目的:腎癌是泌尿系最常見的惡性腫瘤之一,預(yù)后差,目前其發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制尚未完全明確。微小RNA(miRNAs)是一類小分子非編碼RNA,作為近期的研究熱點之一,其已被證實在多種人類惡性腫瘤的生物學(xué)進(jìn)程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。有報道指出miR-660-5p是高度保守的miRNA,在肺癌、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、白血病等多種腫瘤中表達(dá)異常,并可通過調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、侵襲力和凋亡的改變而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。然而目前miR-660-5p在腎癌中的功能及作用的分子機(jī)制尚未明確,亦未有相關(guān)研究證實。因此本課題研究通過在腎癌組織中檢測miR-660-5p的表達(dá),并通過體外細(xì)胞實驗探究其功能,進(jìn)一步探索其作為腎癌生物標(biāo)記物應(yīng)用于臨床的可能性。方法:通過基因芯片研究結(jié)果,篩選出腎癌組織中低表達(dá)的miR-660-5p,通過RT-qPCR方法檢測其在25對腎癌及癌旁正常組織中的表達(dá)。采用四格表行?~2檢驗探究miR-660-5p表達(dá)水平與患者臨床特征之間的關(guān)系。為探究其功能,在腎癌細(xì)胞(786-O和ACHN)轉(zhuǎn)染miR-660-5p功能類似物或抑制劑以過表達(dá)或敲低其表達(dá),通過劃痕實驗驗證miR-660-5p對腎癌細(xì)胞遷移的影響,MTT和CCK-8實驗驗證其對腎癌細(xì)胞增殖的影響,Transwell實驗驗證其對腎癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響,流式細(xì)胞術(shù)驗證其對腎癌細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:RT-qPCR結(jié)果顯示25對腎癌組織及癌旁正常組織中,有18對(72%)表達(dá)下調(diào),癌旁正常組織的表達(dá)量為腎癌組織的3.44±0.375倍,提示腎癌組織表達(dá)量明顯低于癌旁正常組織(p0.01)。miR-660-5p的表達(dá)水平與患者臨床特征之間無明顯差異(P0.05),未見明顯相關(guān)性。與對照組相比,在786-O和ACHN細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-660-5p inhibitor后,其表達(dá)水平分別是對照組的0.13±0.029和0.01±0.00309倍。而轉(zhuǎn)染miR-660-5p mimic后,其表達(dá)水平分別是對照組的1762.10±261.812和590.19±112.202倍(P0.05)。細(xì)胞功能實驗結(jié)果中,與陰性對照組相比,劃痕實驗結(jié)果表明過表達(dá)miR-660-5p可抑制腎癌細(xì)胞遷移,敲低表達(dá)則促進(jìn)細(xì)胞遷移;MTT和CCK-8實驗結(jié)果表明過表達(dá)miR-660-5p可抑制腎癌細(xì)胞增殖,敲低則促進(jìn)細(xì)胞增殖;Transwell實驗表明過表達(dá)可抑制腎癌細(xì)胞遷移和侵襲,敲低則促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲;流式細(xì)胞術(shù)實驗表明過表達(dá)可誘導(dǎo)腎癌細(xì)胞凋亡,敲低則抑制細(xì)胞凋亡。結(jié)論:miR-660-5p在腎癌組織中顯著低表達(dá),上調(diào)miR-660-5p可抑制腎癌細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖能力,并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,而下調(diào)miR-660-5p則促進(jìn)腎癌細(xì)胞遷移、侵襲和增殖,并抑制細(xì)胞凋亡。以上結(jié)果表明,miR-660-5p在腎癌組織中異常表達(dá),發(fā)揮著抑癌基因的作用,并參與調(diào)控腎癌細(xì)胞的生物學(xué)功能,有望成為腎癌早期診斷和治療的新生腫瘤標(biāo)志物。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.11
【部分圖文】：

圖 1：生物信息軟件預(yù)測 miR-660-5p 的靶基因（GALNT7）以及互補(bǔ)位點（圖中下劃線部分）綜上所述，本課題實驗從分子及基因?qū)W水平闡述腎癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，并尋找腎癌早期診斷及術(shù)后監(jiān)測的腫瘤標(biāo)志物和潛在的治療靶點，對腎癌的診斷和治

圖2.miR-660-5p在25對腎癌組織及癌旁正常組織的表達(dá)水平。圖2A. 腎癌組織中miR-660-5p 與配對的癌旁正常組織表達(dá)量比值經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后結(jié)果；圖 2B. 腎癌組織與癌旁正常組織中的相對表達(dá)量，腎癌組織表達(dá)量明顯低于癌旁正常組織（P<0.01）圖 2C.miR-660-5p在轉(zhuǎn)染至 ACHN 和 786-O 腎癌細(xì)胞的表達(dá)水平（P<0.05）。(miR, 微小 RNA; NAT, 癌旁正

