目的:(1)CM-DIL標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的可行性,觀察標(biāo)記前骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)(BAMG)共同培養(yǎng)后的生存情況,以確保移植到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的種子細(xì)胞的存活效果。(2)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是否在體內(nèi)存活并發(fā)生遷移,是否參與了膀胱組織缺損的重建。(3)評(píng)估不同的種子細(xì)胞移植途徑對(duì)缺損膀胱組織修復(fù)效果的影響。(4)觀察各組修復(fù)膀胱組織IL-2及IL-4的表達(dá)。方法:分離培養(yǎng)得到新西蘭兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,制備兔膀胱脫細(xì)胞基質(zhì),收集培養(yǎng)得到的p3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè),用CM-DIL標(biāo)記BMSCs。將實(shí)驗(yàn)兔分為以下四組:靜脈注射BMSCs聯(lián)合BAMG修復(fù)膀胱組、局部注射BMSCs聯(lián)合BAMG修復(fù)膀胱組、單純BAMG修復(fù)膀胱組、切除相同面積膀胱壁后直接縫合組,膀胱缺損模型成功建立并養(yǎng)殖七周后處死動(dòng)物將膀胱取出,對(duì)各組膀胱修復(fù)部位取材并將其分為兩部分,一部分通過冰凍切片觀察染色的BMSCs顯色情況及組織結(jié)構(gòu),并通過免疫組化觀察重建膀胱組織尿路上皮(AE1/AE3單抗)、平滑肌(α-SMA單抗)和血管(CD31單抗)的表達(dá)情況以此衡量新生膀胱的修復(fù)效果,另一部分用于RT-qPCR檢測(cè)抗炎因子IL-4及促炎因子IL-2的表達(dá)變化。結(jié)果:(1)CM-DIL在體外成功標(biāo)記兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,標(biāo)記濃度選為4mg/L時(shí)熒光標(biāo)記率為93.7%,同時(shí)CCK-8法顯示此濃度對(duì)細(xì)胞活性未產(chǎn)生明顯影響。(2)注射標(biāo)記CM-DIL的BMSCs的兩組動(dòng)物在7周后能在修復(fù)膀胱組織中找到顯色BMSCs,且顯色效果皆滿意,而且局部注射BMSCs組修復(fù)組織中顯色細(xì)胞數(shù)明顯多于靜脈注射組(p0.05)。(3)HE染色結(jié)果回報(bào):單純修補(bǔ)BAMG組的膀胱結(jié)構(gòu)尚可見,但平滑肌組織排列紛亂、血管及神經(jīng)稀少。局部注射BMSCs組與靜脈注射BMSCs組內(nèi)膀胱三層結(jié)構(gòu)已形成,外膜內(nèi)可見神經(jīng)、血管和平滑肌組織。重新修復(fù)的膀胱組織的尿路上皮(AE1/AE3單抗)、平滑肌(α-SMA單抗)和血管(CD31單抗)都有良好的表達(dá),且通過半定量分析測(cè)定的三項(xiàng)指標(biāo)的IOD值(陽性表達(dá)面積)皆為局部注射BMSCs組靜脈注射BMSCs組單純修補(bǔ)BAMG組(p0.05)。(4)術(shù)后第七周膀胱組織內(nèi)IL-2及IL-4各組濃度皆為單純修補(bǔ)BAMG組靜脈注射BMSCs組局部注射BMSCs組(p0.05)。結(jié)論:(1)利用CM-DIL作為BMSCs的示蹤劑是可行的,它可以在不傷害細(xì)胞活性的同時(shí)給種子細(xì)胞提供穩(wěn)定的熒光表達(dá)。(2)靜脈注射的CM-DIL-BMSCs在實(shí)驗(yàn)兔體內(nèi)發(fā)生了歸巢,和靜脈注射組相比組織局部注射的CM-DIL-BMSCs定植于受損組織內(nèi)的數(shù)目更多。(3)和單純BAMG修復(fù)膀胱相比局部注射BMSCs組與靜脈注射BMSCs組的實(shí)驗(yàn)兔組織工程膀胱結(jié)構(gòu)接近正常兔膀胱結(jié)構(gòu),有較為豐富的尿路上皮、平滑肌及血管組織。(4)移植兔BMSCs可降低膀胱組織內(nèi)IL-2及IL-4水平,促進(jìn)受損部位的修復(fù)。
【學(xué)位單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R699
【部分圖文】：

