目的分析補體系統(tǒng)中經(jīng)典途徑、替代途徑、甘露糖結(jié)合凝集素途徑中多個補體成分在2型糖尿病腎病大鼠腎臟中的表達水平,探討補體系統(tǒng)在2型糖尿病腎病中的致病作用。方法1、建立2型糖尿病模型及2型糖尿病腎病模型:24只5周齡的雄性SD大鼠隨機分為對照組(Control組)、2型糖尿病組(DM組)及2型糖尿病腎病組(DN組)。對照組給予普通飼料喂養(yǎng),DM組、DN組給予高脂高糖飼料喂養(yǎng)以誘導胰島素抵抗。8周后,大鼠禁食不禁水12小時,DM組、DN組予1%STZ 30mg/kg腹腔注射一次,對照組予腹腔注射等量的檸檬酸緩沖液一次,以72 h后連續(xù)三天隨機血糖≥16.7 mmol/L為2型糖尿病模型造模成功。大鼠出現(xiàn)糖尿病后,DN組則繼續(xù)給以高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周以建立糖尿病腎病模型,以24h尿白蛋白排泄量≥30mg/24h為出現(xiàn)早期腎臟病變標準。2、測量大鼠體重、腎重,用羅氏血糖儀測大鼠末梢血糖(光化學法),采用胰島素測定ELISA試劑盒測空腹胰島素、尿白蛋白ELISA試劑盒測24小時尿白蛋白濃度,并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR=空腹胰島素×空腹血糖/22.5)。3、大鼠腎臟組織行蘇木素-伊紅染色、過碘酸-希夫染色觀察腎臟組織形態(tài)改變,計算系膜指數(shù)(系膜指數(shù)=系膜基質(zhì)面積/腎小球面積×100%)、小動脈硬化指數(shù)(小動脈硬化指數(shù)=管壁面積/(管壁面積+管腔面積))、管型面積百分比(管型面積百分比=管型面積/總視野面積×100%)。4、免疫組化及western blot檢測各組大鼠腎臟補體系統(tǒng)多成分的表達水平及足細胞標志蛋白nephrin表達水平。結(jié)果1、STZ注射前,DM組及DN組體重較對照組均升高(525.6±35.0g vs.477.6±25.6g,P=0.01;541.4±39.7g vs.477.6±25.6g,P=0.001),DM組及DN組HOMA-IR較對照組均高(2.76±1.20 vs.1.50±0.13,P=0.006;2.40±1.27 vs.1.50±0.13,P=0.036),說明DM組及DN組出現(xiàn)胰島素抵抗。STZ注射后1周,DM組及DN組血糖較對照組均高(23.11±2.78mmol/L vs.6.06±0.92mmol/L,P0.001;24.25±2.80mmol/L vs.6.06±0.92mmol/L,P0.001),且DM組及DN組HOMA-IR較對照組均高(5.88±3.09 vs.1.59±0.13,P0.001;5.83±2.07vs.1.59±0.13,P0.001)。至DN模型造模結(jié)束后,DN組24h尿白蛋白量較對照組及DM組均高(111.64±25.61mg vs.9.74±2.08mg,PP0.001;111.64±25.61mg vs.18.09±6.05mg,PP0.001),并且DN組的腎重/體重(mg/g)較對照組及DM組均升高(4.94±1.00 vs.2.79±0.24,P0.001;4.94±1.00 vs.3.02±0.20,P0.001)。2、HE染色及PAS染色結(jié)果顯示:DN組系膜指數(shù)較對照組及DM組均高(16.25±1.67%vs.13.62±1.41%,P=0.003;16.25±1.67%vs.14.00±1.69%,P=0.01)。DN組腎小管管型面積百分比較對照組及DM組均高(1.66±1.83%vs.0,P=0.005;1.66±1.83%vs.0,P=0.005)。DN組腎小動脈硬化指數(shù)較對照組及DM組均高(0.79±0.03 vs.0.76±0.03,P=0.024;0.79±0.03 vs.0.75±0.03,P=0.011)。以上指標在DM組與DN組中差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3、免疫組化(IHC)陽性表達積分光密度(IOD)(×10~4)及western blot條帶相對灰度值結(jié)果顯示:腎臟補體成分C1q IOD在DN組中較對照組及DM組升高(10.38±4.15 vs.5.69±3.86,P=0.01;10.38±4.15 vs.3.37±9.76,P0.001)。MBL IOD在DN組中較對照組及DM組升高(6.79±4.56 vs.2.39±0.94,P=0.004;6.79±4.56 vs.2.92±0.8,P=0.01),WB條帶相對灰度值在DN組中較對照組及DM組升高(3.91±1.13 vs.0.83±0.39,0.001;3.91±1.13 vs.1.34±1.05,P=0.004)。MASP-2 IOD在DN組中較對照組及DM組升高(12.50±3.10 vs.3.27±2.78,P0.001;12.50±3.10 vs.4.72±5.16,P0.001),WB條帶相對灰度值在DN組中較對照組及DM組升高(3.91±1.13 vs.0.83±0.39,P0.001;3.91±1.13 vs.1.34±1.05,P0.001)。B因子IOD在DN組中較對照組及DM組升高(8.35±5.05 vs.1.84±1.45,P=0.001;8.35±5.05 vs.2.67±1.91,P=0.002)。C3 IOD在DN組中較對照組及DM組升高(2.22±1.23 vs.1.13±0.86,P=0.031;2.22±1.23 vs.1.02±0.62,P=0.018),WB條帶相對灰度值在DN組中較對照組及DM組升高(1.77±0.94 vs.0.66±0.33,P=0.002;1.77±0.94 vs.0.96±0.77,P=0.036)。C5b-9 IOD在DN組中較對照組及DM組升高(4.29±1.80 vs.1.64±0.79,P0.001;4.29±1.80 vs.1.69±0.68,P0.001)。而補體成分在對照組及DM組中的表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、免疫組化結(jié)果顯示C1q、MBL、MASP-2、B因子、C5b-9主要表達于腎小管部位,C3則主要集中表達在腎小球。5、免疫組化結(jié)果顯示足細胞標志蛋白nephrin IOD在各組腎小球表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。6、相關(guān)性分析結(jié)果顯示24h尿白蛋白量與C1q(r=0.580,P=0.003)、MBL(r=0.640,P=0.001)、MASP-2(r=0.751,P0.001)、B因子(r=0.728,P0.001)、C5b-9(r=0.718,P0.001)呈正相關(guān)。系膜指數(shù)與MBL(r=0.457,P=0.025)、B因子(r=0.429,P=0.036)、C3(r=0.410,P=0.046)、C5b-9(r=0.498,P=0.013)呈正相關(guān)。管型面積百分比與C1q(r=0.431,P=0.035)、MBL(r=0.548,P=0.006)、B因子(r=0.553,P=0.005)呈正相關(guān)。小動脈硬化指數(shù)與C1q(r=0.481,P=0.017)、MBL(r=0.465,P=0.022)、MASP-2(r=0.494,P=0.014)、B因子(r=0.486,P=0.016)呈正相關(guān)。結(jié)論1、補體系統(tǒng)激活的三條途徑的多個補體成分在2型糖尿病腎病腎臟中的表達水平增高。且補體成分高表達與腎臟病變相關(guān)。2、不同補體途徑在腎小球和腎小管損傷中可能發(fā)揮不同的作用。
【學位單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R587.2;R692.9
【部分圖文】：

