發(fā)布時間：2020-10-18 21:02

　　 背景:順鉑是常用治療腫瘤的藥物,也是藥物性急性腎損傷的主要病因之一,其誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞損傷的機(jī)制較復(fù)雜。除了直接損傷細(xì)胞DNA外,活性氧簇(ROS)和ROS產(chǎn)生的主要細(xì)胞器線粒體損傷是否參與了順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷發(fā)生還需要進(jìn)一步研究。目的:在順鉑誘導(dǎo)的急性腎小管損傷中,是否存在線粒體呼吸鏈蛋白表達(dá)變化和ROS生成。方法:體內(nèi)研究中將Balb/c小鼠分為對照組和順鉑組(順鉑腹腔注射)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。體外實(shí)驗(yàn)中使用不同濃度順鉑孵育HK-2細(xì)胞。生化檢測血清肌酐、尿素氮,PAS、PASM腎臟病理改變,TUNEL及免疫熒光染色觀察腎臟細(xì)胞凋亡以及cleaved caspase3的表達(dá)。免疫組化染色觀察F4/80陽性細(xì)胞表達(dá)。Western Blot觀察cleaved caspase 3/caspase 3,超氧化物歧化酶(SOD),過氧化氫酶(catalase),谷胱甘肽過氧化物酶4(GPX4),線粒體分裂動力蛋白1(DRP1),磷酸化線粒體分裂動力蛋白1(P-DRP1),線粒體分裂蛋白受體1(FIS1),線粒體外膜融合蛋白(MFN1),煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脫氫酶1(ND1),NADH脫氫酶2(ND2),NADH脫氫酶3(ND3),NADH脫氫酶4(ND4),NADH脫氫酶4L(ND4L),Real-time PCR檢測BAX、Bcl-2、Bcl-xl及線粒體DNA拷貝數(shù),免疫熒光觀察ROS與細(xì)胞凋亡,DCFH-DA檢測細(xì)胞ROS生成,JC-1檢測線粒體膜電位改變。結(jié)果:對照組和順鉑組小鼠的肌酐分別為8.79±1.21μmol/L和68.03±1.16μmol/L(P0.05),兩組尿素氮分別為16.00±5.29mmol/L和42.33±5.51mmol/L(P0.05)。PAS染色見順鉑組小鼠腎臟小管上皮細(xì)胞腫脹明顯,空泡樣變顯著。順鉑組小鼠腎臟中F4/80陽性細(xì)胞較對照組顯著增多。TUNEL染色顯示順鉑組較對照組細(xì)胞凋亡增多,和對照組比較順鉑組cleaved caspase 3/caspase 3表達(dá)增加了206.04±26.94%(P0.05)、Bax較對照組上調(diào)825.35±60.69%(P0.05),Bcl-2、Bcl-xl分別較對照組下調(diào)了99.20±11.55%(P0.05)、86.26±28.35%(P0.05)提示存在細(xì)胞凋亡。順鉑組cleaved caspase 3和3硝基酪氨酸(3-NT)熒光共染較對照組顯著增多,順鉑組較對照組的SOD、catalase、GPX4基因轉(zhuǎn)錄分別下降了99.45±6.65%(P0.05)、89.27±1.01%(P0.05)和76.59±14.73%(P0.05),蛋白表達(dá)分別下降了59.50±16.26%(P0.05)、60.00±2.83%(P0.05)和57.00±14.14%(P0.05)。在體外實(shí)驗(yàn)中,順鉑濃度依賴地降低了HK-2細(xì)胞的線粒體膜電位。200μM處理組cleaved caspase 3/caspase 3增加了1.55±0.18倍(P0.05),20μM、100μM、200μM順鉑孵育使細(xì)胞Bax轉(zhuǎn)錄分別上調(diào)了3.63±0.28倍(P0.05)、4.33±0.19倍(P0.05)、5.67±0.40倍(P0.05),Bcl-2轉(zhuǎn)錄下降了64.69±1.15%(P0.05)、84.74±9.22%(P0.05)、73.00±20.93%(P0.05)。ROS熒光顯示200μM順鉑組熒光顯著增強(qiáng)。20μM、100μM和200μM處理組SOD表達(dá)分別下降了16.85±4.88%(P0.05),20.02±8.92%(P0.05),41.29±8.62%(P0.05);catalase表達(dá)分別為對照組的1.11±0.15倍(P0.05),0.61±0.04倍(P0.05),0.15±0.02倍(P0.05);GPX4表達(dá)分別下降了43.94±11.44%(P0.05),47.37±7.11%(P0.05),49.08±8.09%(P0.05)。N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制ROS后改善順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。順鉑導(dǎo)致Balb/c小鼠FIS1蛋白表達(dá)為對照組的1.71±0.43(P0.05),P-DRP1/DRP1表達(dá)為0.68±0.35(P0.05),MFN1下降49.53±25.45%(P0.05)。順鉑組mt DNA拷貝數(shù)較對照組下降62.74±3.26%(P0.05),線粒體復(fù)合體I ND1、ND2、ND3基因轉(zhuǎn)錄較對照組分別下降47.35±2.49%(P0.05)、46.99±4.69%(P0.05)和54.60±2.33%(P0.05),ND1、ND3、ND4、ND4L蛋白表達(dá)下降45.89±15.79%(P0.05)、48.66±6.29%(P0.05)、45.12±11.66%(P0.05)、47.41±8.18%(P0.05)。20μM、100μM和200μM順鉑處理組P-DRP1/DRP1表達(dá)為0.32±0.24(P0.05)、0.45±0.23(P0.05)、0.12±0.47(P0.05),200μM處理組FIS1蛋白表達(dá)為對照組的2.17±0.21(P0.05),MFN1蛋白表達(dá)為對照組的0.41±0.09(P0.05)。200μM處理組線粒體復(fù)合體I中ND1、ND2、ND3轉(zhuǎn)錄分別為對照組的0.29±0.22(P0.05)、0.05±0.07(P0.05)、0.05±0.02(P0.05)。結(jié)論:順鉑可以誘導(dǎo)急性腎損傷發(fā)生,腎小管上皮細(xì)胞凋亡增加。線粒體復(fù)合體I蛋白變化和ROS產(chǎn)生可能參與了順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R692
【部分圖文】：

