目的:利用尿酸性腎病大鼠動物模型,研究尿酸與腎臟鈣化關(guān)系及Cbfα1、TNF-α、OPN、OPG對鈣化的調(diào)節(jié)作用。觀察鈣離子拮抗劑對尿酸性腎病腎組織鈣化和鈣化調(diào)節(jié)因子的影響,探討尿酸性腎病腎組織鈣化的發(fā)生機(jī)制。方法:1.將45只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和氨氯地平處理組共3組,用10%酵母飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腺嘌呤(100mg/kg.d)灌胃造模,氨氯地平處理組在造模的同時予氨氯地平灌胃干預(yù)。第4周造模成功,處死大鼠。2.留24h尿液,并取大鼠眼內(nèi)眥靜脈血液5ml,分離血清后-20°C保存?zhèn)溆?備測各項(xiàng)生化指標(biāo)和24h尿微量白蛋白定量。3.第4周時處死大鼠,統(tǒng)一摘取右腎,一半腎組織部分用于行鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法測定大鼠腎組織鈣含量;部分腎組織制成蠟塊,留做HE染色病理切片和用免疫組化法檢測腎內(nèi)OPN、OPG、Cbfα1和TNF-α的表達(dá)。4.取另一半部分腎組織用Western Blot(WB)法檢測Cbfα1、TNF-α、OPN和OPG的蛋白表達(dá)水平,剩余部分應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)RT-PCR㖞檢測腎內(nèi)OPN、OPG、Cbfα1和TNF-αm RNA的表達(dá)。結(jié)果:1.喂養(yǎng)10%的酵母飼料聯(lián)合腺嘌呤100mg/kg.d灌胃造模4周,大鼠的血肌酐、尿素氮和血清尿酸及24h尿微量白蛋白水平,在模型組和處理組中較正常對照組明顯升高(p0.05),模型組和氨氯地平處理組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。模型組大鼠的腎小管擴(kuò)張,小管上皮細(xì)胞損傷,小管間質(zhì)存在炎細(xì)胞浸潤。2.尿酸性腎病模型組和氨氯地平處理組大鼠腎組織的鈣含量顯著高于正常對照組(P0.01),氨氯地平處理組大鼠腎組織鈣含量較尿酸性腎病模型組明顯減少(P0.01)。3.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示3組大鼠腎組織內(nèi)促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)均表達(dá)在腎小管,尿酸性腎病模型組大鼠腎組織內(nèi)促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)陽性表達(dá)強(qiáng)度較正常對照組明顯增強(qiáng)(P0.01)。氨氯地平處理組大鼠腎組織促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)陽性表達(dá)強(qiáng)度較模型組顯著減少(P0.01),仍顯著高于正常對照組(P0.01)。4.WB法檢測結(jié)果顯示模型組大鼠腎組織內(nèi)促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)的蛋白表達(dá)水平較正常對照組大鼠腎組織內(nèi)的表達(dá)明顯升高(P0.01)。氨氯地平處理組大鼠腎組織促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)蛋白表達(dá)水平較尿酸性腎病模型組顯著減少(P0.01),與正常對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.Real-time RT-PCR法檢測結(jié)果顯示尿酸性腎病模型組大鼠腎組織內(nèi)促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)基因表達(dá)水平較正常對照組大鼠腎組織內(nèi)表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.01)。氨氯地平處理組大鼠腎組織促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)基因表達(dá)較尿酸性腎病模型組明顯減少(分別為P0.01,P0.05),與正常對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。氨氯地平處理組大鼠抑鈣化因子(OPN、OPG)基因在腎組織的表達(dá)明顯低于較模型組(P0.01),但仍明顯高于正常對照組(P0.01)。結(jié)論:1.高尿酸可顯著增加尿酸性腎病大鼠腎組織內(nèi)促鈣化因子Cbfα1和TNF-α及抑鈣化因子OPN、OPG的蛋白和基因表達(dá)水平,導(dǎo)致大鼠腎組織鈣含量明顯增加。2.氨氯地平能下調(diào)尿酸性腎病腎組織內(nèi)促鈣化因子Cbfα1和TNF-α及抑鈣化因子OPN、OPG的蛋白和基因表達(dá)水平,從而減少大鼠腎組織鈣含量。3.促鈣化因子(TNF-a和Cbfa1)和抑鈣化因子(OPN、OPG)調(diào)節(jié)失衡可能參與了尿酸性腎病的發(fā)病。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R692
【部分圖文】：

