發(fā)布時(shí)間：2020-10-13 14:30

　　 【研究背景及目的】世界范圍內(nèi),膀胱癌位列男性最常見(jiàn)實(shí)體瘤的第4位,在女性位列第7位。我國(guó)大城市中膀胱癌的發(fā)病率已位列男性常見(jiàn)惡性腫瘤的第6位,而死亡率位列第7位。在初診的膀胱癌病人中,70-80%為NMIBC病人,就是我們所說(shuō)的非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌,一般采用經(jīng)尿道腫瘤電切的微創(chuàng)手術(shù)方法治療,如腫瘤無(wú)進(jìn)展,可達(dá)治愈目的。但是,約30%的NMIBC會(huì)進(jìn)展為MIBC,此時(shí)即便采用膀胱全切+盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù),2年內(nèi)仍有約50%的MIBC病人會(huì)出現(xiàn)局部復(fù)發(fā),3年生存率小于50%,預(yù)后差。但是,目前臨床上缺乏預(yù)測(cè)NMIBC進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的分子標(biāo)志物,更缺乏阻斷膀胱癌進(jìn)展的靶向藥物。患者現(xiàn)階段的診斷和隨訪主要依據(jù)膀胱鏡檢查,但其操作有創(chuàng),成本高;因此研究基因改變?cè)诎螂装┲兴鸬淖饔?深入探索膀胱癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,研究鑒別不同級(jí)別和分期膀胱癌的分子標(biāo)記物,可以更早期發(fā)現(xiàn)膀胱癌患者,判斷其進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn),對(duì)于最終延長(zhǎng)膀胱癌患者的壽命和提高患者生活質(zhì)量意義重大。隨著基因芯片分析、生物信息學(xué)分析等技術(shù)的不斷發(fā)展,大量有一定診斷及判斷預(yù)后價(jià)值的膀胱癌分子標(biāo)記物在基礎(chǔ)研究中得到證實(shí),癌癥基因測(cè)序已應(yīng)用于臨床研究,將來(lái)有希望納入常規(guī)的臨床診治。我們前期運(yùn)用高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序手段,以膀胱癌病人組織標(biāo)本為研究對(duì)象,篩選出大量膀胱癌中差異表達(dá)的分子標(biāo)記物。對(duì)測(cè)序結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn),CENPF基因在膀胱癌組織中表達(dá)明顯高于正常組織,并且在肌層浸潤(rùn)性膀胱癌中的表達(dá)較非肌層浸潤(rùn)高,具有表達(dá)的穩(wěn)定性和繼續(xù)實(shí)驗(yàn)的可行性。CENPF(著絲粒蛋白F)主要的功能是調(diào)控細(xì)胞有絲分裂和細(xì)胞周期的正常進(jìn)行。CENPF被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中表達(dá)升高,但在膀胱癌中未有相關(guān)研究。【研究方法】1、通過(guò)RT-PCR和免疫組化實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量對(duì)CENPF在膀胱癌患者組織中的表達(dá)情況進(jìn)行了驗(yàn)證,并對(duì)不同分期和分期的膀胱癌患者組織中的表達(dá)進(jìn)行了比較;2、收集膀胱癌患者的尿液以及對(duì)照組患者的尿液,通過(guò)ELISA的方法對(duì)尿中CENPF的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),并通過(guò)對(duì)比分析其臨床診斷價(jià)值。3、選擇高表達(dá)的膀胱癌細(xì)胞系,通過(guò)轉(zhuǎn)染SiRNA使CENPF表達(dá)降低后,驗(yàn)證CENPF對(duì)膀胱癌細(xì)胞在細(xì)胞生物學(xué)行為上的作用,包括細(xì)胞的增殖實(shí)驗(yàn)、觀察遷移和侵襲能力變動(dòng)的transwell小室實(shí)驗(yàn),還通過(guò)流式細(xì)胞系查看細(xì)胞周期的變化,和細(xì)胞凋亡的增減進(jìn)行了檢測(cè)�！窘Y(jié)果】1、30例不同類型膀胱癌患者的組織樣本的PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,膀胱癌組織中的CENPF表達(dá)升高,和正常組織中CENPF的表達(dá)差異顯著,并且肌層浸潤(rùn)性膀胱癌組織中的表達(dá)高于非肌層浸潤(rùn)膀胱癌患者的組織,在另外30例樣本的免疫組化實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果,與測(cè)序結(jié)果一致。2、膀胱癌患者尿液中CENPF的表達(dá)高于正常對(duì)照組,并且與腫瘤分級(jí)分期相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、CENPF被干擾后,膀胱癌細(xì)胞T24的細(xì)胞增殖速度減緩,遷移侵襲能力減低、細(xì)胞周期進(jìn)程受阻,細(xì)胞凋亡增多,證實(shí)了CENPF能影響腫瘤細(xì)胞的功能�！窘Y(jié)論】CENPF在膀胱癌組織中高表達(dá),并于腫瘤惡性程度相關(guān),CENPF在膀胱癌患者尿液中表達(dá)升高,在不同分級(jí)和分期的膀胱癌患者尿液中表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CENPF能影響膀胱癌細(xì)胞的腫瘤生物學(xué)功能。CENPF有望成為膀胱癌診斷、鑒別肌層浸潤(rùn)性膀胱癌和非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的標(biāo)志以及治療的靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R737.14
【部分圖文】：