小鼠腎功能

- 27 –Figure 3. pathological changes of kidney in mice圖 3 小鼠腎臟 PAS、PASM 腎臟病理。放大 200 倍1.3.5 順鉑組小鼠腎臟組織 F4/80 染色示巨噬細(xì)胞增多我們對腎臟組織行 F4/80 免疫組化染色，順鉑組小鼠腎臟組織陽性染色顯著較對照組增多，提示順鉑導(dǎo)致急性腎損傷中伴隨炎癥細(xì)胞浸潤，如圖 4。

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文藍(lán)色熒光為 dapi，箭頭提示綠色熒光與藍(lán)色熒光共定位顯示。1.3.7 順鉑組小鼠腎臟組織中 cleaved caspase 3 表達(dá)增高Western Blot 檢測順鉑組與對照組小鼠腎臟組織中 cleaved caspase 3/caspase 3相對表達(dá)，結(jié)果顯示順鉑組 cleaved caspase3/caspase3 較對照組升高 2.60±0.27（P＜0.05）如圖 6，提示順鉑通過 caspase 途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郎夏冰;楊毅;陳江華;;中國住院患者急性腎損傷流行病學(xué)調(diào)查現(xiàn)狀[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年02期

2 劉鵬;何永生;;來那度胺相關(guān)性急性腎損傷1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2019年09期

3 張美娟;朱斌;朱彩鳳;裘怡;袁博寒;孫玥;劉玲;李先法;毛俐嬋;李秋芬;程曉霞;陳洪宇;;原發(fā)性腎病綜合征并發(fā)急性腎損傷的危險(xiǎn)因素分析的病例對照研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2018年11期

