背景慢性腎臟疾病(Chronic kidney disease,CKD)已成為全球關(guān)注的公共健康問題,其發(fā)病率和死亡率逐年在增加。纖維化是各種原因CKD進(jìn)展至ESRD的共同通路,減緩或逆轉(zhuǎn)纖維化過程意義重大。盡管面臨巨大的臨床需要,但是目前能夠有效干預(yù)纖維化的策略仍舊不多。CD248是分子量為175 kDa的Ⅰ型跨膜糖蛋白,研究發(fā)現(xiàn)CD248分子參與纖維化發(fā)生發(fā)展過程,但是具體的作用機(jī)制仍不清楚。目的本研究擬以小鼠腎纖維化模型為研究對象,輸注CD248單克隆抗體,檢測纖維化相關(guān)指標(biāo),分析干擾CD248分子通路對纖維化的影響,進(jìn)而探討CD248在纖維化中的作用機(jī)制。方法1.建立葉酸腎纖維化小鼠模型:將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為正常對照組和葉酸(Folicacid,FA)組,分別予以腹腔注射NaHC03或者葉酸(劑量250mg/kg)。在注射葉酸后第3、14和28天處死小鼠,收集血液和腎臟組織,檢測血肌酐和尿素水平,HE和MASSON染色檢測腎臟病理結(jié)構(gòu),免疫組化檢測腎組織a-SMA、Collagen Ⅰ、Fibronectin以及CD248蛋白表達(dá)水平。2.CD248單克隆抗體干預(yù)實(shí)驗(yàn):將小鼠隨機(jī)分為正常對照組、葉酸模型PBS注射對照組、葉酸模型CD248抗體低劑量注射組和高劑量注射組,在腹腔注射后第3天開始,分別予以尾靜脈輸注PBS、2.5mg/kg抗體或者7.5mg/kg抗體。在葉酸模型第28天處死小鼠,檢測血肌酐和尿素水平,HE和MASSON染色觀察腎臟纖維化變化,Western Blot、qRT-PCR和免疫組化染色檢測腎組織α-SMA、Collagen Ⅰ、Fibronectin以及CD248蛋白和mRNA表達(dá)變化。結(jié)果1.與正常對照組比較,FA3天、FA14天和FA28天葉酸模型組血肌酐和尿素水平顯著升高(P0.05),腎纖維化程度逐漸加重,腎組織α-SMA、Collagen Ⅰ、Fibronectin以及CD248蛋白表達(dá)均顯著升高。2.與葉酸模型PBS注射對照組比較,CD248抗體低劑量組和CD248抗體高劑量組血肌酐水平顯著降低(P0.05),但尿素水平降低不明顯(P0.05)。HE和MASSON染色結(jié)果顯示,與正常對照組比較,葉酸模型PBS注射對照組腎組織纖維化嚴(yán)重;與葉酸模型PBS注射對照組比較,CD248抗體低劑量組和CD248抗體高劑量組腎纖維化程度明顯減輕,低劑量組減輕程度較高劑量組更為顯著。Western Blot、qRT-PCR和免疫組化染色結(jié)果顯示,與葉酸模型PBS注射對照組比較,CD248抗體低劑量組和CD248抗體高劑量組腎組織α-SMA、Collagen Ⅰ、Fibronectin以及CD248蛋白和mRNA表達(dá)水平顯著下降(P0.05)。結(jié)論1.成功建立葉酸腎纖維化小鼠模型。2.CD248抗體干預(yù)能夠改善纖維化程度,CD248可能成為纖維化診療的重要靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R692
【部分圖文】：

１．２結(jié)果逡逑１．２．１葉酸腎纖維化小鼠模型建立逡逑如圖１－１Ａ，與正常對照組比較，葉酸組血清肌酐水平顯著升高（Ｐ＜０．０１），逡逑在整個(gè)變化趨勢中可見注射葉酸后第３天（ＦＡ３天組）小鼠血清肌酐水平最高，逡逑到了第１４天和第２８天可見小鼠肌酐水平逐漸恢復(fù)。如圖１－１Ｂ，ＵＲＥＡ結(jié)果顯示，逡逑與正常對照組比較，ＦＡ３天組、ＦＡ１４天組和ＦＡ２８天組尿素水平均升高，但ＦＡ２８逡逑天組與正常對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞邋０．０５）。如圖１－１Ｃ，邋ＨＥ染色結(jié)果顯示，逡逑正常對照組腎臟病理結(jié)構(gòu)基本正常，葉酸模型各組小鼠腎臟表現(xiàn)為不同程度的逡逑腎纖維化，主要表現(xiàn)為腎小球萎縮、腎小管擴(kuò)張和腎間質(zhì)明顯X椏恚渲校疲粒玻稿義咸熳檣鱸嗨鶘撕蛻黽渲氏宋潭茸釵現(xiàn)�。ＭＡ褭严７�(wěn)舊允荊胝６哉斟義獻(xiàn)楸冉

本文編號：2815302