1 顯微鏡下 BMSCs 的形態(tài) 顯微鏡下的第一代 BMSCs（×100） B 顯微鏡下的第三代 BMSCs（×100）1A 為第一代兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，混雜有少量雜質(zhì)細(xì)胞；圖 1B 為第三代兔骨髓間充質(zhì)的三角形，梭形，魚肉狀。 兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志流式鑒定

圖 2 BMSCs 的表面標(biāo)志物表達(dá)-D 為兔 BMSCs 流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示：表達(dá) CD-29 和 CD-44 而不表達(dá) CD-45、CA-DR-A。膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)制備及復(fù)合物的形態(tài)觀察經(jīng)過上述制備脫細(xì)胞基質(zhì)的步驟可制得一半透明組織，該組織呈淺白色，可

圖 3A. 掃描電鏡下的 BAMG（×1000） 圖3B. HE 染色后的支架種子細(xì)胞復(fù)合物(×13.4 顯微鏡下 CM-DIL 標(biāo)記后的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)通過調(diào)制成特定濃度后的 CM-DIL 溶液標(biāo)記兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，標(biāo)記 24h 后胞在熒光顯微鏡下可觀察到明顯的紅色（見圖 4A 及圖 4B）。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張雅妮;于美娟;馮善偉;王淑輝;李美山;熊符;張成;;CM-Dil標(biāo)記大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性探討[J];中國組織工程研究;2016年45期

2 武京國;謝方南;馬慧雨;王黔;曹誼林;肖苒;;EGFP和CM-Dil示蹤骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的體內(nèi)研究[J];中國美容醫(yī)學(xué);2012年03期

3 馬慧雨;肖苒;杜曉巖;;熒光活性染料(CM-Dil)對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力的影響[J];口腔頜面外科雜志;2011年04期

4 商青青;李凱;周建業(yè);胡盛壽;;CM-DIL和DAPI標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞[J];中國組織工程研究;2013年45期

5 何金英;楊麗敏;馬玉珍;孫文芳;岑堯;姚星宇;;CM-Dil及DAPI聯(lián)合標(biāo)記示蹤人臍血單核細(xì)胞細(xì)胞膜及細(xì)胞核的可行性[J];中國組織工程研究;2012年41期

6 徐會(huì)濤;周穎;王冰瑩;毛飛;徐會(huì)娟;許文榮;朱偉;錢暉;;人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的CM-Dil標(biāo)記及其移植在急性腎損傷大鼠體內(nèi)的示蹤研究[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年03期

7 陳麗;吳本清;程涵蓉;黃進(jìn)潔;丁璐;宋金枝;;CM-Dil體外標(biāo)記人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞傳代示蹤的可行性[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年40期

8 王黎;周清;楊艷;陳劍;徐錦堂;;CM-Dil與DAPI聯(lián)合標(biāo)記人羊膜上皮細(xì)胞的可行性研究[J];眼科新進(jìn)展;2013年11期

9 陳小瑩;李欣然;王清;付霞霏;;CM-Dil標(biāo)記示蹤間充質(zhì)干細(xì)胞可行性的體外試驗(yàn)[J];重慶醫(yī)學(xué);2018年11期

10 尹飛;郭麗;孟春陽;周煜博;張晗;王冬耀;楊小玉;;CM-Dil體外標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其在燒傷大鼠模型腸組織內(nèi)的示蹤[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 高蕾;陳幸華;馮一梅;張曦;高力;張誠;梁雪;郝磊;彭賢貴;王慶余;;CM-Dil示蹤人臍血源基質(zhì)細(xì)胞體內(nèi)遷移定位的研究[A];第12屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

2 于歡;梁戰(zhàn)華;;CM-Dil標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠的體內(nèi)示蹤研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2015年

3 于歡;劉美辰;李愛萍;梁戰(zhàn)華;;CM-Dil標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠的腦內(nèi)示蹤研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 程誠;CM-DIL標(biāo)記新西蘭兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)修復(fù)膀胱的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[D];內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué);2019年

2 黃昕昕;大鼠不同部位來源脂肪源性干細(xì)胞的增殖能力比較及CM-Dil體外標(biāo)記研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

3 商青青;可注射組織工程構(gòu)建物改善心肌梗死后心功能的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

4 劉少鵬;經(jīng)腎動(dòng)脈移植脂肪干細(xì)胞對(duì)大鼠急性缺血性腎損傷的治療作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 王洋;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在骨髓衰竭小鼠體內(nèi)的歸巢及療效觀察[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2808206