癌旁正常組織的表達(dá)量為腎癌組織的 3.44 0.375 倍，提示腎癌組織表達(dá)量明顯低于癌旁正常組織（P<0.01）。圖2.miR-660-5p在25對腎癌組織及癌旁正常組織的表達(dá)水平。圖2A. 腎癌組織中miR-660-5p 與配對的癌旁正常組織表達(dá)量比值經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后結(jié)果；圖 2B. 腎癌組織與癌旁正常組織中的相對表達(dá)量，腎癌組織表達(dá)量明顯低于癌旁正常組織（P<0.01）圖 2C.miR-660-5p在轉(zhuǎn)染至 ACHN 和 786-O 腎癌細(xì)胞的表達(dá)水平（P<0.05）。(miR, 微小 RNA; NAT, 癌旁正常組織; NC, 陰性對照; RCC, 腎細(xì)胞癌。)Figure 2. Expression of miR-660-5p in 25 paired RCC tissues and NATs. (A) Log2 ratios(RCC/NAT) of miR-660-5p expression in 25 paired tissues. (B) The relative expression of miR-660-5p in RCC and NATs. (C) The expression of miR-660-5p inACHN and 786-O cells followingtransfection. *P<0.05; **P<0.01. miR, microRNA; NAT, normal adjacent tissue; NC, negativecontrol; RCC, renal cell carcinoma.2 miR-660-5p 表達(dá)水平與患者臨床病理特征 間無明顯相關(guān)性將病例按 miR-660-5p 相對表達(dá)量平均數(shù)-1.7862 分為界分高表達(dá)組和低表達(dá)組，其中高表達(dá)組 12 例，低表達(dá)組 13 例。按照患者年齡（年齡以中位數(shù) 52 歲分界）、性別、病理組織學(xué)分型、臨床分期分組，通過建立四格表進(jìn)行 2檢驗，探究 miR-660-5p 表達(dá)水平與患者臨床特征之間的關(guān)系，結(jié)果如表 5 所示，未發(fā)現(xiàn) miR-660-5p 表達(dá)水平與病例相關(guān)臨床特征之間的關(guān)系（p>0.05）

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李雙;張磊;王尚乾;秦超;殷長軍;;腫瘤睪丸抗原乳酸脫氫酶C蛋白表達(dá)對腎癌細(xì)胞功能影響的實驗研究[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2015年10期

2 胡志全,王家菁,葉章群;赫賽汀聯(lián)合干擾能對腎癌細(xì)胞的殺傷抑制作用[J];中華實驗外科雜志;2005年08期

3 潘李珍，張漪;人體腎癌細(xì)胞培養(yǎng)1例報告[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1996年01期

4 夏國興;;人類腎癌細(xì)胞的發(fā)生是雙缺失機(jī)理所致?[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊;1989年06期

5 Joe Palca;楊曉斌;;誘導(dǎo)腎癌細(xì)胞自殺[J];科技英語學(xué)習(xí);2008年08期

6 朱致暉;谷江;張永春;楊清滔;楊永安;王楠;祝慶亮;;斯鈣素蛋白1下調(diào)鈣離子及缺氧誘導(dǎo)因子1α水平調(diào)控腎癌細(xì)胞抗缺氧增殖平衡[J];浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年05期

7 孫連桃;肖偉利;;巨噬細(xì)胞移動抑制因子在腎癌中的表達(dá)及對腎癌細(xì)胞侵襲能力的影響[J];重慶醫(yī)學(xué);2017年35期

8 楊凱鈞;朱斌;潘衛(wèi)兵;謝禮仁;;聯(lián)合使用脫甲基化藥物和紫杉醇對腎癌細(xì)胞的侵襲能力影響機(jī)制研究[J];河北醫(yī)藥;2016年24期

9 褚晗;于德新;張志強(qiáng);黃韻;謝棟棟;王毅;張濤;陳磊;丁德茂;鄒慈;閔捷;王大明;;siRNA沉默腎癌細(xì)胞EGFR基因?qū)Ψ暖熋舾行杂绊懙难芯縖J];臨床泌尿外科雜志;2013年04期

10 楊風(fēng)光;葉烈夫;林樂;李濤;何延瑜;張志文;郭應(yīng)祿;;過氧化物酶體增殖激活物受體γ配體對腎癌細(xì)胞血管生成的影響[J];福建醫(yī)藥雜志;2009年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王威;劉;董雪;徐香蘭;沈彬;寇慧珠;劉濤;吳明明;虞頌庭;;鈣粘蛋白E在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

2 王楠;谷江;;京尼平對腎癌細(xì)胞的抑制作用及對解偶聯(lián)蛋白2及線粒體解偶聯(lián)影響的機(jī)制研究[A];2013年貴州省泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

3 申文江;孫凌飛;孫新臣;朱麗紅;邵彥;黃淵;;安替可對腎癌細(xì)胞的放射敏感性影響[A];第八屆全國中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2000年

