和厚樸酚通過HOXA9抑制膀胱腫瘤細胞增殖的實驗研究
發(fā)布時間：2020-09-27 13:26
目的探討和厚樸酚抑制膀胱尿路上皮癌細胞增殖中的作用及同源盒基因HOXA9在其中的意義。方法培養(yǎng)膀胱尿路上皮癌T24細胞株,在不同濃度和厚樸酚處理條件下,運用流式細胞技術分析凋亡及細胞周期的變化,利用CCK8、集落形成、劃痕實驗等方法測定細胞增殖能力的變化,利用蛋白質印跡技術測定HOXA9、增殖細胞核抗原(PCNA,Proliferating Cell Nuclear Antigen),及凋亡相關蛋白Bad、Bcl-2(B-cell lymphoma-2)、Cleaved-caspase3的表達水平。收集人體正常膀胱組織、非肌層浸潤性低級別膀胱尿路上皮癌和高級別膀胱癌的臨床標本,通過免疫組織化學染色法檢測HOXA9表達情況。結果和厚樸酚可以劑量和時間依賴方式,抑制T24細胞的增殖,并誘導其凋亡。隨藥物濃度的增加(25μmol/L、30μmol/L、35μmol/L)和時間的推移(24h、48h),對T24細胞抑制生長增殖及誘導凋亡的作用亦呈增強趨勢,凋亡相關蛋白Bad及蛋白Cleaved-caspase3的表達水平升高,而Bcl-2、PCNA的表達水平降低。同時,和厚樸酚可以增強T24細胞中HOXA9表達水平,降低NF-kB信號通路中磷酸化的P65的表達水平。進一步的實驗顯示:沉默HOXA9明顯減弱了和厚樸酚對T24細胞增殖的抑制作用,并能逆轉磷酸化P65表達水平的下降。結論和厚樸酚可抑制膀胱尿路上皮癌細胞生長、增殖,可能與HOXA9表達增高及磷酸化的P65表達下降有關。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R737.14
【部分圖文】：
15圖 1 不同濃度的和厚樸酚處理 T24 細胞后，分別于 24、4觀測的集落形成（“**”P<0.01 與對照組相比）Figure 1: Colony formation of T24 cells at 24, 48, and 72 hHNK of different concentrations ("**" P < 0.01 compared with the3.2 細胞活力測定用不同濃度的和厚樸酚（0、25、30、35μmol/ L）處理 T72 小時后，可見 T24 細胞活力變化呈現(xiàn)明顯劑量和時間依賴性高，作用時間越久，活力降低越顯著。詳見表 1、圖 2。
不同濃度和厚樸酚處理 T24 細胞，在不同時間點（24,48,72）比（“*”P<0.05,“**”P<0.01 與對照組相比；“#”P<0.05,“l(fā)/L 組相比;“▲”P<0.05 與 30umol/L 組相比）e 2: Proliferation of T24 cells at 24, 48, and 72 hours after treatedoncentrations of HNK(“*”P<0.05,"**" P < 0.01 compared with P < 0.05, "##" P < 0.01 compared with the 25umol / L group; "▲ with the 30umol / L group)樸酚處理 T24 細胞后的形態(tài)變化同濃度的和厚樸酚（0、25、30、35μmol/ L）處理細胞 24、4鏡上觀察其形態(tài)變化，其中對照組（0μmol/L）細胞生長狀視野分布，細胞間排列緊密，折光好；隨著濃度的升高，其折光弱，細胞之間排列疏松，可見皺縮、脫璧等現(xiàn)象，隨著時
圖 3 T24 經(jīng)不同濃度和厚樸酚處理后細胞形態(tài)變化（10x）Figure 3 Cellular morphology of T24 observed at different time points after treatedby HNK of different concentrations of HNK (10x)3.4 和厚樸酚對 T24 細胞周期阻滯和增殖抑制效應不同濃度的和厚樸酚（0,25,30,35μmol/ L）處理細胞 48 小時后，流式細胞分析結果顯示：和厚樸酚顯著的誘導 T24 細胞生長停滯在 G1 期，隨著濃度的增加，其 G1 期阻滯更為明顯，可見和厚樸酚能夠阻滯 T24 細胞的 DNA 合成，如圖 4 所示。腫瘤細胞具有旺盛的增殖活性，PCNA 可作為評價細胞增殖狀態(tài)的指標，通過Western blot 分析 PCNA 的半定量表達水平如圖示：在和厚樸酚處理的 24h 和 48h組，PCNA 蛋白表達隨著和厚樸酚濃度逐漸增加而降低。和厚樸酚能夠抑制 T24細胞的增殖。表 2 流式分析不同濃度和厚樸酚處理 T24 細胞 48h 的周期變化
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R737.14
【部分圖文】：
15圖 1 不同濃度的和厚樸酚處理 T24 細胞后，分別于 24、4觀測的集落形成（“**”P<0.01 與對照組相比）Figure 1: Colony formation of T24 cells at 24, 48, and 72 hHNK of different concentrations ("**" P < 0.01 compared with the3.2 細胞活力測定用不同濃度的和厚樸酚（0、25、30、35μmol/ L）處理 T72 小時后，可見 T24 細胞活力變化呈現(xiàn)明顯劑量和時間依賴性高，作用時間越久，活力降低越顯著。詳見表 1、圖 2。
不同濃度和厚樸酚處理 T24 細胞，在不同時間點（24,48,72）比（“*”P<0.05,“**”P<0.01 與對照組相比；“#”P<0.05,“l(fā)/L 組相比;“▲”P<0.05 與 30umol/L 組相比）e 2: Proliferation of T24 cells at 24, 48, and 72 hours after treatedoncentrations of HNK(“*”P<0.05,"**" P < 0.01 compared with P < 0.05, "##" P < 0.01 compared with the 25umol / L group; "▲ with the 30umol / L group)樸酚處理 T24 細胞后的形態(tài)變化同濃度的和厚樸酚（0、25、30、35μmol/ L）處理細胞 24、4鏡上觀察其形態(tài)變化，其中對照組（0μmol/L）細胞生長狀視野分布，細胞間排列緊密，折光好；隨著濃度的升高，其折光弱，細胞之間排列疏松，可見皺縮、脫璧等現(xiàn)象，隨著時
圖 3 T24 經(jīng)不同濃度和厚樸酚處理后細胞形態(tài)變化（10x）Figure 3 Cellular morphology of T24 observed at different time points after treatedby HNK of different concentrations of HNK (10x)3.4 和厚樸酚對 T24 細胞周期阻滯和增殖抑制效應不同濃度的和厚樸酚（0,25,30,35μmol/ L）處理細胞 48 小時后，流式細胞分析結果顯示：和厚樸酚顯著的誘導 T24 細胞生長停滯在 G1 期，隨著濃度的增加，其 G1 期阻滯更為明顯，可見和厚樸酚能夠阻滯 T24 細胞的 DNA 合成，如圖 4 所示。腫瘤細胞具有旺盛的增殖活性，PCNA 可作為評價細胞增殖狀態(tài)的指標，通過Western blot 分析 PCNA 的半定量表達水平如圖示：在和厚樸酚處理的 24h 和 48h組，PCNA 蛋白表達隨著和厚樸酚濃度逐漸增加而降低。和厚樸酚能夠抑制 T24細胞的增殖。表 2 流式分析不同濃度和厚樸酚處理 T24 細胞 48h 的周期變化
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4 張瑞濤;吳振剛;趙軍;張e
本文編號：2827938
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