【摘要】：據世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,目前全球約有10%-15%的育齡夫婦存在生育問題,不孕不育癥成為全世界關注的焦點問題,在這些病例中男性因素引起的不育約占50%[1-3]�？膳碌氖�,精子密度和精子活力每年都在以一定程度的降低,這可能與日益增長的環(huán)境污染的有關[4]。根據世界衛(wèi)生組織(WHO)指南(第5版),弱精癥(弱精子癥)的特征是新鮮精液中的精子數量正常但精子活力降低。弱精子癥可能是泌尿生殖系統(tǒng)感染,精索靜脈曲張異常,精液液化,激素異常等原因造成的結果[5,6]。然而,在一些弱精子癥中,大約50%的病因未被發(fā)現,這被稱為特發(fā)性男性不育癥[2]。特發(fā)性弱精子癥的發(fā)病機制尚不清楚,這阻礙了弱精子癥的診斷和治療進展。迄今為止,一些研究表明,某些關鍵基因的差異表達與弱精癥的發(fā)生發(fā)展密切相關。目前已經明確與弱精癥發(fā)生發(fā)展密切相關的基因或蛋白包括纖毛和鞭毛相關蛋白69(CFAP69)、富含半胱氨酸的分泌蛋白2(CRISP2)等,這些蛋白的差異表達同樣可以導致小鼠的弱精癥發(fā)生[7,8]。此外,我們前期研究通過基因芯片技術已經確定semenogelin 1(SEMG1)是特發(fā)性弱精子癥的潛在標志物[9]。SEMG1是男性精液中的主要分泌蛋白,來源于精囊,射精后形成凝膠基質,包裹射精后精子,前列腺特異性抗原(PSA)將其降解為較小的肽,這使得精子能夠獲得運動能力并快速移動[10]。Martinez-Heredia等[11,12]使用二維蛋白質組學分析鑒定出多種弱精子癥精液樣品中差異表達的蛋白質,其中包含SEMG1蛋白的高表達。一致地,我們之前的研究通過檢測弱精子癥患者和正常精子的基因表達譜分析提示弱精子癥患者中SEMG1高表達,這提示SEMG1在弱精子癥的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用[9]。然而,弱精子癥患者中SEMG1高表達的分子機制尚不清楚�；虻谋磉_通常由遺傳和表觀遺傳學共同調控[13]。micrRNAs(miRNA)在基因的表達調控方面發(fā)揮著重要的作用,因此在許多生物學過程中起到至關重要的作用[14,15]。研究發(fā)現miRNA不僅表達于哺乳動物的睪丸及生殖細胞[16,17][18],在人的精液精子中也檢測到各種miRNAs的存在[19],這些miRNAs的生物學功能有待進一步研究[20,21]。在精子的發(fā)生發(fā)展過程中存在廣泛的miRNA,研究表明miRNA在精原細胞的形成以及精原細胞向精母細胞的分化過程可以通過調控關鍵基因的表達維持正常的生物學進程[22-25]。我們前期發(fā)現SEMG1基因在弱精子癥患者精液精子中高表達,然而,目前仍不清楚精子中miRNA是否參與調控弱精癥精子中SEMG1的表達調控,本研究旨在明確何種miRNA參與調控SEMG1的表達介導弱精子癥發(fā)生。在本研究中,我們檢測了弱精癥和正常精液精子中SEMG1和miR-525-3p的表達水平。同時,我們發(fā)現高SEMG1表達分別與異常形態(tài),低精子活力和男性不育相關。我們的研究結果表明,miR-525-3p缺失可導致SEMG1的異常表達并且與男性不育密切相關,這為治療男性不育或男性避孕提供了可能的靶點。方法和結果:1.弱精癥患者和正常精子基本參數的比較我們比較了 30名弱精子癥患者和30名年齡匹配的正常精子志愿者的精液常規(guī)參數。在年齡,精子量,pH和精子濃度方面,弱精子癥患者和正常精子志愿者之間沒有顯著差異。值得注意的是,與正常精子組相比,弱精子癥患者的精子前向運動能力和正常形態(tài)占比明顯降低。2.弱精癥患者和正常志愿者精液精子中SEMGl mRNA和蛋白表達水平檢測。分別利用qPCR及WB技術在弱精子癥患者和正常志愿者的精液精子中檢測SEMG1mRNA和蛋白質表達水平。結果顯示,與正常精液精子相比,弱精癥患者精液精子中SEMG1 mRNA的表達水平顯著升高(1.40±0.35 VS 0.46±0.23,p0.001)。