血管鈣化相關(guān)調(diào)節(jié)因子在尿酸性腎病發(fā)病機(jī)制中的作用研究 博士學(xué)位4.1.3 大鼠腎臟病理正常對照組：正常大鼠的腎臟皮髓質(zhì)分界比較清楚，腎小球無損傷增生性病變；腎小管集合管結(jié)構(gòu)正常，無擴(kuò)張，腔內(nèi)無管型，無間質(zhì)灶瘀血；腎內(nèi)小動脈結(jié)構(gòu)正常。尿酸性腎病模型組：表現(xiàn)為腎小管擴(kuò)張，小管上皮細(xì)胞空泡變性，見明顯尿酸鹽晶體，小管間質(zhì)可見炎癥細(xì)胞（中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞）潤，表明尿酸性腎病模型已制備成功。如圖 4.1 所示：

圖 4.2 三組大鼠腎組織鈣含量比較Figure 4.2 Comparison of Calcium Content in renal tissue of ra腎病動物模型研究和評價的社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展后人民群眾生活方式跟著發(fā)生了變風(fēng)和尿酸性腎病的群體在我國已急劇增加，在全球趨勢。當(dāng)下尿酸性腎病發(fā)病機(jī)制及其有效的治療預(yù)而研究需要建立成功的動物模型，迄今為止，我們立與臨床相似的高尿酸、尿酸腎病動物模型。動物

正常對照組大鼠腎小管少量表達(dá) OPG，未見腎小球、腎血管和腎間質(zhì)表達(dá)。模型組大鼠腎小管顯著表達(dá) OPG，腎內(nèi)小動脈血管、腎小球和腎間質(zhì)同樣未見表達(dá)。與正常對照組大鼠腎組織內(nèi) OPG 表達(dá)強(qiáng)度（30.13±3.50）相比，尿酸性腎病模型組表達(dá)（51.78±10.13）和氨氯地平處理組表達(dá)（37.70±4.33）顯著增加（P<0.01），氨氯地平處理組大鼠腎組織 OPG 的表達(dá)強(qiáng)度較模型組顯著減少（P<0.01）。表 4.1 三組大鼠腎組織中 OPG 表達(dá)的比較（ x±s）Table4.1 Comparison of OPG expression in renal tissue of rat（ x±s）**P<0.01vs 正常對照組，＃＃P<0.01vs 模型組指標(biāo) 正常對照組 模型組 處理組(n=9) (n=9) (n=14) F POPG 的表達(dá) 30.13±3.50 51.78±10.13**37.70±4.33**＃＃27.34 0.000

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 邱翠婷;呂安林;李寰;姜曉宇;馬曉磊;李珊;郭顯;;鈣磷誘導(dǎo)大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣化的機(jī)制研究[J];中國循環(huán)雜志;2015年01期

2 何方;張文斌;傅國勝;;骨硬化蛋白在動脈粥樣硬化性心血管疾病中的研究進(jìn)展[J];中國循環(huán)雜志;2014年08期

3 齊永芬;唐朝樞;;血管鈣化—血管損傷性疾病的共同病理生理基礎(chǔ)[J];中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志;2011年03期

4 王中群;劉乃豐;;血管鈣化的病理分型及臨床新進(jìn)展[J];中華老年心腦血管病雜志;2011年02期

5 歐三桃;黃頌敏;趙安菊;陳澤君;賴學(xué)莉;;糖尿病腎病大鼠腎實(shí)質(zhì)內(nèi)小動脈鈣化及其與骨基質(zhì)蛋白的關(guān)系[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2008年11期

6 丁風(fēng)華;陸林;蒲里津;張建盛;張瑞巖;胡健;張奇;楊震坤;陳秋靜;沈衛(wèi)峰;;糖化白蛋白與糖尿病并發(fā)冠心病的關(guān)系[J];中國動脈硬化雜志;2008年02期

7 胡大一;氨氯地平降血壓抗冠狀動脈粥樣硬化的新證據(jù)[J];高血壓雜志;2005年05期

8 楊英;血管鈣化[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2004年02期

9 張萍;尿毒癥患者血管鈣化研究新進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).泌尿系統(tǒng)分冊;2003年05期

10 奚九一,趙兆琳,魯培基,屈立志,王義成;高尿酸血癥腎病的實(shí)驗(yàn)動物模型研究[J];上海中醫(yī)藥雜志;2001年10期

本文編號：2819103