目的:腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis,RIF)是各種病因所致慢性腎臟病(chronic kidney diseases,CKD)發(fā)生發(fā)展的共同病理表現(xiàn),是發(fā)展至終末期腎臟病(end-stage renal disease,ESRD)的關(guān)鍵過(guò)程。腎間質(zhì)纖維化的病理過(guò)程包括腎小管間質(zhì)纖維化和晚期的腎小球硬化,表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞因子激活,腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化,成纖維細(xì)胞增殖,細(xì)胞外基質(zhì)沉積,細(xì)胞凋亡,最終導(dǎo)致終末期腎衰竭。隨著對(duì)CKD研究的不斷發(fā)展,發(fā)現(xiàn)許多細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子與CKD的病理生理過(guò)程有關(guān),如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factorβ1,TGF-β1),基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP),瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)等,不同程度的參與了CKD的發(fā)病過(guò)程。而JAK/STAT(The Janus kinase family/signal transducers and activators of transcription)通路是一條由多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,對(duì)疾病的發(fā)生發(fā)展有重要的調(diào)控作用,其激活能促進(jìn)各種疾病的進(jìn)展,如淋巴瘤、白血病及各種炎癥性疾病。已有研究表明,JAK/STAT信號(hào)通路與糖尿病腎病、梗阻性腎病、多囊腎等腎臟疾病的病理生理過(guò)程有著密切的聯(lián)系。已證明,JAK/STAT信號(hào)通路與炎癥的進(jìn)展關(guān)系密切,既可以調(diào)控自身下游炎癥相關(guān)基因的表達(dá),又可通過(guò)參與不同的信號(hào)通路發(fā)揮其生物學(xué)功能,如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)和核因子κB(NF-κB)等通路。同時(shí),巨噬細(xì)胞通過(guò)JAK/STAT通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用可誘導(dǎo)多種炎癥因子的激活。因此JAK/STAT信號(hào)通路對(duì)機(jī)體炎癥反應(yīng)過(guò)程的調(diào)節(jié)作用尤為關(guān)鍵。白三烯(Leukotrienes,LTs)是一類擁有高度生物活性的炎癥介質(zhì),在體內(nèi)由炎性細(xì)胞產(chǎn)生,與其相關(guān)的受體也是重要的炎癥介質(zhì),大量存在于炎性細(xì)胞顆粒蛋白中。目前研究發(fā)現(xiàn),多種病理因素刺激可誘導(dǎo)LTs在腎臟中的表達(dá)增強(qiáng),從而在腎損害中發(fā)揮重要作用。因此,抑制LTs的過(guò)度表達(dá)可能對(duì)腎臟病的治療起到有益的作用。孟魯司特(montelukast,MON,商品名:順爾寧)是一種高選擇性半胱氨酰白三烯(Cys-LT)受體拮抗劑,在臨床作為預(yù)防和治療哮喘的一種非激素類抗炎藥物被推廣應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)的目的是觀察白三烯受體拮抗劑是否可延緩單側(cè)輸尿管梗阻(unilateralureteralocclusion,uuo)大鼠腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展,及其對(duì)uuo大鼠jak2,stat3,il-6及Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的影響,探究其是否通過(guò)jak/stat信號(hào)通路發(fā)揮抗腎間質(zhì)纖維化作用,為腎間質(zhì)纖維化的臨床治療提供新的理論基礎(chǔ)及治療靶點(diǎn)。方法:采用單側(cè)輸尿管梗阻模型,54只清潔級(jí)sd大鼠(雄性210±20g),隨機(jī)分為a、b、c三組,假手術(shù)組(a組,sham組)18只,模型組(單側(cè)輸尿管結(jié)扎組,b組,uuo組)18只,治療組(孟魯司特干預(yù)組,c組,mon組)18只,適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,按分組不同建立單側(cè)輸尿管梗阻模型。各組大鼠均于術(shù)前24小時(shí)開(kāi)始給藥,治療組每天給予孟魯司特10mg/kg/d灌胃,同時(shí)sham組和uuo組給以等容生理鹽水灌胃。自由進(jìn)食飲水,分別于術(shù)后3、7、14天,每組各取6只大鼠,取左腎組織后處死,用0.9%的生理鹽水反復(fù)沖洗,取中間1/4組織塊于多聚甲醛中固定,用于病理切片,進(jìn)行he、masson染色及免疫組織化學(xué)染色,其余腎組織放于液氮中迅速冷凍,以防止蛋白降解,并保存于-80℃冰箱中,行westernblot實(shí)驗(yàn)。使用spss20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)所得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示統(tǒng)計(jì)結(jié)果,使用單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,p0.05表示結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1腎臟組織病理學(xué)染色1.1光鏡下he染色:a組:第3、7、14天,腎小球、腎小管及間質(zhì)未見(jiàn)明顯異常。