目的：1.構(gòu)建雙特異性雙鏈抗體BsDb（抗-PSMA×抗-FITC）的基因序列及質(zhì)粒載體pET-28（a）-BsDb，將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌中構(gòu)成BsDb的原核表達體系，以IPTG誘導表達并純化。2.培養(yǎng)人前列腺癌細胞系，檢測PSMA表達情況及鑒定雙特異性抗體BsDb的活性。方法：1.通過對本課題組先期測得的抗-PSMA單鏈抗體（ScFv-P）與抗-FITC單鏈抗體（ScFv-F）基因序列的分析，獲得兩條ScFv各自的重鏈和輕鏈序列。通過VectorNTI9軟件將ScFv-P的重鏈（PVH）和輕鏈（PVL）與ScFv-F的輕重鏈（FVL和FVH）交叉連接，構(gòu)成PVH-Linker-FVL和PVL-Linker-FVH兩條雜合鏈，將其連接后以全基因合成的方法合成BsDb的基因片段。在其C端設計一個XbaⅠ酶切位點，N端設計一個XhoⅠ酶切位點。將BsDb基因片段用XbaⅠ與XhoⅠ兩個限制性內(nèi)切酶進行雙酶切并與經(jīng)過同樣雙酶切的pET-28（a）質(zhì)粒載體用T4連接酶連接成pET-28（a）-BsDb，將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21，以IPTG誘導其表達，對表達產(chǎn)物用鎳親和層析柱進行純化。2.培養(yǎng)人前列... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

質(zhì)粒載體雙酶切后電泳圖

圖 3：質(zhì)粒載體雙酶切后電泳圖 Mark，1、2 為酶切后結(jié)果，3 為酶切性表達，本組實驗從兩個方面對誘導表達結(jié)果見圖（4），可見誘導后目的對于其他三種濃度稍微少些，綜合選擇 0.50‰為 IPTG 誘導濃度。

第四軍醫(yī)大學碩士學位論文間的誘導，檢測目的蛋白在上清中可h 結(jié)果見圖（5），誘導后目的蛋白表達清中并未見明顯的目的條帶；16℃的蛋白表達，可見上清和沉淀中均有 結(jié)果見圖（7），結(jié)果與 12h 相似。性表達。鑒于 16℃、220rpm/min 條條件為：16℃、150rpm/min 條件下誘

【參考文獻】：
期刊論文
[1]經(jīng)直腸前列腺穿刺活檢針數(shù)對前列腺癌檢出率的影響[J]. 陳鑫,劉明,張亞群,王鑫,王萱,王建業(yè).  中國醫(yī)刊. 2012 (08)
[2]直腸指診和經(jīng)直腸超聲掃描在前列腺癌診斷中的價值[J]. 郭悅江,王道虎,毛曉鵬,陳煒,吳榮佩,鄧春華,丘少鵬.  中華外科雜志. 2012 (07)
[3]FITC-抗FITC系統(tǒng)在夾心法ELISA檢測IFN-γ和IL-4中的應用[J]. 莊然,李琦,劉雪松,歐陽為明,韓衛(wèi)寧,王薇,金伯泉.  中國免疫學雜志. 2004(09)



本文編號：3224379