本文關(guān)鍵詞：沉默Notch-1對膀胱癌EMT影響的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:體外實驗探討沉默Notch-1受體對膀胱癌EMT的影響及分子機制。方法:將Notch-1 shRNA及陰性對照組用Lip-2000轉(zhuǎn)染膀胱癌5637細胞株,倒置顯微鏡下觀察5637細胞生長狀態(tài)以及形態(tài)的變化,并且觀察轉(zhuǎn)染效率;運用qRT-PCR及western blot檢測轉(zhuǎn)染效率;qRT-PCR及western blot技術(shù)檢測E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA及蛋白表達變化;流式細胞儀檢測凋亡率變化情況;transwell評估5637細胞侵襲能力的改變。結(jié)果:實驗組培養(yǎng)的膀胱癌細胞數(shù)量明顯下降,細胞之間的連接減少,分布更分散,細胞皺縮、變小,熒光顯示轉(zhuǎn)染效率為80%;qRT-PCR及western blot檢測轉(zhuǎn)染效率結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染Notch-1 shRNA細胞,Notch-1的mRNA和蛋白表達顯著性下調(diào)(P0.05);qRT-PCR及western blot檢測EMT標記物的結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染Notch-1 shRNA后,vimentin的mRNA及蛋白表達顯著下調(diào)(Ρ0.05),E-cadherin、N-cadherin的mRNA及蛋白表達顯著上調(diào)(Ρ0.05);流式細胞術(shù)結(jié)果顯示:實驗組的早、中晚期凋亡率均顯著上調(diào),差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05);transwell表明轉(zhuǎn)染Notch-1 shRNA細胞的侵襲能力顯著下調(diào)(P0.05)。結(jié)論:通過沉默Notch-1受體部分阻斷Notch信號通路,進而抑制膀胱癌EMT進程;同時降低膀胱癌細胞抗凋亡能力和侵襲力。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 Notch-1 EMT 基因沉默
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 摘要3-4
• abstract4-9
• 第1章 引言9-12
• 第2章 材料與方法12-23
• 2.1 材料12-13
• 2.1.1 細胞株來源12
• 2.1.2 主要試劑12-13
• 2.1.3 主要儀器與設備13
• 2.2 實驗方法與步驟13-22
• 2.2.1 主要試劑的配制13-14
• 2.2.2 細胞培養(yǎng)14-16
• 2.2.3 轉(zhuǎn)染細胞16-17
• 2.2.4 轉(zhuǎn)染 48h后，qRT-PCR檢測膀胱癌細胞Notch-1 的mRNA表達17-19
• 2.2.5 轉(zhuǎn)染 48h后，qRT-PCR檢測E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表達19
• 2.2.6 轉(zhuǎn)染 48h后，western blot檢測E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Notch-1 的蛋白表達19-21
• 2.2.7 流式細胞儀檢測膀胱癌細胞凋亡情況21
• 2.2.8 Transwell檢測細胞侵襲力的改變21-22
• 2.3 統(tǒng)計學處理22-23
• 第3章 結(jié)果23-29
• 3.1 觀察轉(zhuǎn)染后各組5637細胞的形態(tài)學變化以及細胞轉(zhuǎn)染效率23-24
• 3.2 轉(zhuǎn)染 48h后，qRT-PCR檢測Notch-1 的mRNA表達24
• 3.3 轉(zhuǎn)染 48h后，qRT-PCR檢測E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表達變化24-26
• 3.4 轉(zhuǎn)染 48h后，western blot檢測標記物E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Notch-1 蛋白表達變化26
• 3.5 細胞轉(zhuǎn)染 48h后，，流式細胞儀檢測細胞凋亡率變化情況26-27
• 3.6 轉(zhuǎn)染 48h后，Transwell檢測5637細胞侵襲變化情況27-29
• 第4章 討論29-31
• 第5章 結(jié)論和展望31-32
• 5.1 結(jié)論31
• 5.2 展望31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻33-36
• 綜述36-42
• 參考文獻41-42

【參考文獻】

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本文編號：289210