b組:術(shù)后3天,腎小管發(fā)生輕度擴(kuò)張,間質(zhì)中可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);術(shù)后7天腎小管管腔擴(kuò)張程度和間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度加重,腎小管上皮細(xì)胞脫落,空泡樣變性;術(shù)后14天可觀察到大量腎小管萎縮,腎小管基底膜增厚,皺縮,失去正常結(jié)構(gòu)。c組:與同時(shí)期b組相比,病變程度較輕,但仍明顯重于a組。1.2光鏡下masson染色:a組:第3、7、14天腎小球、腎小管及間質(zhì)未見(jiàn)異常。b組:腎小管廣泛擴(kuò)張,腎間質(zhì)較前增寬,可見(jiàn)膠原纖維沉積,隨梗阻時(shí)間的延長(zhǎng),膠原纖維逐漸向腎小管周圍延伸,交織成網(wǎng)狀“結(jié)構(gòu)”。c組:與同期b組相比,腎間質(zhì)膠原纖維沉積程度減輕,但仍明顯重于a組。2腎組織免疫組織化學(xué)染色2.1p-jak2a組:腎小管上皮細(xì)胞胞漿p-jak2散在表達(dá)。b組:大鼠腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)顯著增加。隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng),其表達(dá)水平呈進(jìn)行性增高,且與a組同時(shí)期相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均0.05)。c組:p-jak2表達(dá)水平與同時(shí)期b組相比均有顯著下降(p均0.05),但仍高于同時(shí)期a組中的表達(dá)水平(p均0.05)。2.2p-stat3a組:在腎小管上皮細(xì)胞核幾乎不表達(dá)。b組:與a組相比,p-stat3在大鼠腎小管上皮細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)增加。隨著病變時(shí)間的延長(zhǎng),腎小管上皮細(xì)胞核中出現(xiàn)表達(dá)逐漸增加。與a組同時(shí)期相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均0.05)。c組:術(shù)后第3、7、14天,與同時(shí)期b組相比,腎小管上皮細(xì)胞核表達(dá)水平降低(p均0.05)。但與a組同時(shí)期相比,表達(dá)水平均較高(p均0.05)。2.3il-6a組:腎小管上皮細(xì)胞胞漿中微量表達(dá)。b組:細(xì)胞胞漿中陽(yáng)性表達(dá)明顯增加,隨著病變的進(jìn)展,表達(dá)水平持續(xù)增加,與同一時(shí)期a組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p均0.05)。c組:與同時(shí)期b組相比,術(shù)后第3、7、14天,il-6表達(dá)水平明顯下降(p均0.05);但與a組同時(shí)期相比,表達(dá)水平均高于a組(p均0.05)。2.4Ⅲ型膠原a組:正常情況下Ⅲ型膠原在腎小球系膜細(xì)胞胞漿、腎小管上皮細(xì)胞以及間質(zhì)細(xì)胞中有少量表達(dá)。b組:腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)水平增加,腎間質(zhì)表達(dá)不明顯,隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)增加(p均0.05)。且表達(dá)水平均高于同時(shí)期a組(p均0.05)。c組:Ⅲ型膠原表達(dá)水平與同時(shí)期b組相比均有顯著下降(p均0.05),但仍高于同時(shí)期a組中的表達(dá)水平(p均0.05)。3腎組織中p-jak2、p-stat3westernblot結(jié)果p-jak2蛋白:b組術(shù)后3、7、14天p-jak2蛋白的表達(dá)量逐漸增加(P均0.05),與同期A組相比,表達(dá)量均增加(P均0.05);C組術(shù)后各時(shí)期P-JAK2蛋白表達(dá)量隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加(P均0.05),與同時(shí)相B組相比較表達(dá)量減少(P均0.05),但仍高于同時(shí)相A組(P均0.05)。P-STAT3蛋白:與同期A組相比,B組和C組術(shù)后3、7、14天目的蛋白的表達(dá)量均增加(P均0.05),并隨梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量逐漸增加(P均0.05),C組術(shù)后各時(shí)期P-STAT3蛋白表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加(P均0.05),與同時(shí)相B組相比較表達(dá)量減少(P均0.05),但仍高于同時(shí)相A組(P均0.05)。結(jié)論:1 JAK2/STAT3信號(hào)通路可能參與了UUO大鼠模型腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展。2在UUO大鼠模型中,白三烯受體拮抗劑可能具有抗纖維化作用,其機(jī)制可能是通過(guò)降低炎癥因子的表達(dá),從而抑制JAK2/STAT3信號(hào)通路的激活而實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R692

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2824750