本文關鍵詞：硼替佐米調控泛素連接酶E3家族成員表達水平對前列腺癌抑制作用的分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:前列腺癌是危害全世界男性健康的首要惡性腫瘤之一,在歐美等西方國家前列腺癌的年發(fā)病率居男性腫瘤的第1位,死亡率居第2位,在我國,前列腺癌發(fā)病率已躍居為男性惡性腫瘤的第3位。前列腺癌常為隱匿發(fā)病,確診時多已經(jīng)發(fā)生浸潤或轉移,其高死亡率及高術后復發(fā)率主要與其易轉移有關,死于前列腺癌的患者中85%~100%合并遠處轉移。前列腺癌細胞最遠轉移部位是骨,晚期前列腺癌骨轉移十分常見。大多數(shù)發(fā)生遠處轉移的前列腺癌會發(fā)展為雄激素非依賴性前列腺癌,因此常規(guī)的內(nèi)分泌治療效果不理想。目前針對發(fā)生遠處轉移的前列腺癌尚無有效的治療方法,預后極差,生存期一般短于2年。因此,深入探討前列腺癌發(fā)生機制,找尋治療前列腺癌關鍵靶點及切實有效的治療藥物迫在眉睫。泛素連接酶E3具有調控基因轉錄、穩(wěn)定質膜蛋白、降解錯誤蛋白與抑癌因子等多種作用,參與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程。泛素連接酶E3 Smurf1、Smurf2及WWP1均包括一個C2區(qū)域,2-4個WW區(qū)域和一個HECT區(qū)域,故具有相似的功能與共同的特性。大量的研究指出泛素連接酶E3家族成員與前列腺癌的發(fā)生、遷移、浸潤和轉移密切相關,如研究發(fā)現(xiàn)WWP1在多種侵襲性前列腺癌細胞株中高表達,而且下調WWP1表達水平可導致癌細胞生長抑制。硼替佐米是一種新型泛素-蛋白酶體通路抑制劑,目前主要作為抗多發(fā)性骨髓瘤藥物應用于臨床,雖有研究發(fā)現(xiàn)硼替佐米可抑制前列腺癌發(fā)生及浸潤,且可抑制腫瘤遠處轉移,但具體量-效關系、時間-效果關系及其作用機制尚不明確,已有資料提示硼替佐米對泛素連接酶E3 Smurf1、Smurf2及WWP1表達水平亦有調節(jié)作用。本研究旨在分析探討硼替佐米通過調控泛素連接酶E3 Smurf1、Smurf2及WWP1的表達水平,從而對前列腺癌細胞增殖發(fā)揮抑制作用,為Smurf1、Smurf2及WWP1作為前列腺癌治療新靶點及硼替佐米應用于前列腺癌治療提供依據(jù)。本研究應用一系列實驗方法,通過檢測藥物處理對雄激素非依賴性人前列腺癌PC3細胞株的細胞增殖率、Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA及蛋白表達水平的影響,進而探索硼替佐米對前列腺癌細胞增殖的作用模式及機制。方法:1細胞培養(yǎng)在嚴格無菌的環(huán)境下,將人前列腺癌PC3細胞接種于含DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),隔日換液,待細胞匯合度達90~95%時,以胰蛋白酶進行消化,并進行傳代培養(yǎng),待傳至3-5代后取細胞進行實驗。2分組2.1空白對照組(不進行任何藥物處理);2.2硼替佐米處理組(硼替佐米濃度梯度設置為:0.5、5、15、25μmol/L,作用時間:24 h、48 h,72 h)3細胞增殖率測定采用Brdu ELISA法測定各組細胞增殖情況及其活性變化。4細胞泛素連接酶Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA水平測定硼替佐米處理PC3細胞72小時后,提取細胞內(nèi)RNA。應用實時定量聚合酶鏈式反應(Real time-PCR,Real Time-Polymerase Chain Reaction)對各組細胞泛素連接酶WWP1、Smurf1及Smurf2 m RNA水平進行檢測。5細胞泛素連接酶Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達水平測定硼替佐米處理PC3細胞72小時后,提取蛋白并采用BCA法測定蛋白濃度。應用Western blotting方法對各組細胞泛素連接酶Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達水平進行檢測。6統(tǒng)計學方法本研究所得數(shù)據(jù)均錄入SPSS 18.0軟件進行分析處理,計量資料均以“均數(shù)±標準誤”表示,應用SNK-t檢驗法進行兩組比較,單因素方差分析AVON進行多組比較,以P0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。結果:1 Brdu ELISA結果顯示:1.1于藥物處理后24 h、48 h及72 h三個時間點,相較于對照組,硼替佐米處理組PC3細胞增殖率均顯著降低(P0.05),且PC3細胞增殖率與硼替佐米使用劑量負相關,即硼替佐米濃度越高,對PC3細胞增值率抑制作用越強,PC3細胞增值率數(shù)值越低,呈現(xiàn)劑量依賴性,且在25μmol/L的濃度下抑制作用最為顯著;1.2在藥物濃度分別為5、15及25μmol/L的硼替佐米處理組中,PC3細胞增值率與處理時間長短負相關,即硼替佐米處理時間越長,對PC3細胞增值率抑制作用越強,PC3細胞增值率數(shù)值越低,呈現(xiàn)時間依賴性。2 Real time-PCR結果顯示:經(jīng)藥物處理72 h后,相較于對照組,硼替佐米處理組PC3細胞中Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA水平顯著降低(P0.05),且在一定范圍內(nèi)Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA水平與硼替佐米使用劑量負相關,即硼替佐米濃度越高,PC3細胞中Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA轉錄水平越低,呈現(xiàn)劑量依賴性,且在25μmol/L的濃度下效果最為顯著。3 Western blotting結果顯示:經(jīng)藥物處理72 h后,相較于對照組,硼替佐米處理組PC3細胞中Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達水平顯著降低(P0.05),且在一定范圍內(nèi)Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達水平與硼替佐米使用劑量負相關,即硼替佐米濃度越高,PC3細胞中Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達水平越低,呈現(xiàn)劑量依賴性,且在25μmol/L的濃度下效果最為顯著。結論:1硼替佐米對雄激素非依賴性人前列腺癌PC3細胞增殖率的抑制作用在一定范圍內(nèi)隨著藥物濃度、作用時間的增加而增加,并呈劑量-時間依賴性。2在處理PC3細胞72 h后,硼替佐米可顯著降低PC3細胞中Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA水平(P0.05),且該作用呈現(xiàn)劑量依賴性。3在處理PC3細胞72 h后,硼替佐米可顯著降低PC3細胞中Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達水平(P0.05),且該作用呈現(xiàn)劑量依賴性。
【關鍵詞】：硼替佐米 前列腺癌 泛素連接酶 Smurfs WWP1
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-19
• 結果19-21
• 附圖21-25
• 附表25-27
• 討論27-31
• 結論31
• 參考文獻31-34
• 綜述 泛素連接酶E3 Nedd4-like家 族與癌癥關系的研究進展34-45
• 參考文獻40-44
• 附圖44-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Is NEDD4-1 a negative regulator of phosphatase and tensin homolog in gastric carcinogenesis?[J];World Journal of Gastroenterology;2012年43期

2 Ya-Chao Hou;Jing-Yu Deng;;Role of E3 ubiquitin ligases in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年03期

  本文關鍵詞：硼替佐米調控泛素連接酶E3家族成員表達水平對前列腺癌抑制作用的分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：285799