白藜蘆醇對高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細胞凋亡的保護作用及機制研究

發(fā)布時間：2020-09-10 07:55

　　目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病的嚴重并發(fā)癥之一,其病理變化呈慢性進行性,最終導(dǎo)致終末期腎衰竭,是糖尿病患者主要的死亡原因,目前對于DN的治療仍然缺乏很有效的手段。糖尿病腎病的特點是腎臟細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的過度積累、腎小管間質(zhì)增厚和腎血管的透明化。氧化應(yīng)激產(chǎn)生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)在腎小球和腎小管間質(zhì)ECM的合成和降解中發(fā)揮了重要作用。氧化應(yīng)激在糖尿病腎病發(fā)病過程中起重要作用。轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(NF-E2relatedfactor2,Nrf2)是抗氧化反應(yīng)元件的激活因子,是重要的內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激通路,在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展過程中的作用受到廣泛關(guān)注。白藜蘆醇是一種天然的多酚醇類化合物,廣泛存在于葡萄籽、虎杖、花生等多種植物中,具有抗氧化、抗炎及抗衰老等多種藥理活性。白藜蘆醇能明顯降低DN大鼠的白蛋白尿水平和提高肌酐清除率,從而降低DN大鼠的腎臟高灌注和高濾過;白藜蘆醇能有效地降低DN大鼠腎臟內(nèi)Ⅳ型膠原、纖維連接蛋白、結(jié)締組織生長因子、纖溶酶原激活物抑制劑-1、轉(zhuǎn)化生長因子-β1等的表達水平,從而減輕糖尿病大鼠的腎臟纖維化程度。我們的實驗設(shè)計是用高糖誘導(dǎo)人近端腎小管上皮細胞系(HK-2細胞)凋亡,探討白藜蘆醇抑制高糖誘導(dǎo)HK-2凋亡的可能機制。方法:采用MTT法檢測HK-2細胞活力;使用caspase-3活性與Hoechst染色法檢測HK-2細胞凋亡;運用DCFH-DA法檢測HK-2細胞內(nèi)的活性氧水平;通過Real-time PCR檢測細胞內(nèi)Nrf2 mRNA表達;采用Western Blot法檢測細胞內(nèi)Nrf2蛋白表達。結(jié)果:30mM葡萄糖能顯著降低HK-2細胞活力,并呈時間依賴性,而30 mM滲透壓對照組對細胞沒有影響。30mM葡萄糖可誘導(dǎo)HK-2細胞凋亡,Hoechst染色法顯示凋亡細胞增多,且caspase-3活性增加。30mM葡萄糖能升高細胞活性氧水平。1μM和10μM白藜蘆醇均可以增加HK-2細胞活力,其中10μM白藜蘆醇能使高糖誘導(dǎo)的HK-2細胞的凋亡率顯著下降,減少Hoechst染色陽性細胞,降低caspase-3活性。10μM白藜蘆醇能使高糖誘導(dǎo)的HK-2細胞的活性氧水平下降。高糖能下調(diào)Nrf2 mRNA和蛋白表達,10μM白藜蘆醇能上調(diào)高糖抑制的Nrf2 mRNA和蛋白表達。結(jié)論:白藜蘆醇對高糖誘導(dǎo)的HK-2凋亡的保護機制可能與抑制活性氧的生成和上調(diào)Nrf-2表達有關(guān)。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R587.2;R692.9
【部分圖文】：

白藜蘆醇,凋亡,甘露醇,葡萄糖