設(shè)計并構(gòu)建一種含VEGF和GRP抗原表位的表達載體p ET28a-VEGFI-M2-GRP質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中,并對重組菌進行乳糖誘導(dǎo)表達,超聲破碎,包涵體經(jīng)洗滌、溶解、透析復(fù)性、離子交換層析等方法進行分離純化后得到目的蛋白VEGFⅡ/GRP,Western blot鑒定。建立前列腺癌RM-1細胞的C57BL/6J小鼠皮下移植瘤模型,以VEGFⅡ/GRP作為疫苗進行免疫。觀察荷瘤小鼠的腫瘤生長情況計算抑瘤率,比較各組血管生成數(shù)以及ELISA檢測抗VEGF抗體濃度,并研究該蛋白疫苗的抗腫瘤生長作用和抗血管生成作用。結(jié)果顯示:ELISA結(jié)果表明小鼠血清中抗VEGF抗體比NS組高（P＜0.05）,重組蛋白VG組與NS組相比抗血管作用顯著（P＜0.05）。初步顯示構(gòu)建的重組蛋白有抑制腫瘤血管生長的作用。 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 菌種和質(zhì)粒
    1.2 試劑
    1.3 動物和細胞株
2 方法
    2.1 VEGF I-M2-DPTGG和GRP6基因的獲得
    2.2 重組表達載體的構(gòu)建和鑒定
    2.3 融合蛋白的誘導(dǎo)表達
    2.4 融合蛋白的分離純化
        2.4.1 包涵體的洗滌和溶解
        2.4.2 包涵體的復(fù)性
        2.4.3 DEAE-52陰離子交換層析
    2.5 融合蛋白的Western blot鑒定
    2.6 重組蛋白對小鼠前列腺癌RM-1的免疫治療
        2.6.1 融合蛋白的作用研究
    2.7 血清中抗h VEGF抗體的ELISA檢測
3 結(jié)果
    3.1 VEGF121I-M2-DPTGG和GRP6基因鑒定
    3.2 重組表達載體的鑒定
    3.3 VEGFⅡ/GRP融合蛋白的誘導(dǎo)表達
    3.4 融合蛋白的分離純化
    3.5 融合蛋白的Western blot鑒定
    3.6 融合蛋白對腫瘤生長的影響
    3.7 融合蛋白對腫瘤血管的影響
    3.8 血清中抗h VEGF抗體的ELISA檢測
4 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國前列腺癌發(fā)病現(xiàn)狀和流行趨勢分析[J]. 韓蘇軍,張思維,陳萬青,李長嶺.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2013(04)
[2]以VEGF及VEGFR2為靶位的抗腫瘤血管生成主動免疫治療的研究進展[J]. 王偉,殷小濤,田仁禮,閻瑾琦,高江平,于繼云.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展. 2013(08)



本文編號：3692075