發(fā)布時間：2021-01-02 18:10

　　目的:1.了解在下調(diào)miR-322后的GC-2細(xì)胞中,細(xì)胞增殖和凋亡的改變以及凋亡相關(guān)因子的表達(dá)變化;2.找尋miR-322影響GC-2細(xì)胞增殖和凋亡的靶基因位點(diǎn)并驗證;3.評估在高DFI男性不育患者精漿中,miR-424（后統(tǒng)一稱為同源miR-322）及其靶基因的表達(dá)水平共同作為病因診斷和治療的價值。方法:1.增殖率的檢測:根據(jù)向GC-2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染的miRNA的模擬物（Mimic）、抑制物（Inhibitor）及相應(yīng)陰性對照物（NC,Negative Control）的不同分為7組。A組為轉(zhuǎn)染 miR-29c mimic 組;B 組為轉(zhuǎn)染 miR-29c inhibitor 組;C 組為轉(zhuǎn)染 miRNAmimic NC組;D組為轉(zhuǎn)染miR-322 mimic組;E組為轉(zhuǎn)染miR-322 inhibitor組;F組為轉(zhuǎn)染miRNA inhibitor NC組;G組未轉(zhuǎn)染的空白對照組。用MTT法和CCK8法檢測各組細(xì)胞的增殖率并比較各組結(jié)果的差異。2.凋亡率的檢測:分別將向GC-2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-322 inhibitor,inhibitor NC以及空白對照細(xì)胞定為H～J組,使用流式... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖５－２用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ來檢測下調(diào)ｍｉＲ－３２２的ＧＣ－２細(xì)胞中Ｄｄｘ３ｘ蛋白的表達(dá)，Ａ??圖是ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ后照相所得的圖，Ｂ圖是３次獨(dú)立實驗后統(tǒng)計分析的ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??

５．２．１構(gòu)建含有Ｄｄｘ３ｘ耙基因位點(diǎn)３’ＵＴＲ片段的野生型和突變型報告基因質(zhì)粒??根據(jù)網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫預(yù)測信息構(gòu)建的含有Ｄｄｘ３ｘ的３’ＵＴＲ片段的野生型以及突變??型報告基因質(zhì)粒，其預(yù)測的結(jié)合情況如圖５－３所示。??根據(jù)上海生工公司的測序結(jié)果顯示（如圖５－４，５－５所示），構(gòu)建的野生型（ＷＴ）??和突變型（ＭＴ）報告基因質(zhì)粒和預(yù)期序列一致。分別擴(kuò)增含有ＷＴ和ＭＴ的Ｄｄｘ３ｘ??３，ＵＴＲ片段以及分別雙酶切含有ＷＴ和ＭＴ的兩個報告基因質(zhì)粒，經(jīng)ＰＣＲ電泳結(jié)??果（如圖５－６）顯示，擴(kuò)増的有ＷＴ和ＭＴ的Ｄｄｘ３ｘ’ＵＴＲ片段以及含有ＷＴ和ＭＴ??的兩個報告基因的質(zhì)粒，其大小和預(yù)期完全一致。這表明我們成功的構(gòu)建了含有??Ｄｄｘ３ｘ－３’ＵＴＲ片段的ＭＴ和ＷＴ報告基因質(zhì)粒。??Ｄｄｘ３ｘ?３＇ＵＴＲ?ＷＴ￣￣３＊?…ＵＵＣＵＡＧＡＵＡＣＵＵＵＵＵＧＣＵＧＣＵＡ…５’??ＩＩＩＭＩＩＩ??ｍｉＲ－３２２?３＇?ＡＧＧＵＵＵＵＧＵＡＣＵＵＡＡＣＧＡＣＧＡＣ?５＇??Ｉ??Ｄｄｘ３ｘ?３＇ＵＴＲ?ＭＴ?３＇…ＵＵＣＵＡＧＡＵＡａＪＵＵＵＧＡＴＧＴＴＡＡ…

－。??上海生工公司的測序結(jié)果顯示（如圖５－４，５－５所示），構(gòu)建的野生（ＭＴ）報告基因質(zhì)粒和預(yù)期序列一致。分別擴(kuò)增含有ＷＴ和ＭＴ段以及分別雙酶切含有ＷＴ和ＭＴ的兩個報告基因質(zhì)粒，經(jīng)ＰＣ５－６）顯示，擴(kuò)増的有ＷＴ和ＭＴ的Ｄｄｘ３ｘ’ＵＴＲ片段以及含有ＷＴ告基因的質(zhì)粒，其大小和預(yù)期完全一致。這表明我們成功的構(gòu)ＵＴＲ片段的ＭＴ和ＷＴ報告基因質(zhì)粒。??Ｄｄｘ３ｘ?３＇ＵＴＲ?ＷＴ￣￣３＊?…ＵＵＣＵＡＧＡＵＡＣＵＵＵＵＵＧＣＵＧＣＵＡ…５’??ＩＩＩＭＩＩＩ??ｍｉＲ－３２２?３＇?ＡＧＧＵＵＵＵＧＵＡＣＵＵＡＡＣＧＡＣＧＡＣ?５＇??Ｉ??Ｄｄｘ３ｘ?３＇ＵＴＲ?ＭＴ?３＇…ＵＵＣＵＡＧＡＵＡａＪＵＵＵＧＡＴＧＴＴＡＡ…５＿??３含有Ｄｄｘ３ｘ的３’ＵＴＲ片段的野生型以及突變型報告基因質(zhì)粒的

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2953391