目的:探討在氧化應(yīng)激狀態(tài)下,Nr4a1改善腎小球系膜細(xì)胞炎癥纖維化的生物學(xué)作用,同時(shí)通過探討Sirt1對(duì)Nr4a1的調(diào)控關(guān)系,為緩解糖尿病腎病腎小球纖維化提供科學(xué)依據(jù)。方法:1.在糖尿病腎病條件下,應(yīng)用免疫共聚焦方法檢測(cè)C57/LB6糖尿病模型小鼠的腎臟組織炎癥纖維化因子的表達(dá),應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)氧化應(yīng)激條件下腎小球系膜細(xì)胞中炎癥纖維化因子的表達(dá)。2.在氧化應(yīng)激條件下,應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測(cè)腎小球系膜細(xì)胞株(HBZY-1)中Sirt1、Nr4a1、NF-κB的水平,同時(shí)應(yīng)用NMN、Nr4a1的激動(dòng)劑和抑制劑分別處理腎小球系膜細(xì)胞,探討Sirt1對(duì)Nr4a1表達(dá)的影響。3.通過免疫共沉淀檢測(cè)Sirt1與Nr4a1之間的相互作用關(guān)系。結(jié)果:在野生型小鼠腎小球和腎小囊中纖維化因子α-sma表達(dá)均很少,隨著糖尿病程度的加重,小鼠的腎臟組織中炎癥因子NF-κB和纖維化因子α-sma的表達(dá)均明顯增多(P0.01),而Sirt1表達(dá)卻明顯減少。在離體高濃度葡萄糖條件下培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞中,與低濃度葡萄糖(LG)對(duì)照組相比,Sirt1和Nr4a1表達(dá)明顯減少(P0.01),而NF-κB相對(duì)表達(dá)水平明顯升高(P0.01);當(dāng)加入NMN干預(yù)后,細(xì)胞中Sirt1和Nr4a1表達(dá)則較高糖對(duì)照組顯著升高(P0.01),而NF-κB相對(duì)表達(dá)水平明顯降低(P0.01)。應(yīng)用免疫印跡和免疫熒光驗(yàn)證均得到同樣的結(jié)果。進(jìn)一步應(yīng)用免疫共沉淀研究發(fā)現(xiàn),在正常糖濃度條件下,Sirt1與Nr4a1之間確實(shí)存在蛋白的相互作用。結(jié)論:1.糖尿病小鼠腎小球細(xì)胞和氧化應(yīng)激條件下的腎小球系膜細(xì)胞炎癥(NF-κB)和纖維化因子(α-sma)的表達(dá)均升高,同時(shí)Sirt1與Nr4a1表達(dá)均受到抑制;2.NMN可以使腎小球系膜細(xì)胞中Sirt1表達(dá)增高,從而促進(jìn)Nr4a1表達(dá)和減輕DN腎臟炎癥纖維化。3.Sirt1可以通過Nr4a1調(diào)節(jié)NF-κB水平,從而達(dá)到緩解腎小球炎癥纖維化的作用。
【學(xué)位單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R587.2;R692.9
【部分圖文】：

30圖1.免疫共聚焦方法檢測(cè)胰島素基因突變的轉(zhuǎn)基因糖尿病小鼠腎臟組織 α-sma 和 NF- κ B 的Fig1 Immunoconfocal assay for detection of alpha-sma and NF-kappa B expression in kidneys ofinsulin-mutant transgenic diabetic mice , Mean±SD,n=10,*P<0.05, **P<0.01.圖中藍(lán)色熒光表示細(xì)胞核，綠色熒光表示 α-sma，紅色熒光表示 NF-κB。A-D 及 Normal 表示 α和 NF-κB 在正常小鼠腎臟組織的表達(dá)， E-H 及 Moderate DN 表示 α-sma 和 NF-κB 中度糖小鼠腎臟組織中的表達(dá)，I-L 及 Serious DN 表示 α-sma 和 NF-κB 重度糖尿病小鼠腎臟組織中達(dá)。

31圖2. 免疫共聚焦方法檢測(cè)胰島素基因突變的轉(zhuǎn)基因糖尿病小鼠腎臟組織 NF- κ B 和 Sirt1 的表達(dá)Fig2 Detection of expression of NF-kappa B and Sirt1 in diabetic kidney tissue of transgenic mice withinsulin gene mutation by immunoconfocal assay, Mean±SD,n=10,*P<0.05,**P<0.01.圖中藍(lán)色熒光表示細(xì)胞核，綠色熒光表示 NF-κB，紅色熒光表示 Sirt1。A-D 及 Normal 表示 NF-κB和 Sirt1 在正常小鼠腎臟組織的表達(dá)，E-H 及 Serious DN 表示 NF-κB 和 Sirt1 在重度糖尿病小鼠腎臟組織中的表達(dá)。通過免疫共聚焦檢測(cè)胰島素基因突變轉(zhuǎn)基因糖尿病小鼠的腎臟組織中的 α-sma 和 NF-κB 表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)，與野生的正常小鼠(圖 1 A-D)相比，糖尿病組小鼠(圖 1 E-L)的腎小球明顯萎縮；在觀察 α-sma 與 NF-κB 在腎臟組織中的定位時(shí)發(fā)現(xiàn)，α-sma 在野生正常小鼠腎小球和腎小囊?guī)缀醪槐磉_(dá)(圖 1 B，P<0.01)

2.2 免疫熒光法檢測(cè)氧化應(yīng)激條件下腎小球系膜細(xì)胞中炎癥纖維化因子的表達(dá)圖3. 免疫熒光法檢測(cè) NF-κB 和 Fibronectin 在腎小球系膜細(xì)胞中的表達(dá)Figure 3 Immunofluorescence detection of the expression of NF-kappa B and Fibronectin in glomerularmesangial cells,Mean±SD,n=10,*P<0.05,**P<0.01.圖中圖中藍(lán)色熒光表示細(xì)胞核，綠色熒光表示 NF-κB，紅色熒光表示 Fibronectin。A-D 表示 NF-κB和 Fibronectin 在 200 mmol·L﹣1的高濃度葡萄糖（HG）培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞中的表達(dá)，E-H 表示 NF-κB 和 Fibronectin 在 0.56 mmol·L﹣1的低濃度葡萄糖（LG）培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞中的表達(dá)。
【參考文獻(xiàn)】

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1 于天水;官大威;馬勇;張冬梅;;肌成纖維細(xì)胞在纖維化疾病中的研究進(jìn)展[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2013年02期

2 尹德海;梁曉春;;從腎小球系膜細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化談中醫(yī)藥防治糖尿病腎病機(jī)制研究思路[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2008年06期

本文編號(hào)：2850207