(xiàn)濃度依賴性(P0.05)。4.尿毒癥血清蛋白對HUVEC細胞一氧化氮合酶活性的影響干預(yù)72h后,空白組HUVEC細胞NOS合酶活性O(shè)D值約為(192.39±3.69),0.4%、1.0%、2.0%、4.0%正常組HUVEC細胞NOS合酶活性O(shè)D值約為(184.39±4.58)、(169.33±7.33)、(151.83±3.95)、(148.68±3.20);0.4%、1.0%、2.0%、4.0%尿毒癥組HUVEC細胞NOS合酶活性O(shè)D值約為(142.91±4.50)、(128.67±5.10)、(113.98±3.17)、(59.42±3.74);尿毒癥組OD值明顯下降,與空白組、正常組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);隨著血清蛋白溶液的濃度呈梯度增加,尿毒癥組HUVEC細胞的NOS合酶活性O(shè)D值明顯降低;且呈現(xiàn)濃度依賴性(P0.05)。5.尿毒癥血清蛋白對HUVEC細胞內(nèi)皮源性膜微粒脫落率的影響干預(yù)72h后,空白組、4.0%正常組、4.0%尿毒癥組EMPs的脫落率分別為(7.30±0.57)%、(13.0±0.94)%、(62.57±1.59)%,與空白對照組、正常組相比,尿毒癥組EMPs脫落率明顯升高(P0.05)。6.尿毒癥血清蛋白對HUVEC細胞凋亡的影響干預(yù)72h后,空白組、4.0%正常組和4.0%尿毒癥組細胞凋亡率分別為(4.44±1.74)%、(5.49±1.57)%、(6.2±1.17)%,各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:尿毒癥血清蛋白能抑制HUVEC細胞增殖、抑制其分泌NO、促進其EMPs脫落,導(dǎo)致HUVEC細胞損傷,提示蛋白結(jié)合尿毒癥毒素是心腦血管并發(fā)癥的重要誘發(fā)因素之一。
【關(guān)鍵詞】：蛋白結(jié)合尿毒癥毒素 人臍靜脈內(nèi)皮細胞 一氧化氮 一氧化氮合酶 內(nèi)皮膜微粒 細胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692.5
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-9
• 中文摘要9-12
• 前言12-14
• 材料方法14-24
• 結(jié)果24-34
• 討論34-36
• 全文結(jié)論36-37
• 參考文獻37-40
• 文獻綜述 蛋白結(jié)合尿毒癥毒素的研究進展40-50
• 參考文獻45-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文50-51
• 致謝51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 袁發(fā)煥;李莉;龐芳;;硫酸對甲酚的毒性及其清除措施研究進展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2012年09期

2 李洪,黃烈誠;尿毒癥毒素研究進展與血液吸附的再應(yīng)用[J];中國血液凈化;2004年08期

  本文關(guān)鍵詞：尿毒癥血清蛋白對血管內(nèi)皮細胞的損傷作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：373717