同樣,免疫蛋白質印跡分析也表明SEMG1蛋白在弱精癥患者精液精子中的表達水平明顯升高(弱精癥組VS正常組,P0.001)。3.miR-525-3p在弱精癥患者精液精子中低表達,并可以通過與SEMG1的3'-UTR結合直接抑制SEMG1蛋白的表達。我們使用miRWalk2.0、MiRanda、RNA22、Targetscan四個數據庫來預測可能靶向SEMG1基因3'-UTR區(qū)的miRNA。通過生物信息學分析,我們篩選出了六個候選的 miRNA(miR-525-3p,miR-524-3p,miR-133b,miR-671-5p,miR-133a-3p和miR-130a-5p)。然后通過qRT-PCR定量檢測了正常對照組及弱精癥組精液精子中這些候選的miRNA的表達水平。有趣的是,我們發(fā)現在弱精子癥患者的射精精子中miR-525-3p的表達水平低于正常精子對照(1.22±1.00對比0.64±0.55,P=0.007),而其他5個miRNA在正常精子與弱精子癥精子中表達無明顯差異。這一結果提示,精液精子中miR-525-3p和SEMG1之間可能存在潛在關聯。為了進一步證實miR-525-3p是否能特異性調節(jié)SEMG1表達,我們進行了雙熒光素酶報告基因實驗。當用miR-525-3pmimic與含SEMG1的3‘UTR的質粒共轉染293T細胞時,觀察到熒光素酶活性受到明顯的抑制。綜上所述,miR-525-3p可通過靶向調控SEMG1蛋白的表達參與弱精癥的發(fā)生。4.精子中miR-525-3p和SEMG1 mRNA表達水平與精子的參數相關性分析我們對精子中miR-525-3p及SEMG1 mRNA表達水平與臨床精液常規(guī)參數的相關性進行了統(tǒng)計分析。結果表明,miR-525-3p表達水平與精子活力和正常形態(tài)率呈正相關。相反,SEMG1 mRNA表達水平與精子活力和正常形態(tài)率呈負相關。此外,miR-525-3p或SEMG1 mRNA的表達水平與其他精子參數(如精液量和精子濃度、PH值等)無關。5.臨床精液樣本精子中miR-525-3p和SEMG1蛋白的表達水平成負相關通過雙熒光素酶報告基因實驗檢測,我們初步證實了miR-525-3p可以靶向結合SEMG1基因的3'UTR區(qū)。為進一步探討臨床精液樣本精子中miR-525-3p和SEMG1蛋白表達量之間的相關性,我們隨機選取60例納入者中的39例臨床精液樣本進行檢測(其中19例弱精癥患者精液標本;20例正常精液樣本)分析,結果顯示精液樣本精子中miR-525-3p表達水平和SEMG1蛋白的表達水平呈負相關(圖2-5,p=0.0341 r=-0.3401);綜上所述,miR-525-3p可通過靶向調控SEMG1蛋白的表達參與弱精癥的發(fā)生。6.精子中miR-525-3p和SEMGl mRNA表達水平與男性生育力的相關性分析為了探索miR-525-3p或SEMG1 mRNA表達與弱精子癥的臨床相關性,我們對所有參與者的生育史進行了為期1年的隨訪研究。在所有的研究對象中,12名受試者被排除在我們的研究之外。排除的受試者包括失去聯系或拒絕合作(n=9),未婚(n=1)和女性伴侶不育(n=2)。最后,本研究將21名弱精子癥患者和27名正常精子志愿者納入生育能力研究。隨后,我們根據其精子中miR-525-3p或SEMG1 mRNA的表達水平將受試者分為相對高表達組和相對低表達組。結果顯示正常精子組的生育率高于弱精子癥患者組(70.37%VS 19.05%,;P0.001)。然而,在相對低SEMG1 mRNA表達組(75.00%VS 20.83%,P0.001)和相對高miR-525-3p表達組(66.67%VS 29.16%,p0.001)中觀察到較高的生育率。結論:1.弱精癥患者精液精子中miR-525-3p表達水平降低而其靶基因SEMG1表達水平升高,并且與精子活力及形態(tài)密切相關。2.精子中miR-525-3p/SEMG1的表達水平與弱精癥所致的男性不育的發(fā)生密切相關。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R698.2

