目的:利用尿酸性腎病大鼠動(dòng)物模型,研究尿酸與腎臟鈣化關(guān)系及Cbfα1、TNF-α、OPN、OPG對(duì)鈣化的調(diào)節(jié)作用。觀察鈣離子拮抗劑對(duì)尿酸性腎病腎組織鈣化和鈣化調(diào)節(jié)因子的影響,探討尿酸性腎病腎組織鈣化的發(fā)生機(jī)制。方法:1.將45只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和氨氯地平處理組共3組,用10%酵母飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腺嘌呤(100mg/kg.d)灌胃造模,氨氯地平處理組在造模的同時(shí)予氨氯地平灌胃干預(yù)。第4周造模成功,處死大鼠。2.留24h尿液,并取大鼠眼內(nèi)眥靜脈血液5ml,分離血清后-20°C保存?zhèn)溆?備測(cè)各項(xiàng)生化指標(biāo)和24h尿微量白蛋白定量。3.第4周時(shí)處死大鼠,統(tǒng)一摘取右腎,一半腎組織部分用于行鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法測(cè)定大鼠腎組織鈣含量;部分腎組織制成蠟塊,留做HE染色病理切片和用免疫組化法檢測(cè)腎內(nèi)OPN、OPG、Cbfα1和TNF-α的表達(dá)。4.取另一半部分腎組織用Western Blot(WB)法檢測(cè)Cbfα1、TNF-α、OPN和OPG的蛋白表達(dá)水平,剩余部分應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)RT-PCR㖞檢測(cè)腎內(nèi)OPN、OPG、Cbfα1和TNF-αm RNA的表達(dá)。結(jié)果:1.喂養(yǎng)10%的酵母飼料聯(lián)合腺嘌呤100mg/kg.d灌胃造模4周,大鼠的血肌酐、尿素氮和血清尿酸及24h尿微量白蛋白水平,在模型組和處理組中較正常對(duì)照組明顯升高(p0.05),模型組和氨氯地平處理組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。模型組大鼠的腎小管擴(kuò)張,小管上皮細(xì)胞損傷,小管間質(zhì)存在炎細(xì)胞浸潤(rùn)。2.尿酸性腎病模型組和氨氯地平處理組大鼠腎組織的鈣含量顯著高于正常對(duì)照組(P0.01),氨氯地平處理組大鼠腎組織鈣含量較尿酸性腎病模型組明顯減少(P0.01)。3.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示3組大鼠腎組織內(nèi)促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)均表達(dá)在腎小管,尿酸性腎病模型組大鼠腎組織內(nèi)促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度較正常對(duì)照組明顯增強(qiáng)(P0.01)。氨氯地平處理組大鼠腎組織促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度較模型組顯著減少(P0.01),仍顯著高于正常對(duì)照組(P0.01)。4.WB法檢測(cè)結(jié)果顯示模型組大鼠腎組織內(nèi)促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)的蛋白表達(dá)水平較正常對(duì)照組大鼠腎組織內(nèi)的表達(dá)明顯升高(P0.01)。氨氯地平處理組大鼠腎組織促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)蛋白表達(dá)水平較尿酸性腎病模型組顯著減少(P0.01),與正常對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.Real-time RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示尿酸性腎病模型組大鼠腎組織內(nèi)促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑鈣化因子(OPN、OPG)基因表達(dá)水平較正常對(duì)照組大鼠腎組織內(nèi)表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.01)。氨氯地平處理組大鼠腎組織促血管鈣化因子(Cbfα1、TNF-α)基因表達(dá)較尿酸性腎病模型組明顯減少(分別為P0.01,P0.05),與正常對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。氨氯地平處理組大鼠抑鈣化因子(OPN、OPG)基因在腎組織的表達(dá)明顯低于較模型組(P0.01),但仍明顯高于正常對(duì)照組(P0.01)。結(jié)論:1.高尿酸可顯著增加尿酸性腎病大鼠腎組織內(nèi)促鈣化因子Cbfα1和TNF-α及抑鈣化因子OPN、OPG的蛋白和基因表達(dá)水平,導(dǎo)致大鼠腎組織鈣含量明顯增加。2.氨氯地平能下調(diào)尿酸性腎病腎組織內(nèi)促鈣化因子Cbfα1和TNF-α及抑鈣化因子OPN、OPG的蛋白和基因表達(dá)水平,從而減少大鼠腎組織鈣含量。3.促鈣化因子(TNF-a和Cbfa1)和抑鈣化因子(OPN、OPG)調(diào)節(jié)失衡可能參與了尿酸性腎病的發(fā)病。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R692
【部分圖文】：

血管鈣化相關(guān)調(diào)節(jié)因子在尿酸性腎病發(fā)病機(jī)制中的作用研究 博士學(xué)位4.1.3 大鼠腎臟病理正常對(duì)照組：正常大鼠的腎臟皮髓質(zhì)分界比較清楚，腎小球無(wú)損傷增生性病變；腎小管集合管結(jié)構(gòu)正常，無(wú)擴(kuò)張，腔內(nèi)無(wú)管型，無(wú)間質(zhì)灶瘀血；腎內(nèi)小動(dòng)脈結(jié)構(gòu)正常。尿酸性腎病模型組：表現(xiàn)為腎小管擴(kuò)張，小管上皮細(xì)胞空泡變性，見(jiàn)明顯尿酸鹽晶體，小管間質(zhì)可見(jiàn)炎癥細(xì)胞（中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞）潤(rùn)，表明尿酸性腎病模型已制備成功。如圖 4.1 所示：

圖 4.2 三組大鼠腎組織鈣含量比較Figure 4.2 Comparison of Calcium Content in renal tissue of ra腎病動(dòng)物模型研究和評(píng)價(jià)的社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展后人民群眾生活方式跟著發(fā)生了變風(fēng)和尿酸性腎病的群體在我國(guó)已急劇增加，在全球趨勢(shì)。當(dāng)下尿酸性腎病發(fā)病機(jī)制及其有效的治療預(yù)而研究需要建立成功的動(dòng)物模型，迄今為止，我們立與臨床相似的高尿酸、尿酸腎病動(dòng)物模型。動(dòng)物

正常對(duì)照組大鼠腎小管少量表達(dá) OPG，未見(jiàn)腎小球、腎血管和腎間質(zhì)表達(dá)。模型組大鼠腎小管顯著表達(dá) OPG，腎內(nèi)小動(dòng)脈血管、腎小球和腎間質(zhì)同樣未見(jiàn)表達(dá)。與正常對(duì)照組大鼠腎組織內(nèi) OPG 表達(dá)強(qiáng)度（30.13±3.50）相比，尿酸性腎病模型組表達(dá)（51.78±10.13）和氨氯地平處理組表達(dá)（37.70±4.33）顯著增加（P<0.01），氨氯地平處理組大鼠腎組織 OPG 的表達(dá)強(qiáng)度較模型組顯著減少（P<0.01）。表 4.1 三組大鼠腎組織中 OPG 表達(dá)的比較（ x±s）Table4.1 Comparison of OPG expression in renal tissue of rat（ x±s）**P<0.01vs 正常對(duì)照組，＃＃P<0.01vs 模型組指標(biāo) 正常對(duì)照組 模型組 處理組(n=9) (n=9) (n=14) F POPG 的表達(dá) 30.13±3.50 51.78±10.13**37.70±4.33**＃＃27.34 0.000

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2819103