組成性和誘導(dǎo)的高水平自噬對維持足細胞正常生理功能及細胞穩(wěn)態(tài)起到重要的作用。氨基酸饑餓是誘導(dǎo)自噬的重要方式,然而這一刺激對足細胞自噬的影響如何還缺乏研究。目前研究氨基酸饑餓的模型主要是去除全部氨基酸,還缺乏針對特定單一氨基酸缺失的研究。色氨酸是血清和培養(yǎng)足細胞的1640培養(yǎng)基中含量最低的氨基酸,吲哚胺2,3-雙加氧酶（IDO）是調(diào)控其代謝的限速酶。我們推測,IDO介導(dǎo)的細胞局部“低色氨酸”微環(huán)境可能會促進自噬。本課題首先采用正常培養(yǎng)基、氨基酸缺乏及色氨酸缺乏培養(yǎng)基分別干預(yù)體外培養(yǎng)的足細胞,研究氨基酸饑餓對足細胞自噬的作用及機制。研究采用多種方法檢測自噬軸,免疫印跡檢測LC3Ⅱ、beclin1及p62的蛋白水平,使用RT-qPCR檢測自噬相關(guān)分子轉(zhuǎn)錄,利用GFP-RFP-LC3腺病毒探針研究自噬軸,用透射電鏡觀察足細胞中的自噬體。我們發(fā)現(xiàn)氨基酸及色氨酸饑餓均以時間依賴的方式促進足細胞自噬軸活性。進一步觀察發(fā)現(xiàn),氨基酸饑餓通過抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的活性及促進轉(zhuǎn)錄因子EB（TFEB）誘導(dǎo)自噬活化。進一步,我們觀察了 IDO/色氨酸信號通路和足細胞自噬的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)生理條件下足細... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－丨．自卩筮軸示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１?－１．?Ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｙ?ｆｌｕｘ??

白噬體發(fā)生?Ａ噬體?和溶酶體融合?Ａ噬溶酶體??箭頭所示環(huán)節(jié)障礙會導(dǎo)致自噬流障礙??圖１－丨．自卩筮軸示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１?－１．?Ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｙ?ｆｌｕｘ??２．２調(diào)控自噬的營養(yǎng)■能量代謝機制??自噬感知營養(yǎng)能量變化，和多種損傷信號通路存在ｃｒｏｓｓ－ｔａｌｋ，其中營養(yǎng)？能量改變??對自噬的調(diào)控是基礎(chǔ)。細胞能感知脂質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、ＮＡＤ＿ＡＤ＋、乙酰輔酶??Ａ和鐵等營養(yǎng)？能量改變，這些營養(yǎng)？能量不足通過不同的信號通路調(diào)控自噬［３６］。氨基酸??饑餓（ａｍｉｎｏ?ａｃｉｄ?ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ）也稱氨基酸缺失（ａｍｉｎｏ?ａｃｉｄ?ｄｅｌｅｔｉｏｎ），可以通過兩個途徑??誘導(dǎo)自噻。一是抑制哺乳動物雷帕霉素革巴蛋白復(fù)合體１?（ｍａｍｍａｌｉａｎ?ｔａｒｇｅｔ?ｏｆ?ｒａｐａｍｙｃｉｎ??ｃｏｍｐｌｅｘ?１，?ｍＴＯＲＣｌ），二是活化腺苷酸活化蛋白激酶（ＡＭＰ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｋｉｎａｓｅ，??ＡＭＰＫ），ＡＭＰＫ?進一步活化?Ｕｎｃ－５１?樣激酶?１／２?（ｕｎｃ－５１－ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ?１／２，?ＵＬＫ?１／２）。哺??乳動物的這兩個激酶統(tǒng)稱ＵＬＫ激酶，相當(dāng)于酵母自噬啟動ＡＴＧ１激酶同源蛋白的同源??蛋白，可促進自噬泡形成從而啟動自噬。這些信號通路間有多種ｃｒｏｓｓ－ｔａｌｋ和反饋機制，??形成了復(fù)雜的代謝信號網(wǎng)絡(luò)。例如ＡＭＰＫ可以抑制ｍＴＯＲ信號（圖１－２）。??４??

?｜??ＡＵＴＯＰＨＡＧＹ??圖１－２．營秦能量相關(guān)的自噬信號通路網(wǎng)絡(luò)??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２．?Ｓｉｇｎａｌ?ｎｅｔ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ?ｒｅｌａｔｅｄ?ｔｏ?ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ－ｅｎｅｒｇｙ??圖片引用自：Ｇａｌｌｕｚｚｉ?Ｌ，?ｅｔ?ａｌ．?Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｙ．?Ｃｅｌｌ．?２０１４．１５９（６）：?１２６３－７６．??哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）是一種絲氨酸／蘇氨酸激酶，調(diào)控細胞內(nèi)生長、??增值及代謝有關(guān)信號，也是自噬信號通路中重要的信號分子，ｍＴＯＲ整合并傳遞上游??多種自噬信號并對自噬過程進行負調(diào)控。ｍＴＯＲ分別與Ｒａｐｔｏｒ和Ｒｉｐｔｏｒ分子形成??ｍＴＯＲＣｌ及ｍＴＯＲＣ２兩種復(fù)合體來發(fā)揮作用，ｍＴＯＲ是這兩個復(fù)合體中的活性成分。??ｍＴＯＲＣｌ研究得較多，主要參與調(diào)控蛋白合成、自噬及細胞增殖�；罨蟮模恚裕希覐�(fù)??合物主要通過磷酸化作用調(diào)控下游靶分子，Ｐ７０ｓ６ｋ是其靶分子之一，磷酸化的Ｐ７０ｓ６ｋ??是ｍＴＯＲ活化的標(biāo)志物１３７１。在自噬信號通路中，ｍＴＯＲ主要通過磷酸化自噬相關(guān)蛋白??來抑制自噬的起始階段

【參考文獻】：
期刊論文
[1]色氨酸代謝限速酶IDO1及其抑制劑的研究[J]. 劉鑫,楊青.  生命的化學(xué). 2016(06)
[2]晚期糖基化終產(chǎn)物通過mTORC1/uPAR途徑促進足細胞移動[J]. 談曉凡,陳源漢,俞春萍,賴宇雄,張麗,趙星辰,張鴻,林婷,李銳釗,史偉.  中國病理生理雜志. 2014(12)



本文編號：2940452