圖 1、全基因組測(cè)序樣本中 CENPF 差異表達(dá)值圖注：(T 代表腫瘤，N 代表正常組織，每對(duì)組織的 N 都在相應(yīng) T 的右側(cè)；525、611、613、686、831073 為肌層浸潤(rùn)性膀胱癌組織標(biāo)本，538、554、567、596、663為非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌標(biāo)本，可以看出 10 對(duì)樣本中有九對(duì)，腫瘤中 CENPF 的表達(dá)高于正常，而其中左側(cè)的五對(duì)肌層浸潤(rùn)的膀胱癌組織中 CENPF 的表達(dá)高于右側(cè)非肌層浸潤(rùn)膀胱癌組織)。（二）擴(kuò)大樣本 PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.CENPF 的表達(dá)趨勢(shì)與基因測(cè)序結(jié)果一致。通過(guò)實(shí)時(shí)定量 PCR 檢測(cè) 30 對(duì)膀胱癌組織標(biāo)本CENPF 的表達(dá)量：30對(duì)中有24對(duì)腫瘤中的CENPF 表達(dá)高于癌旁正常組織，另外 6 對(duì)腫瘤中 CENPF 的表達(dá)低于正常，高表達(dá)組（24 對(duì)）和低表達(dá)組（6 對(duì)）進(jìn)行比較，兩組性別無(wú)差異（卡方檢驗(yàn)，P=0.51），兩組年齡均值分別為 64.8 和 64.25歲，差值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t 檢驗(yàn)，P=0.89)，兩組在分期上無(wú)差異（卡方檢驗(yàn)，P=1.00）。

軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文P<0.05）（詳見(jiàn)圖 2、圖 3）。說(shuō)明了 CENPF 在膀胱癌中為高表達(dá)，此結(jié)果期測(cè)序的結(jié)果一致， 而在不同分期的膀胱癌中的比較，即非肌層浸潤(rùn)和肌胱癌中 CENPF 表達(dá)量的比較中，我們得到的結(jié)果也與測(cè)序一致，充分說(shuō)明序技術(shù)是高效可靠的，也為我們后續(xù)繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)提供了很好的數(shù)據(jù)支持。

CENPF 對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其臨床診斷價(jià)值研究（三）免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果CENPF 在膀胱癌患者的癌旁正常組織中表達(dá)弱，膀胱癌組織中 CENPF 主要分布在細(xì)胞核中，在細(xì)胞膜和細(xì)胞間質(zhì)中也有分布。膀胱癌組織中 CENPF 蛋白表達(dá)與正常組織相比，30 例患者膀胱癌組織中 CENPF 表達(dá)均明顯升高，詳見(jiàn)圖 4、圖 5。在男患者和女患者腫瘤表達(dá)值進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，P>0.05，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明雖然膀胱癌在不同性別的發(fā)病率不同（約為 3:1），但是在膀胱癌患者中，CENPF 在男女不同性別膀胱癌患者的腫瘤組織中表達(dá)沒(méi)有差異（P>0.05）；對(duì)不同年齡的比較（分≥65 歲組和＜65 歲組，各 15 例患者）發(fā)現(xiàn) CENPF 在腫瘤組織中的表達(dá)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），說(shuō)明了 CENPF 的表達(dá)與患者年齡性別無(wú)關(guān)。對(duì)不同分期、分級(jí)膀胱癌組織的免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，CENPF 表達(dá)與膀胱癌分期相關(guān)（P<0.05），表達(dá)差異情況見(jiàn)圖 6、圖 7。由于低級(jí)別腫瘤患者較少，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析 CENPF 與分級(jí)相關(guān)性不顯著。說(shuō)明 CENPF 在膀胱癌組織中高表達(dá)，并與腫瘤分期相關(guān)。
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