4 王志華;胡志全;葉章群;莊乾元;楊為民;陳志強(qiáng);劉繼紅;;樹突狀細(xì)胞的體外擴(kuò)增及培養(yǎng)上清液對腎癌細(xì)胞的作用[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

5 張豪杰;許明;戎瑞明;朱同玉;;Twist2對腎癌細(xì)胞功能和腫瘤發(fā)展影響的可能的分子機(jī)制[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會泌尿外科專業(yè)委員會第十四次全國學(xué)術(shù)會議暨2016年廣東省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會泌尿外科專業(yè)委員會學(xué)術(shù)年會論文集[C];2016年

6 張豪杰;許明;戎瑞明;朱同玉;;Twist2對腎癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲的影響[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會泌尿外科專業(yè)委員會第十四次全國學(xué)術(shù)會議暨2016年廣東省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會泌尿外科專業(yè)委員會學(xué)術(shù)年會論文集[C];2016年

7 張瓊;陳玉鳳;田熙熙;龍廣鳳;喬迎春;劉曉春;劉運德;申艷娜;;NLRP3在白藜蘆醇?xì)?86-O腎癌細(xì)胞過程中的作用的研究[A];第七屆中國臨床微生物學(xué)大會暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文匯編[C];2016年

8 李金鋒;王國民;戎瑞明;朱同玉;;SiRNA對腎癌細(xì)胞系COX-2基因的抑制作用及其質(zhì)粒載體的構(gòu)建[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

9 孫慧;車永勝;姜學(xué)軍;;真菌次級代謝產(chǎn)物rasfonin促進(jìn)腎癌細(xì)胞發(fā)生自噬、凋亡及程序性壞死[A];中國菌物學(xué)會2016年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2016年

10 丁曉飛;沈茂;嚴(yán)巧娣;陳光;;pVHL調(diào)控NEK-8維持腎癌細(xì)胞原纖毛結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的機(jī)制研究[A];2013醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十三屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 記者 王丹;維生素C可讓腎癌細(xì)胞因“饑餓”死亡[N];健康報;2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉鵲凌;CSN5通過穩(wěn)定ZEB1介導(dǎo)腎癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移及EMT的機(jī)制研究[D];南昌大學(xué);2018年

2 盧東源;p38IP在腎癌細(xì)胞中的功能[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 潘周輝;RNA干擾缺氧誘導(dǎo)因子2基因?qū)δI癌細(xì)胞株786-0影響的研究[D];浙江大學(xué);2006年

4 畢建斌;腎癌細(xì)胞中環(huán)氧合酶-2的表達(dá)及非甾體類抗炎藥NS398對腎癌細(xì)胞生長抑制作用的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

5 劉賀亮;轉(zhuǎn)染p21～（WAF1/CIP1）基因?qū)δI癌細(xì)胞促凋亡作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1998年

6 杜賢進(jìn);藍(lán)舌病毒湖北株選擇性誘導(dǎo)腎癌細(xì)胞死亡及其機(jī)制的研究[D];武漢大學(xué);2010年

7 陳少安;長鏈非編碼RNA CCAT1沉默通過下調(diào)Livin蛋白水平途徑促進(jìn)腎癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2017年

8 汪幫琦;SARM在腎癌細(xì)胞中的功能及其分子機(jī)制的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

9 田明;間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)腎癌細(xì)胞遷移與增殖及黃芪對間充質(zhì)干細(xì)胞的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

10 楊林;腎癌細(xì)胞來源exosomes的提取鑒定及對腎癌惡性演進(jìn)的影響和機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 何韜;miR-660-5p在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)水平和功能研究[D];廣州醫(yī)科大學(xué);2018年

2 劉伊揚;LncRNA BX357664參與抑制腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制探討[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

3 畢然;腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體聯(lián)合穿心蓮內(nèi)酯對腎癌細(xì)胞的影響[D];吉林大學(xué);2018年

4 劉忠強(qiáng);14-3-3σ基因在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)及其對細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

5 楊建宇;TGF-β1通過ERK和JNK信號通路誘導(dǎo)Fascin1表達(dá)促進(jìn)腎癌細(xì)胞的遷移及侵襲[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

6 張磊;基于3-氨基苯硼酸和細(xì)胞表面唾液酸特異連接作用的腎癌細(xì)胞檢測新技術(shù)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

7 呂不凡;肥大細(xì)胞對腎癌細(xì)胞侵襲遷移能力影響及機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

8 錢洲楠;LncRNA PIK3CD-AS1在腎癌細(xì)胞中的功能和機(jī)制初步研究[D];江蘇大學(xué);2018年

9 高哲民;雌激素及其受體在腎癌細(xì)胞中的作用機(jī)制的實驗研究[D];青島大學(xué);2018年

10 劉杰;ERK5信號通路在吸煙暴露誘導(dǎo)的腎癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號：2821408