本文關(guān)鍵詞：吸煙暴露通過ERK5通路誘導(dǎo)SV-HUC-1細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與研究目的膀胱癌是我國(guó)最常見的泌尿系腫瘤之一,其中絕大多數(shù)為膀胱移行細(xì)胞癌,由于具有復(fù)發(fā)性、侵襲性、產(chǎn)生獲得性耐藥等特點(diǎn),其治療效果常不理想。然而膀胱癌的發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明,吸煙是膀胱癌的首要因素,因此研究吸煙暴露與膀胱癌的關(guān)系對(duì)闡明膀胱癌的發(fā)生機(jī)制具有顯著的意義。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中起到關(guān)鍵的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在研究吸煙暴露對(duì)人正常膀胱上皮細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影響,并探討ERK5通路在上述上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用。方法采用MTT法篩選對(duì)SV HUC 1細(xì)胞(人正常膀胱上皮細(xì)胞)無細(xì)胞毒性的香煙懸液(cigarette smoking extract,CSE)劑量,繼而根據(jù)無毒劑量處理SV HUC 1細(xì)胞。(1)顯微鏡下觀察SV HUC 1細(xì)胞形態(tài)變化并拍照記錄;(2)采用transwell試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力變化;(3)隨后用western blotting和q RT PCR方法檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)變化;(4)采用western blotting分析ERK5通路活性變化,同時(shí)檢測(cè)AP 1通路蛋白活性變化;繼而用ERK5通路特異性抑制劑觀察對(duì)吸煙誘導(dǎo)的SV HUC 1細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用的干預(yù)效果。結(jié)果(1)通過MTT實(shí)驗(yàn)篩選出0%,0.25%,0.5%,1%CSE濃度作為實(shí)驗(yàn)劑量,而2%及以上CSE具有細(xì)胞毒性效應(yīng),并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001);(2)顯微鏡下觀察SV HUC 1細(xì)胞在吸煙暴露5天后,細(xì)胞呈現(xiàn)分散趨勢(shì),細(xì)胞形態(tài)由橢圓形變?yōu)殚L(zhǎng)梭形,少部分細(xì)胞可見細(xì)長(zhǎng)尾巴。transwell試驗(yàn)證實(shí)人膀胱上皮細(xì)胞經(jīng)香煙處理后侵襲能力增強(qiáng)。(3)Western Blotting及q RT PCR顯示SV HUC 1細(xì)胞經(jīng)過吸煙處理后上皮標(biāo)志物E-Cadherin、ZO-1表達(dá)呈現(xiàn)持續(xù)性下降,間質(zhì)標(biāo)志物vimentin、N cadherin表達(dá)呈現(xiàn)持續(xù)性升高。(4)ERK5通路顯著激活,其中磷酸化ERK5(phosphorylated ERK5)持續(xù)升高,而總ERK5(total ERK5)持續(xù)降低,AP-1通路中phosphorylated c-jun和phosphorylated c-fos表達(dá)明顯升高。ERK5通路抑制劑XMD8-92可抑制AP-1通路活性,并逆轉(zhuǎn)吸煙誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程,具體表現(xiàn)為:細(xì)胞形態(tài)由間質(zhì)表型長(zhǎng)梭狀恢復(fù)為上皮表型橢圓狀,且細(xì)胞間分散趨勢(shì)被有效遏制,細(xì)胞呈現(xiàn)相互聚集狀態(tài),transwell試驗(yàn)證實(shí)細(xì)胞侵襲能力下降,Western Blotting及q RT PCR結(jié)果提示EMT上皮標(biāo)志物經(jīng)XMD8-92處理后E-cadherin、ZO-1表達(dá)升高,間質(zhì)標(biāo)志物vimentin、N cadherin表達(dá)下降。結(jié)論吸煙暴露可誘導(dǎo)人正常膀胱上皮細(xì)胞出現(xiàn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,ERK5通路在上述上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中起到重要調(diào)控作用,ERK5通路抑制劑可通過抑制AP 1通路活性阻遏上述上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用。這些發(fā)現(xiàn)證實(shí)了ERK5在吸煙引起的致癌過程中具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 吸煙 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 ERK5 AP-1
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 1. 引言11-13
• 2. 材料和方法13-23
• 3. 結(jié)果23-29
• 4. 討論29-33
• 5. 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 附錄39-40
• 致謝40-41
• 綜述41-52
• 參考文獻(xiàn)46-52

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 耿浩;吸煙暴露通過ERK5通路誘導(dǎo)SV-HUC-1細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：吸煙暴露通過ERK5通路誘導(dǎo)SV-HUC-1細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：299719