目的:探索TGF-β1誘導(dǎo)Fascin1的表達(dá)促進(jìn)腎癌細(xì)胞遷移及侵襲的機(jī)制。方法:利用RT-PCR技術(shù)檢測加入TGF-β1前后Fascin1的mRNA水平的變化。通過Western blotting技術(shù)檢測加入TGF-β1前后Fascin1及EMT相關(guān)蛋白水平的變化。用光學(xué)顯微鏡及細(xì)胞骨架染色觀察加入TGF-β1后細(xì)胞形態(tài)及骨架的變化。應(yīng)用Fascin1 siRNA降低Fascin1的表達(dá)水平。通過劃痕實(shí)驗(yàn)分析加入TGF-β1前后及用Fascin1 siRNA處理腎癌細(xì)胞后,細(xì)胞的遷移能力的變化。應(yīng)用Transwell分析加入TGF-β1前后及用Fascin1 siRNA處理腎癌細(xì)胞后,細(xì)胞的侵襲能力的變化。給予769-P細(xì)胞及OSRC細(xì)胞ERK及JNK信號通路抑制劑處理后,用Western blotting檢測加入TGF-β1前后Fascin1的表達(dá)水平的變化。結(jié)果:相較于對照組,加入TGF-β1后Fascin1的表達(dá)水平顯著增加(P0.05)。同時(shí),在加入TGF-β1后,在光學(xué)顯微鏡的觀察下,769-P及OSRC細(xì)胞的形態(tài)更加趨向于長梭形,與此相對應(yīng)的,在熒光顯微鏡的觀察下,細(xì)胞的骨架也會發(fā)生重構(gòu),形成一個(gè)長的束狀纖維狀結(jié)構(gòu),沿細(xì)胞長軸縱向排列;同時(shí),經(jīng)過Western blotting檢測得出,與EMT發(fā)生相關(guān)的蛋白的水平也發(fā)生了相應(yīng)的陽性改變(P0.05)。經(jīng)過劃痕實(shí)驗(yàn)分析,在加入TGF-β1后,NT組及si-control組的愈合率顯著增加(P0.05),但是經(jīng)過Fascin1 siRNA預(yù)先處理后,由于Fascin1的表達(dá)水平下降,再加入TGF-β1后,細(xì)胞的愈合率并沒有出現(xiàn)同樣的變化。同樣的,經(jīng)過Transwell分析,加入TGF-β1后,細(xì)胞的侵襲能力顯著增加(P0.05),但是經(jīng)過Fascin1 siRNA預(yù)先處理后,同樣由于Fascin1的表達(dá)水平下降,細(xì)胞的侵襲能力并沒有明顯的改變。與此同時(shí),還發(fā)現(xiàn)在TGF-β1誘導(dǎo)Fascin1的表達(dá)水平增加的同時(shí),相應(yīng)的JNK及ERK的磷酸化水平也增加(P0.05),而且在經(jīng)過JNK及ERK信號通路相應(yīng)抑制劑SP600125及FR180204的預(yù)先處理后,會顯著抑制TGF-β1對Fascin1表達(dá)水平的促進(jìn)作用。結(jié)論:TGF-β1會通過ERK及JNK信號通路促進(jìn)Fascin1的表達(dá)水平,進(jìn)而通過促進(jìn)腎癌細(xì)胞遷移及侵襲的能力,促進(jìn)腎癌的發(fā)生。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.11
【部分圖文】：

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果GF-β1 會促進(jìn) Fascin1 的表達(dá)過 RT-PCR 及 Western blotting 檢測 ，加入 TGF-β1 后，腎癌細(xì)胞系中 Fascin1 的表達(dá)相較于對照組(0ng/ml)都有了明顯的增加（**P。如下圖所示（圖 1，2）

經(jīng)過 RT-PCR 及 Western blotting 檢測 ，加入 TGF-β1 后，腎癌細(xì)胞系 76C 中 Fascin1 的表達(dá)相較于對照組(0ng/ml)都有了明顯的增加（**P<0ml）。如下圖所示（圖 1，2）圖 1 RT-PCR 檢測 TGF-β1 對 Fascin1 表達(dá)的影響

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文.2 Fascin1 siRNA 能顯著抑制 Fascin1 表達(dá)經(jīng) RT-PCR 及 Western blotting 檢測，加入 Fascin1 siRNA 后，相較于 NT 組i-control 組，F(xiàn)ascin1 的表達(dá)水平明顯下降，同時(shí)，再次加入 TGF-β1 后，F(xiàn)asc表達(dá)水平?jīng)]有明顯的變化（#P<0.05 VS NT 和 Si-control）。如下所示（圖 3，4
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本文編號：2894527