本文關(guān)鍵詞：沉默Notch-1對(duì)膀胱癌EMT影響的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:體外實(shí)驗(yàn)探討沉默Notch-1受體對(duì)膀胱癌EMT的影響及分子機(jī)制。方法:將Notch-1 shRNA及陰性對(duì)照組用Lip-2000轉(zhuǎn)染膀胱癌5637細(xì)胞株,倒置顯微鏡下觀察5637細(xì)胞生長狀態(tài)以及形態(tài)的變化,并且觀察轉(zhuǎn)染效率;運(yùn)用qRT-PCR及western blot檢測轉(zhuǎn)染效率;qRT-PCR及western blot技術(shù)檢測E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA及蛋白表達(dá)變化;流式細(xì)胞儀檢測凋亡率變化情況;transwell評(píng)估5637細(xì)胞侵襲能力的改變。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)的膀胱癌細(xì)胞數(shù)量明顯下降,細(xì)胞之間的連接減少,分布更分散,細(xì)胞皺縮、變小,熒光顯示轉(zhuǎn)染效率為80%;qRT-PCR及western blot檢測轉(zhuǎn)染效率結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染Notch-1 shRNA細(xì)胞,Notch-1的mRNA和蛋白表達(dá)顯著性下調(diào)(P0.05);qRT-PCR及western blot檢測EMT標(biāo)記物的結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染Notch-1 shRNA后,vimentin的mRNA及蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(Ρ0.05),E-cadherin、N-cadherin的mRNA及蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(Ρ0.05);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組的早、中晚期凋亡率均顯著上調(diào),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);transwell表明轉(zhuǎn)染Notch-1 shRNA細(xì)胞的侵襲能力顯著下調(diào)(P0.05)。結(jié)論:通過沉默Notch-1受體部分阻斷Notch信號(hào)通路,進(jìn)而抑制膀胱癌EMT進(jìn)程;同時(shí)降低膀胱癌細(xì)胞抗凋亡能力和侵襲力。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 Notch-1 EMT 基因沉默
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 摘要3-4
• abstract4-9
• 第1章 引言9-12
• 第2章 材料與方法12-23
• 2.1 材料12-13
• 2.1.1 細(xì)胞株來源12
• 2.1.2 主要試劑12-13
• 2.1.3 主要儀器與設(shè)備13
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟13-22
• 2.2.1 主要試劑的配制13-14
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)14-16
• 2.2.3 轉(zhuǎn)染細(xì)胞16-17
• 2.2.4 轉(zhuǎn)染 48h后，qRT-PCR檢測膀胱癌細(xì)胞Notch-1 的mRNA表達(dá)17-19
• 2.2.5 轉(zhuǎn)染 48h后，qRT-PCR檢測E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表達(dá)19
• 2.2.6 轉(zhuǎn)染 48h后，western blot檢測E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Notch-1 的蛋白表達(dá)19-21
• 2.2.7 流式細(xì)胞儀檢測膀胱癌細(xì)胞凋亡情況21
• 2.2.8 Transwell檢測細(xì)胞侵襲力的改變21-22
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理22-23
• 第3章 結(jié)果23-29
• 3.1 觀察轉(zhuǎn)染后各組5637細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化以及細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率23-24
• 3.2 轉(zhuǎn)染 48h后，qRT-PCR檢測Notch-1 的mRNA表達(dá)24
• 3.3 轉(zhuǎn)染 48h后，qRT-PCR檢測E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表達(dá)變化24-26
• 3.4 轉(zhuǎn)染 48h后，western blot檢測標(biāo)記物E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Notch-1 蛋白表達(dá)變化26
• 3.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48h后，，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率變化情況26-27
• 3.6 轉(zhuǎn)染 48h后，Transwell檢測5637細(xì)胞侵襲變化情況27-29
• 第4章 討論29-31
• 第5章 結(jié)論和展望31-32
• 5.1 結(jié)論31
• 5.2 展望31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述36-42
• 參考文獻(xiàn)41-42

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：289210