目的探討和厚樸酚抑制膀胱尿路上皮癌細(xì)胞增殖中的作用及同源盒基因HOXA9在其中的意義。方法培養(yǎng)膀胱尿路上皮癌T24細(xì)胞株,在不同濃度和厚樸酚處理?xiàng)l件下,運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)分析凋亡及細(xì)胞周期的變化,利用CCK8、集落形成、劃痕實(shí)驗(yàn)等方法測(cè)定細(xì)胞增殖能力的變化,利用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)測(cè)定HOXA9、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA,Proliferating Cell Nuclear Antigen),及凋亡相關(guān)蛋白Bad、Bcl-2(B-cell lymphoma-2)、Cleaved-caspase3的表達(dá)水平。收集人體正常膀胱組織、非肌層浸潤(rùn)性低級(jí)別膀胱尿路上皮癌和高級(jí)別膀胱癌的臨床標(biāo)本,通過(guò)免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)HOXA9表達(dá)情況。結(jié)果和厚樸酚可以劑量和時(shí)間依賴方式,抑制T24細(xì)胞的增殖,并誘導(dǎo)其凋亡。隨藥物濃度的增加(25μmol/L、30μmol/L、35μmol/L)和時(shí)間的推移(24h、48h),對(duì)T24細(xì)胞抑制生長(zhǎng)增殖及誘導(dǎo)凋亡的作用亦呈增強(qiáng)趨勢(shì),凋亡相關(guān)蛋白Bad及蛋白Cleaved-caspase3的表達(dá)水平升高,而B(niǎo)cl-2、PCNA的表達(dá)水平降低。同時(shí),和厚樸酚可以增強(qiáng)T24細(xì)胞中HOXA9表達(dá)水平,降低NF-kB信號(hào)通路中磷酸化的P65的表達(dá)水平。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)顯示:沉默HOXA9明顯減弱了和厚樸酚對(duì)T24細(xì)胞增殖的抑制作用,并能逆轉(zhuǎn)磷酸化P65表達(dá)水平的下降。結(jié)論和厚樸酚可抑制膀胱尿路上皮癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖,可能與HOXA9表達(dá)增高及磷酸化的P65表達(dá)下降有關(guān)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R737.14
【部分圖文】：

15圖 1 不同濃度的和厚樸酚處理 T24 細(xì)胞后，分別于 24、4觀測(cè)的集落形成（“**”P<0.01 與對(duì)照組相比）Figure 1: Colony formation of T24 cells at 24, 48, and 72 hHNK of different concentrations ("**" P < 0.01 compared with the3.2 細(xì)胞活力測(cè)定用不同濃度的和厚樸酚（0、25、30、35μmol/ L）處理 T72 小時(shí)后，可見(jiàn) T24 細(xì)胞活力變化呈現(xiàn)明顯劑量和時(shí)間依賴性高，作用時(shí)間越久，活力降低越顯著。詳見(jiàn)表 1、圖 2。

不同濃度和厚樸酚處理 T24 細(xì)胞，在不同時(shí)間點(diǎn)（24,48,72）比（“*”P<0.05,“**”P<0.01 與對(duì)照組相比；“#”P<0.05,“l(fā)/L 組相比;“▲”P<0.05 與 30umol/L 組相比）e 2: Proliferation of T24 cells at 24, 48, and 72 hours after treatedoncentrations of HNK(“*”P<0.05,"**" P < 0.01 compared with P < 0.05, "##" P < 0.01 compared with the 25umol / L group; "▲ with the 30umol / L group)樸酚處理 T24 細(xì)胞后的形態(tài)變化同濃度的和厚樸酚（0、25、30、35μmol/ L）處理細(xì)胞 24、4鏡上觀察其形態(tài)變化，其中對(duì)照組（0μmol/L）細(xì)胞生長(zhǎng)狀視野分布，細(xì)胞間排列緊密，折光好；隨著濃度的升高，其折光弱，細(xì)胞之間排列疏松，可見(jiàn)皺縮、脫璧等現(xiàn)象，隨著時(shí)

圖 3 T24 經(jīng)不同濃度和厚樸酚處理后細(xì)胞形態(tài)變化（10x）Figure 3 Cellular morphology of T24 observed at different time points after treatedby HNK of different concentrations of HNK (10x)3.4 和厚樸酚對(duì) T24 細(xì)胞周期阻滯和增殖抑制效應(yīng)不同濃度的和厚樸酚（0,25,30,35μmol/ L）處理細(xì)胞 48 小時(shí)后，流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示：和厚樸酚顯著的誘導(dǎo) T24 細(xì)胞生長(zhǎng)停滯在 G1 期，隨著濃度的增加，其 G1 期阻滯更為明顯，可見(jiàn)和厚樸酚能夠阻滯 T24 細(xì)胞的 DNA 合成，如圖 4 所示。腫瘤細(xì)胞具有旺盛的增殖活性，PCNA 可作為評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)的指標(biāo)，通過(guò)Western blot 分析 PCNA 的半定量表達(dá)水平如圖示：在和厚樸酚處理的 24h 和 48h組，PCNA 蛋白表達(dá)隨著和厚樸酚濃度逐漸增加而降低。和厚樸酚能夠抑制 T24細(xì)胞的增殖。表 2 流式分析不同濃度和厚樸酚處理 T24 細(xì)胞 48h 的周期變化

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本文編號(hào)：2827938