本文關(guān)鍵詞：硼替佐米調(diào)控泛素連接酶E3家族成員表達(dá)水平對(duì)前列腺癌抑制作用的分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:前列腺癌是危害全世界男性健康的首要惡性腫瘤之一,在歐美等西方國(guó)家前列腺癌的年發(fā)病率居男性腫瘤的第1位,死亡率居第2位,在我國(guó),前列腺癌發(fā)病率已躍居為男性惡性腫瘤的第3位。前列腺癌常為隱匿發(fā)病,確診時(shí)多已經(jīng)發(fā)生浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移,其高死亡率及高術(shù)后復(fù)發(fā)率主要與其易轉(zhuǎn)移有關(guān),死于前列腺癌的患者中85%~100%合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。前列腺癌細(xì)胞最遠(yuǎn)轉(zhuǎn)移部位是骨,晚期前列腺癌骨轉(zhuǎn)移十分常見。大多數(shù)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的前列腺癌會(huì)發(fā)展為雄激素非依賴性前列腺癌,因此常規(guī)的內(nèi)分泌治療效果不理想。目前針對(duì)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的前列腺癌尚無有效的治療方法,預(yù)后極差,生存期一般短于2年。因此,深入探討前列腺癌發(fā)生機(jī)制,找尋治療前列腺癌關(guān)鍵靶點(diǎn)及切實(shí)有效的治療藥物迫在眉睫。泛素連接酶E3具有調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄、穩(wěn)定質(zhì)膜蛋白、降解錯(cuò)誤蛋白與抑癌因子等多種作用,參與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程。泛素連接酶E3 Smurf1、Smurf2及WWP1均包括一個(gè)C2區(qū)域,2-4個(gè)WW區(qū)域和一個(gè)HECT區(qū)域,故具有相似的功能與共同的特性。大量的研究指出泛素連接酶E3家族成員與前列腺癌的發(fā)生、遷移、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),如研究發(fā)現(xiàn)WWP1在多種侵襲性前列腺癌細(xì)胞株中高表達(dá),而且下調(diào)WWP1表達(dá)水平可導(dǎo)致癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。硼替佐米是一種新型泛素-蛋白酶體通路抑制劑,目前主要作為抗多發(fā)性骨髓瘤藥物應(yīng)用于臨床,雖有研究發(fā)現(xiàn)硼替佐米可抑制前列腺癌發(fā)生及浸潤(rùn),且可抑制腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,但具體量-效關(guān)系、時(shí)間-效果關(guān)系及其作用機(jī)制尚不明確,已有資料提示硼替佐米對(duì)泛素連接酶E3 Smurf1、Smurf2及WWP1表達(dá)水平亦有調(diào)節(jié)作用。本研究旨在分析探討硼替佐米通過調(diào)控泛素連接酶E3 Smurf1、Smurf2及WWP1的表達(dá)水平,從而對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖發(fā)揮抑制作用,為Smurf1、Smurf2及WWP1作為前列腺癌治療新靶點(diǎn)及硼替佐米應(yīng)用于前列腺癌治療提供依據(jù)。本研究應(yīng)用一系列實(shí)驗(yàn)方法,通過檢測(cè)藥物處理對(duì)雄激素非依賴性人前列腺癌PC3細(xì)胞株的細(xì)胞增殖率、Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA及蛋白表達(dá)水平的影響,進(jìn)而探索硼替佐米對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖的作用模式及機(jī)制。方法:1細(xì)胞培養(yǎng)在嚴(yán)格無菌的環(huán)境下,將人前列腺癌PC3細(xì)胞接種于含DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),隔日換液,待細(xì)胞匯合度達(dá)90~95%時(shí),以胰蛋白酶進(jìn)行消化,并進(jìn)行傳代培養(yǎng),待傳至3-5代后取細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2分組2.1空白對(duì)照組(不進(jìn)行任何藥物處理);2.2硼替佐米處理組(硼替佐米濃度梯度設(shè)置為:0.5、5、15、25μmol/L,作用時(shí)間:24 h、48 h,72 h)3細(xì)胞增殖率測(cè)定采用Brdu ELISA法測(cè)定各組細(xì)胞增殖情況及其活性變化。4細(xì)胞泛素連接酶Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA水平測(cè)定硼替佐米處理PC3細(xì)胞72小時(shí)后,提取細(xì)胞內(nèi)RNA。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real time-PCR,Real Time-Polymerase Chain Reaction)對(duì)各組細(xì)胞泛素連接酶WWP1、Smurf1及Smurf2 m RNA水平進(jìn)行檢測(cè)。