本文關鍵詞：Hedgehog信號通路介導血管周細胞參與腎間質纖維化的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的:腎間質纖維化(Renal interstitial fibrosis,RIF)是各種慢性腎病隨病程進展到最終階段的相同病理生理表現(xiàn),嚴重威脅著患者健康。該病變表現(xiàn)腎間質中肌成纖維細胞顯著增殖,細胞外膠原分泌增多,腎單位損傷及功能進行性下降為特征。因此,為探索行之有效的防治措施,需徹底明確該病變機制。肌成纖維細胞的來源一直是本病變探討的焦點,相關文章表明,其來源或許涉及多種細胞。長期以來,腎小管上皮細胞-間葉細胞轉分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)機制得到眾多學者首肯,但近來有學者提出不同觀點,認為RIF與受Hh信號通路調節(jié)的周細胞的關系似乎更大。因此,本研究擬通過對Hh信號通路激活時周細胞各項特征變化的檢測來探索Hh信號通路是否參與了周細胞向肌成纖維細胞方向轉分化,并且是否可以被Hh信號通路的相應配體所干預。材料與方法:選用健康BALB/c乳鼠,雌雄不限,通過乳鼠腎細胞原代培養(yǎng),用免疫磁珠分選技術分離純化,并將所獲得的細胞通過形態(tài)學觀察和免疫細胞化學NG2、SMA和CD31檢測,鑒定是否符合周細胞特征,經(jīng)三次傳代培養(yǎng),收集周細胞。將已經(jīng)純化的周細胞分為對照組、SHH組和SHH+CPA組三組。對照組均于0 h、24 h分別加終濃度為0.2%BSA的PBS;SHH組于0 h、24 h分別加終濃度為1.5ng/mL SHH蛋白;SHH+CPA組在SHH組基礎上于每個SHH的添加時間點前2 h加終濃度為0.25μm/mLCPA干預。干預結束后,均行免疫細胞化學sma檢測、brdu摻入實驗檢測、細胞劃痕實驗檢測和i型膠原elisa檢測。結果:1.通過乳鼠腎細胞原代培養(yǎng),免疫磁珠分離純化,經(jīng)倒置相差顯微鏡觀察,形態(tài)學符合周細胞特征:細胞寬大扁平,形狀不規(guī)則,并伴數(shù)個突起,胞核居中,單核或雙核;ng2和sma免疫細胞化學染色陽性表達,cd31免疫細胞化學染色陰性表達,證實為周細胞。2.細胞經(jīng)干預行上述檢測,免疫細胞化學sma檢測:對照組細胞質中陽性表達程度為121.3±13.7,shh組為168±21.0,shh+cpa組為132.1±19.8,即shh組陽性表達程度高于對照組,shh+cpa組陽性表達程度低于shh組,差異比較均有統(tǒng)計學意義(p0.05);細胞劃痕實驗檢測:對照組細胞遷徙距離24h、36h和48h分別為8.2000±1.4832μm、16.8000±1.0955μm、25.4000±1.1402μm,shh組分別為15.6000±2.0736μm、21.8000±1.9235μm、35.2000±0.8367μm,shh+cpa組分別11.4000±1.9494μm、18.4000±1.5166μm、28.2000±0.4472μm,即相同時間點shh組細胞遷徙距離多于對照組,shh+cpa組細胞遷徙距離少于shh組,差異比較均有統(tǒng)計學意義(p0.05);brdu摻入實驗檢測:對照組增殖活性為0.52±0.11,shh組為0.67±0.12,shh+cpa組為0.55±0.09,shh組細胞增殖活性高于對照組,shh+cpa組細胞增殖活性低于shh組,兩組差異比較均有統(tǒng)計學意義(p0.05);i型膠原elisa檢測:對照組為5.36±0.52,shh組為9.22±0.68,shh+cpa組為7.8±0.63,即shh組細胞產(chǎn)生i型膠原的量多于對照組,shh+cpa組細胞產(chǎn)生i型膠原的量少于shh組,兩組差異比較均有統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論:1.利用免疫磁珠分選法可以成功分離純化腎臟周細胞并繼續(xù)培養(yǎng)。2.SHH可以通過上調Hh信號通路而促進腎周細胞向肌成纖維細胞方向發(fā)生表型轉化。3.CPA可以抑制上述表型轉化的程度。
【關鍵詞】：周細胞 Hedgehog信號通路 SHH蛋白 Cyclopamine
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 設計思路13-14
• 材料與方法14-23
• 結果23-30
• 討論30-37
• 結論37-38
• 參考文獻38-43
• 英漢縮略詞對照表43-44
• 致謝44-45
• 綜述 腎間質纖維化發(fā)生機制研究進展45-53
• 參考文獻50-53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王應利;郭斌;惠延年;張曉光;陳立軍;馬吉獻;;免疫磁珠法原代分離培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管周細胞[J];眼科新進展;2005年06期

2 趙華;張凱;;Shh基因與消化道腫瘤的關系[J];醫(yī)學綜述;2013年02期

  本文關鍵詞：Hedgehog信號通路介導血管周細胞參與腎間質纖維化的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：285975