目的:鋅是一種必需微量元素,在人體內(nèi)大約含有2-3克。雖然機(jī)體鋅含量很低,但是參與了人體300多種不同的生物進(jìn)程,其中包括DNA轉(zhuǎn)錄,蛋白質(zhì)翻譯,細(xì)胞增殖,細(xì)胞分化,細(xì)胞凋亡等。鋅缺乏是指由于鋅攝入量過低或者代謝異常等原因所引起的機(jī)體鋅含量減少。2012年世界衛(wèi)生組織報(bào)告全球大約有三分之一的人口缺鋅,而我國(guó)將近30%的成年男性也有不同程度的缺鋅情況。鋅缺乏能夠?qū)е掳l(fā)育緩慢、智力減退、免疫功能低下等。在男性生殖系統(tǒng)中,鋅同樣發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。精子發(fā)生是指精子在睪丸內(nèi)的形成過程,包括精原細(xì)胞分裂增殖,精母細(xì)胞減數(shù)分裂,精子細(xì)胞變形三個(gè)連續(xù)的細(xì)胞分裂分化階段。鋅參與了精子發(fā)生過程,在精子發(fā)生過程中有著重要的作用。鋅缺乏能夠?qū)е戮影l(fā)生障礙,然而其確切的機(jī)制很大程度上還不是很清楚。因此我們使用鋅缺乏的CD-1小鼠模型進(jìn)一步研究鋅缺乏對(duì)小鼠睪丸和附睪的形態(tài)學(xué)影響以及鋅缺乏導(dǎo)致精子發(fā)生障礙的可能機(jī)制。方法:對(duì)4周齡CD-1雄性小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組,分為鋅缺乏組(ZD組)(N=20)和對(duì)照組(N=20),ZD組飼以低鋅飼料(0.85ppm),對(duì)照組飼以鋅正常飼料(30ppm)。所有動(dòng)物飲用去離子水并且飼養(yǎng)在用0.5%的EDTA處理過的不銹鋼籠子。喂養(yǎng)5周后取睪丸和附睪標(biāo)本,然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1.使用原子吸收光譜法(AAS)檢測(cè)ZD組和對(duì)照組睪丸組織中鋅離子濃度。2.HE染色觀察ZD組和對(duì)照組睪丸和附睪的形態(tài)學(xué)改變。3.使用H1T2和TRA54抗體進(jìn)行免疫熒光雙重染色檢測(cè)脫落細(xì)胞的性質(zhì)。4.Western Blot檢測(cè)ZD組和對(duì)照組睪丸中ZO-1、FAK、TGFβ1、TGF-β2、TNF-α、Par6的表達(dá)情況。結(jié)果:1.原子吸收光譜法測(cè)定ZD組睪丸組織中鋅離子的濃度為140.59±16.22ug/g,對(duì)照組睪丸組織中鋅離子濃度為218.44±31.92ug/g,ZD組鋅離子濃度顯著低于對(duì)照組(P0.05)。2.HE染色見對(duì)照組睪丸組織結(jié)構(gòu)正常,生精小管密集,生精上皮完整,各級(jí)生精細(xì)胞層次清楚、排列有序。ZD組睪丸生精上皮退化,精子細(xì)胞數(shù)量減少,尤其是細(xì)長(zhǎng)的和正在變細(xì)長(zhǎng)的精子細(xì)胞。支持細(xì)胞胞質(zhì)空泡化,生精小管閉塞,異常的生精小管數(shù)量變多,在異常的生精小管和附睪的頭、體、尾部發(fā)現(xiàn)脫落的細(xì)胞。對(duì)照組附睪的頭、體、尾部未有發(fā)現(xiàn)。3.H1T2和TRA54抗體免疫熒光雙重染色結(jié)果顯示ZD組脫落的細(xì)胞被染色,可能是不能繼續(xù)發(fā)育成熟的圓形精子細(xì)胞。4.Western blot結(jié)果顯示ZD組FAK和TGF-β1的蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組(FAK:P0.05,TGF-β1:P0.01),而ZO-1、TGF-β2、TNF-α、Par6蛋白的表達(dá)則無顯著差異(P0.05)。結(jié)論:鋅缺乏能夠引起小鼠睪丸形態(tài)學(xué)改變,如生精上皮退化,精子細(xì)胞數(shù)量減少,支持細(xì)胞胞質(zhì)空泡化,生精小管閉塞,異常的生精小管數(shù)量變多,同時(shí)導(dǎo)致睪丸圓形精子細(xì)胞不能繼續(xù)發(fā)育成熟并且脫落,FAK和TGF-β1蛋白可能在鋅缺乏引起小鼠睪丸病理改變過程中有重要的作用。
【學(xué)位單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R698.2
【部分圖文】：

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果子濃度雄性 CD-1 小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，分鋅缺乏0.85ppm）和鋅正常飼料（30ppm），喂養(yǎng)。對(duì)照組鋅離子濃度為 218.44±31.92ug/gZD 組鋅離子濃度顯著低于對(duì)照組，差表明鋅缺乏飲食能夠?qū)е虏G丸鋅離子濃度成功的，接下來的實(shí)驗(yàn)我們就用這種建

圖 2 對(duì)照組和 ZD 組睪丸的 HE 染色結(jié)果對(duì)照組：生精小管密集，生精上皮完整，各級(jí)生精細(xì)胞層次清楚、排列有序（A, B）生精上皮退化，精子細(xì)胞數(shù)量減少。支持細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)空泡化，生精小管閉塞（C, D的生精小管發(fā)現(xiàn)脫落的細(xì)胞（D）。黑色箭頭：支持細(xì)胞胞質(zhì)空泡化；綠色箭頭：脫落Bar=100μm（A、C），bar=20μm（B、D）。 小鼠附睪的形態(tài)學(xué)改變附睪組織的 HE 染色結(jié)果顯示 ZD 組附睪的頭、體、尾部發(fā)現(xiàn)脫落的細(xì)胞，附睪頭、體、尾部未有發(fā)現(xiàn)。

圖 3 附睪的 HE 染色結(jié)果ZD 組附睪的頭（G,J）、體（H,K）、尾（I,L）部發(fā)現(xiàn)脫落的細(xì)胞，對(duì)照組附睪的頭（,E）、尾（C,F）部未有發(fā)現(xiàn)。三角箭頭：脫落的細(xì)胞。bar=100μm（A、B、C、G、Hμm（D、E、F、J、K、L）。D 組脫落細(xì)胞的性質(zhì)我們?cè)?ZD 組異常的生精小管和附睪的頭、體、尾部發(fā)現(xiàn)了脫落的細(xì)胞，其可能是不能繼續(xù)發(fā)育的圓形精子細(xì)胞。為了驗(yàn)證脫落細(xì)胞的性質(zhì)，我 和 TRA54 抗體進(jìn)行免疫熒光雙重染色（H1T2 抗體為單倍體精子細(xì)胞特白 1 抗體，TRA54 為抗單倍體精子細(xì)胞特異性抗原抗體，均為單倍體精性抗體）。免疫熒光結(jié)果顯示 ZD 組脫落的細(xì)胞被 H1T2 和 TRA54 染色，的細(xì)胞可能是不能繼續(xù)發(fā)育的圓形精子細(xì)胞。

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本文編號(hào)：2819214