5細(xì)胞泛素連接酶Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達(dá)水平測(cè)定硼替佐米處理PC3細(xì)胞72小時(shí)后,提取蛋白并采用BCA法測(cè)定蛋白濃度。應(yīng)用Western blotting方法對(duì)各組細(xì)胞泛素連接酶Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究所得數(shù)據(jù)均錄入SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析處理,計(jì)量資料均以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示,應(yīng)用SNK-t檢驗(yàn)法進(jìn)行兩組比較,單因素方差分析AVON進(jìn)行多組比較,以P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 Brdu ELISA結(jié)果顯示:1.1于藥物處理后24 h、48 h及72 h三個(gè)時(shí)間點(diǎn),相較于對(duì)照組,硼替佐米處理組PC3細(xì)胞增殖率均顯著降低(P0.05),且PC3細(xì)胞增殖率與硼替佐米使用劑量負(fù)相關(guān),即硼替佐米濃度越高,對(duì)PC3細(xì)胞增值率抑制作用越強(qiáng),PC3細(xì)胞增值率數(shù)值越低,呈現(xiàn)劑量依賴性,且在25μmol/L的濃度下抑制作用最為顯著;1.2在藥物濃度分別為5、15及25μmol/L的硼替佐米處理組中,PC3細(xì)胞增值率與處理時(shí)間長(zhǎng)短負(fù)相關(guān),即硼替佐米處理時(shí)間越長(zhǎng),對(duì)PC3細(xì)胞增值率抑制作用越強(qiáng),PC3細(xì)胞增值率數(shù)值越低,呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。2 Real time-PCR結(jié)果顯示:經(jīng)藥物處理72 h后,相較于對(duì)照組,硼替佐米處理組PC3細(xì)胞中Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA水平顯著降低(P0.05),且在一定范圍內(nèi)Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA水平與硼替佐米使用劑量負(fù)相關(guān),即硼替佐米濃度越高,PC3細(xì)胞中Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA轉(zhuǎn)錄水平越低,呈現(xiàn)劑量依賴性,且在25μmol/L的濃度下效果最為顯著。3 Western blotting結(jié)果顯示:經(jīng)藥物處理72 h后,相較于對(duì)照組,硼替佐米處理組PC3細(xì)胞中Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.05),且在一定范圍內(nèi)Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達(dá)水平與硼替佐米使用劑量負(fù)相關(guān),即硼替佐米濃度越高,PC3細(xì)胞中Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達(dá)水平越低,呈現(xiàn)劑量依賴性,且在25μmol/L的濃度下效果最為顯著。結(jié)論:1硼替佐米對(duì)雄激素非依賴性人前列腺癌PC3細(xì)胞增殖率的抑制作用在一定范圍內(nèi)隨著藥物濃度、作用時(shí)間的增加而增加,并呈劑量-時(shí)間依賴性。2在處理PC3細(xì)胞72 h后,硼替佐米可顯著降低PC3細(xì)胞中Smurf1、Smurf2及WWP1 m RNA水平(P0.05),且該作用呈現(xiàn)劑量依賴性。3在處理PC3細(xì)胞72 h后,硼替佐米可顯著降低PC3細(xì)胞中Smurf1、Smurf2及WWP1蛋白表達(dá)水平(P0.05),且該作用呈現(xiàn)劑量依賴性。
【關(guān)鍵詞】：硼替佐米 前列腺癌 泛素連接酶 Smurfs WWP1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-25
• 附表25-27
• 討論27-31
• 結(jié)論31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 綜述 泛素連接酶E3 Nedd4-like家 族與癌癥關(guān)系的研究進(jìn)展34-45
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 附圖44-45
• 致謝45-46
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷46

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 ;Is NEDD4-1 a negative regulator of phosphatase and tensin homolog in gastric carcinogenesis?[J];World Journal of Gastroenterology;2012年43期

2 Ya-Chao Hou;Jing-Yu Deng;;Role of E3 ubiquitin ligases in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年03期

  本文關(guān)鍵詞：硼替佐米調(diào)控泛素連接酶E3家族成員表達(dá)水平對(duì)前列腺癌抑制作用的分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：285799