標注：“Control”、“C”表示對照組，“DM”表示2型糖尿病組，“DN”表示2型糖尿病腎病組。圖1.1 不同時間各組大鼠體重的比較標注：“Control”表示對照組，“DM”表示2型糖尿病組，“DN”表示2型糖尿病腎病組�！�*”表示P＜0.05 vs. 對照組。1.3 血糖改變至STZ注射前，對照組、DM組、DN組三組間血糖差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。至第9周糖尿病模型成立后，第9周測得DM組血糖較對照組升高（P＜0.05），第9周、第13周、第17周測得血糖在DN組較對照組均高（P＜0.05）。見表1.2、圖1.2。表1.2 不同時間各組血糖的比較(mmol/L)組別 0周 4周 8周 9周 13周 17周Control 6.68±0.59 7.09±1.07 6.52±0.60 6.06±0.92 6.10±0.50 6.15±0.67DM 6.38±0.44 7.25±0.45 6.12±0.41 23.11±2.78 — —DN 6.97±0.32 7.20±0.40 6.36±0.40 24.25±2.80 26.99±3.52 28.34±2.19P(DM vs.C) 0.652 0.219 0.111 0.000 — —P(DN vs.C) 0.754 0.219 0.526 0.000 0.000 0.000P(DN vs.DM) 0.889 0.019 0.319 0.342 — —標注：“Control”、“C”表示對照組，“DM”表示2型糖尿病組，“DN”表示2型糖尿病腎病組。

25圖1.2 不同時間各組血糖水平的比較標注：“Control”表示對照組，“DM”表示2型糖尿病組，“DN”表示2型糖尿病腎病組。“*”表示P＜0.05 vs. 對照組。1.4 胰島素及胰島素抵抗指數(shù)的改變DM組及DN組在高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周后即STZ注射前，測得空腹血糖（FPG）較對照組均高（P＜0.05），HOMA-IR在DM組及DN組較對照組均高（P＜0.05），F(xiàn)INS在三組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）說明高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周后DM組及DN組大鼠已出現(xiàn)胰島素抵抗。9周后，即糖尿病模型成模后，F(xiàn)PG、HOMA-IR在DM及DN組較對照組均高（P＜0.05），F(xiàn)INS在三組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見

標注：“Control”、“C”表示對照組，“DM”表示2型糖尿病組，“DN”表示2型糖尿腎病組。圖1.3 各組大鼠空腹血糖(圖A)、空腹胰島素(圖B)、胰島素抵抗指數(shù)(圖C)的比較標注：“Control”表示對照組，“DM”表示2型糖尿病組，“DN”表示2型糖尿病腎病組�！�*”表示P＜0.05 vs. 對照組。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 武曉慧;唐蕊;黃頌敏;寧曉霞;;MBL途徑補體激活與糖尿病腎病進展的相關(guān)性研究[J];西部醫(yī)學;2012年07期

2 邱明才,林珊,高志紅,朱梅,韓紅玲,樊繼援,沈保爽,馬中書,蘇文凌,劉維,高樺,湯紹芳;有脛前黑斑的2型糖尿病患者皮膚黑斑和腎活檢[J];天津醫(yī)藥;2004年05期

本文編號：2822693