目的:探討2型糖尿病伴糖尿病腎臟病(T2DM伴DKD)患者的腸道菌群多樣性變化。方法:收集2017年-2018年于我院就診的2型糖尿病伴糖尿病腎臟病患者8例(DKD組)、初診的單純2型糖尿病患者9例(T2DM組)和同期健康志愿者8例(Control組)的一般資料及臨床檢驗結(jié)果,采集研究對象的新鮮糞便樣本,提取、擴增細(xì)菌的16sRNA,并應(yīng)用Illumina MiSeq平臺測序。根據(jù)16sRNA基因檢測結(jié)果,進(jìn)行可操作分類單元(OTU)劃分和分類結(jié)果鑒定,進(jìn)行偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)、Alpha多樣性分析及分類學(xué)組成分析。結(jié)果:(1)與Control組相比,T2DM組的血小板/淋巴細(xì)胞(PLR)升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),DKD組的舒張壓、尿素、尿酸顯著升高,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),胱抑素C、肌酐、PLR升高,差異具有顯著性(P0.01),T2DM組和DKD組的空腹血糖升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與T2DM組相比,DKD組PLR、胱抑素C升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),尿素、尿酸、肌酐顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),胱抑素C、尿素、肌酐與PLR呈正向相關(guān)。(2)與Control組相比,盡管差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但T2DM組和DKD組豐富度指數(shù)Chao1指數(shù)、ACE指數(shù)降低,且后者低于前者,2型糖尿病組(T2DM+DKD組)多樣性度指數(shù)(Simpson、Shannon指數(shù))較Control組降低。(3)在門水平,2型糖尿病組(T2DM組+DKD組)放線菌門(Actinobacteria)顯著高于Control組,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);與Control組相比,盡管差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但DKD組擬桿菌門與厚壁菌門的比值較低。(4)在屬水平,與Control組相比,T2DM組和DKD組擬普雷沃菌屬(Alloprevotella)均較低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);DKD組的巨球型菌屬(Megasphaera)低于Control組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);盡管差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但DKD組的布勞特氏菌屬(Blautia)、糞球菌屬(Coprococcus)低于Control組,其中DKD組Blautia低于T2DM組,DKD組的埃希氏菌屬(Escherichia)、腸球菌屬(Enterococcus)高于Control組。結(jié)論:T2DM伴DKD患者的腸道菌群豐富度、多樣性下降,腸道菌群的失調(diào)可能參與了T2DM伴DKD的發(fā)生與發(fā)展,慢性炎癥狀態(tài)可能與T2DM伴DKD的發(fā)生與發(fā)展相關(guān)。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R587.2;R692.9
【部分圖文】：

圖 1 OTU 交集 Venn 圖樣本，橢圓間的重疊區(qū)域表明組間的共有 OTU，每個區(qū)塊的數(shù)字表明該區(qū)塊所包含的共有或獨有 OTU 數(shù)量。 偏最小二乘法判別分析回歸模型的基礎(chǔ)上進(jìn)行 PLS-DA 分析，根據(jù)樣本的分組或分布信結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)。各分組（樣本）中屬于同一分組的樣本彼此之間距離點之間的距離遠(yuǎn)，各組組內(nèi)樣本菌群的結(jié)構(gòu)差異性較低，而三組樣差異性較高，結(jié)果表明 Control 組、T2DM 組、DKD 組樣本的分見圖 2）。T2DM

圖 2 PLS-DA 判別分析圖注：每個點代表一個樣本，顏色相同的點屬于同一分組，相同分組的點以橢圓標(biāo)出。2.6 Alpha 多樣性分析2.6.1 16sRNA 檢測的質(zhì)控圖（Rarefaction 稀疏曲線）有多種指數(shù)來反映微生物群落 Alpha 多樣性，常用的度量指數(shù)主要包括側(cè)重于體現(xiàn)群落豐富度 Chao1 指數(shù)和 ACE 指數(shù)，以及兼顧群落均勻度的 Shannon 指數(shù)和Simpson 指數(shù)。根據(jù)所獲得 OTU 豐度矩陣，分別計算各個樣本的 Alpha 多樣性指數(shù)（Chao1、ACE、Simpson、Shannon）（見表 4）；稀疏曲線（Rarefaction curve）是生態(tài)學(xué)領(lǐng)域的一種常用方法，以評判每個樣本的當(dāng)前測序深度是否足以反映該群落樣本所包含的微生物多樣性（見圖 3），三組樣本稀疏曲線逐漸趨于平緩，說明目前的測序深度已足夠反映當(dāng)前樣本所包含的多樣性，繼續(xù)增加測序深度已無法檢測到大量的尚未發(fā)現(xiàn)的新 OTU，本次 16sRNA 測序的質(zhì)控過關(guān)。

17圖 3 OTU 數(shù)的稀疏曲線圖注：橫坐標(biāo)代表每個樣本中隨機抽取的序列總數(shù)；縱坐標(biāo)代表在相應(yīng)深度下觀測到的 OTU 數(shù)。曲線的長短反映了樣本測序量的高低。曲線的平緩程度反映了測序深度對于觀測樣本多樣性的影響大小。

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本文編號：2813056