4 楊靜;楊愛祥;;急性腎損傷的預(yù)后相關(guān)因素分析[J];中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育;2018年34期

5 黃每芹;;血清胱抑素C預(yù)測神經(jīng)重癥患者急性腎損傷的臨床效果分析[J];臨床研究;2019年01期

6 李文哲;潘鵬飛;宋云林;于湘友;;急性腎損傷的液體管理[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2018年05期

7 任亢宗;沈琳;劉明;龐永誠;龔瑞瑩;魏丹霞;;老年多器官功能不全綜合征急性腎損傷的中醫(yī)辨治理論探究[J];中國中醫(yī)急癥;2019年01期

8 許書添;劉志紅;;成纖維細(xì)胞生長因子23與急性腎損傷[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2018年06期

9 任春霞;余自成;;藥物性急性腎損傷的研究進(jìn)展[J];中國新藥與臨床雜志;2019年05期

10 王洲東;;不同腎保護(hù)治療方案對體外沖擊波碎石術(shù)后急性腎損傷的影響[J];心理月刊;2019年11期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張珍;細(xì)胞焦亡在對比劑所致急性腎損傷中的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2018年

2 趙陽;乳脂球表皮生長因子8在膿毒癥急性腎損傷中保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2019年

3 王永芳;功能磁共振評價糖尿病腎病基礎(chǔ)上碘對比劑誘導(dǎo)急性腎損傷及SIRT1的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2019年

4 李荃新;NLRC5在急性腎損傷中的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2018年

5 逯明蕾;GSK3β調(diào)控非Keap1依賴的Nrf2抗氧化反應(yīng)參與急性腎損傷到慢性腎臟病轉(zhuǎn)變的研究[D];鄭州大學(xué);2018年

6 朱鳳鳴;人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞對小鼠急性腎損傷及其慢性化的保護(hù)效應(yīng)及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2017年

7 姜群群;有關(guān)乙肝相關(guān)慢加急性肝衰竭與肝硬化失代償期患者中急性腎損傷的臨床研究[D];華中科技大學(xué);2018年

8 韓紅;急性呼吸窘迫綜合征相關(guān)急性腎損傷危險(xiǎn)因素的回顧性研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

9 陳曦;心臟術(shù)后急性腎損傷預(yù)測評分與因子的研究[D];上海交通大學(xué);2017年

10 張路路;MiR-192及其靶基因BLCAP在缺血再灌注性急性腎損傷中的作用機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 呂智全;ICU內(nèi)急性腎損傷實(shí)時電子預(yù)警和防治Bundle體系的構(gòu)建及其意義[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2019年

2 張貝貝;血清胱抑素C聯(lián)合視黃醇結(jié)合蛋白在新生兒急性腎損傷早期診斷中的預(yù)測價值[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2019年

3 厲佳琦;膳食脂肪酸對急性腎損傷的作用及機(jī)制研究[D];江南大學(xué);2019年

4 李千惠;基于機(jī)器學(xué)習(xí)的急性腎損傷預(yù)測及臨床應(yīng)用優(yōu)化[D];北京交通大學(xué);2019年

5 李世瑤;抑酸、解聚、降脂、抗凝藥與住院老年患者急性腎臟病相關(guān)性探討[D];湖南師范大學(xué);2019年

6 付詩奇;胱抑素C診斷肝硬化患者急性腎損傷和肝腎綜合征的系統(tǒng)回顧和meta分析[D];西安醫(yī)學(xué)院;2019年

7 張晶晶;社區(qū)獲得性和醫(yī)院獲得性急性腎損傷的單中心研究[D];石河子大學(xué);2019年

8 陳鳳;社區(qū)獲得性急性腎損傷的危險(xiǎn)因素及中醫(yī)證候分析[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2018年

9 王位;環(huán)黃芪醇對慶大霉素誘導(dǎo)小鼠急性腎損傷的保護(hù)作用和機(jī)制[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2019年

10 高博文;公英二子湯對脂多糖誘導(dǎo)膿毒癥急性腎損傷模型大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2019年

本文編號：2846808