本文關(guān)鍵詞：Hedgehog信號通路介導(dǎo)血管周細(xì)胞參與腎間質(zhì)纖維化的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的:腎間質(zhì)纖維化(Renal interstitial fibrosis,RIF)是各種慢性腎病隨病程進(jìn)展到最終階段的相同病理生理表現(xiàn),嚴(yán)重威脅著患者健康。該病變表現(xiàn)腎間質(zhì)中肌成纖維細(xì)胞顯著增殖,細(xì)胞外膠原分泌增多,腎單位損傷及功能進(jìn)行性下降為特征。因此,為探索行之有效的防治措施,需徹底明確該病變機(jī)制。肌成纖維細(xì)胞的來源一直是本病變探討的焦點(diǎn),相關(guān)文章表明,其來源或許涉及多種細(xì)胞。長期以來,腎小管上皮細(xì)胞-間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)機(jī)制得到眾多學(xué)者首肯,但近來有學(xué)者提出不同觀點(diǎn),認(rèn)為RIF與受Hh信號通路調(diào)節(jié)的周細(xì)胞的關(guān)系似乎更大。因此,本研究擬通過對Hh信號通路激活時(shí)周細(xì)胞各項(xiàng)特征變化的檢測來探索Hh信號通路是否參與了周細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞方向轉(zhuǎn)分化,并且是否可以被Hh信號通路的相應(yīng)配體所干預(yù)。材料與方法:選用健康BALB/c乳鼠,雌雄不限,通過乳鼠腎細(xì)胞原代培養(yǎng),用免疫磁珠分選技術(shù)分離純化,并將所獲得的細(xì)胞通過形態(tài)學(xué)觀察和免疫細(xì)胞化學(xué)NG2、SMA和CD31檢測,鑒定是否符合周細(xì)胞特征,經(jīng)三次傳代培養(yǎng),收集周細(xì)胞。將已經(jīng)純化的周細(xì)胞分為對照組、SHH組和SHH+CPA組三組。對照組均于0 h、24 h分別加終濃度為0.2%BSA的PBS;SHH組于0 h、24 h分別加終濃度為1.5ng/mL SHH蛋白;SHH+CPA組在SHH組基礎(chǔ)上于每個(gè)SHH的添加時(shí)間點(diǎn)前2 h加終濃度為0.25μm/mLCPA干預(yù)。干預(yù)結(jié)束后,均行免疫細(xì)胞化學(xué)sma檢測、brdu摻入實(shí)驗(yàn)檢測、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測和i型膠原elisa檢測。結(jié)果:1.通過乳鼠腎細(xì)胞原代培養(yǎng),免疫磁珠分離純化,經(jīng)倒置相差顯微鏡觀察,形態(tài)學(xué)符合周細(xì)胞特征:細(xì)胞寬大扁平,形狀不規(guī)則,并伴數(shù)個(gè)突起,胞核居中,單核或雙核;ng2和sma免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽性表達(dá),cd31免疫細(xì)胞化學(xué)染色陰性表達(dá),證實(shí)為周細(xì)胞。2.細(xì)胞經(jīng)干預(yù)行上述檢測,免疫細(xì)胞化學(xué)sma檢測:對照組細(xì)胞質(zhì)中陽性表達(dá)程度為121.3±13.7,shh組為168±21.0,shh+cpa組為132.1±19.8,即shh組陽性表達(dá)程度高于對照組,shh+cpa組陽性表達(dá)程度低于shh組,差異比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測:對照組細(xì)胞遷徙距離24h、36h和48h分別為8.2000±1.4832μm、16.8000±1.0955μm、25.4000±1.1402μm,shh組分別為15.6000±2.0736μm、21.8000±1.9235μm、35.2000±0.8367μm,shh+cpa組分別11.4000±1.9494μm、18.4000±1.5166μm、28.2000±0.4472μm,即相同時(shí)間點(diǎn)shh組細(xì)胞遷徙距離多于對照組,shh+cpa組細(xì)胞遷徙距離少于shh組,差異比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);brdu摻入實(shí)驗(yàn)檢測:對照組增殖活性為0.52±0.11,shh組為0.67±0.12,shh+cpa組為0.55±0.09,shh組細(xì)胞增殖活性高于對照組,shh+cpa組細(xì)胞增殖活性低于shh組,兩組差異比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);i型膠原elisa檢測:對照組為5.36±0.52,shh組為9.22±0.68,shh+cpa組為7.8±0.63,即shh組細(xì)胞產(chǎn)生i型膠原的量多于對照組,shh+cpa組細(xì)胞產(chǎn)生i型膠原的量少于shh組,兩組差異比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1.利用免疫磁珠分選法可以成功分離純化腎臟周細(xì)胞并繼續(xù)培養(yǎng)。2.SHH可以通過上調(diào)Hh信號通路而促進(jìn)腎周細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞方向發(fā)生表型轉(zhuǎn)化。3.CPA可以抑制上述表型轉(zhuǎn)化的程度。
【關(guān)鍵詞】：周細(xì)胞 Hedgehog信號通路 SHH蛋白 Cyclopamine
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 設(shè)計(jì)思路13-14
• 材料與方法14-23
• 結(jié)果23-30
• 討論30-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 英漢縮略詞對照表43-44
• 致謝44-45
• 綜述 腎間質(zhì)纖維化發(fā)生機(jī)制研究進(jìn)展45-53
• 參考文獻(xiàn)50-53

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王應(yīng)利;郭斌;惠延年;張曉光;陳立軍;馬吉獻(xiàn);;免疫磁珠法原代分離培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞[J];眼科新進(jìn)展;2005年06期

2 趙華;張凱;;Shh基因與消化道腫瘤的關(guān)系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年02期

  本文關(guān)鍵詞：Hedgehog信號通路介導(dǎo)血管周細(xì)胞參與腎間質(zhì)纖維化的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：285975