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 徐光耀;;彭培初治療男性弱精癥經驗[J];湖南中醫(yī)雜志;2018年06期

2 吳建淮;馬樂;趙雪;賀玲;;延齡長春膠囊聯合克羅米芬治療特發(fā)性少弱精癥臨床觀察[J];中國醫(yī)藥導刊;2016年11期

3 尉希超;李海風;;自擬黃地助育湯用于男性少精弱精癥治療的臨床研究[J];臨床醫(yī)藥文獻電子雜志;2017年10期

4 閆向前;;羅補甫克比日丸對少弱精癥患者精液質量的影響[J];中國醫(yī)藥指南;2016年12期

5 侯高峰;朱輝軍;徐慶平;李占軍;;黃精贊育膠囊治療男性少弱精癥臨床分析[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2014年12期

6 吳鏑;;中西醫(yī)結合治療男性少弱精癥的臨床療效觀察[J];中華全科醫(yī)學;2012年03期

7 賈永剛;任豪;;生精湯治療少弱精癥患者40例[J];實用中西醫(yī)結合臨床;2012年02期

8 徐璐;熊國保;胥杜娟;楊霞;;少弱精癥的中西醫(yī)治療現狀與進展[J];現代診斷與治療;2009年02期

9 謝際春;;弱精癥老公竟然有私生子[J];婚姻與家庭(社會紀實);2013年08期

10 豆豆;;弱精癥易擋“子彈”飛[J];健康生活(下半月);2011年07期

相關會議論文 前10條

1 司國民;;二仙湯合五子衍宗丸加味治療弱精癥30例[A];中華中醫(yī)藥學會第十四次男科學術大會論文集[C];2014年

2 閆法群;;弱精癥治療的新方法[A];中華中醫(yī)藥學會第十一屆男科學術大會論文集[C];2011年

3 姚榮先;;中西藥結合治療少弱精癥臨床觀察[A];第5次全國中西醫(yī)結合男科學術會議論文匯編暨男科提高班講義[C];2007年

4 陳其華;李博;趙文雪;周歡;羊羨;胡偉;羅星樂;;補腎衍精湯聯合左卡尼汀治療少弱精癥的臨床觀察[A];第十二次全國中西醫(yī)結合男科學術大會暨全國中西醫(yī)結合男科診療技術研修班暨2017上海市中西醫(yī)結合學會上海市中醫(yī)藥學會泌尿男科專業(yè)委員會學術年會講義論文資料匯編[C];2017年

5 楊東;楊振洋;李寅如;路藝;;羅樸甫克比日丸聯合宜利康維參鋅膠囊治療少弱精癥198例療效觀察[A];首屆全國中西醫(yī)結合男科論壇——暨第二次全國男科青年學術會議2012上海市中西醫(yī)結合學會、中醫(yī)藥學會泌尿男科學術年會論文集[C];2012年

6 陳其華;趙丹;;針藥聯合治療濕熱下注型少、弱精癥40例臨床觀察[A];第十一次全國中西醫(yī)結合男科學術大會暨重慶市中西醫(yī)結合學會2016年男科學術大會論文集[C];2016年

7 張春和;李焱風;趙凡;楊毅堅;;左卡尼汀口服液聯合黃地助育湯治療少弱精癥62例療效觀察[A];第十次全國中西醫(yī)結合男科學術大會、第六屆廣西中醫(yī)、中西醫(yī)結合男科學術大會、全國中西醫(yī)結合男科疾病診療新進展學習班論文集[C];2015年

8 羅少波;賈金銘;;腹腔注射環(huán)磷酰胺制作小鼠“腎陽虛”型少弱精癥模型[A];第七次全國中西醫(yī)結合男科學術會議及全國中西醫(yī)結合男科提高班論文匯編及講義[C];2011年

9 徐波;魏永進;董春來;歐陽虹;;生精丸治療少弱精癥臨床療效觀察研究[A];中華中醫(yī)藥學會第十四次男科學術大會論文集[C];2014年

10 郭軍;宋春生;史亞磊;耿強;余國今;李延壽;楊陽;郭小舟;王國忠;;六五生精方治療少弱精癥療效的觀察[A];第5次全國中西醫(yī)結合男科學術會議論文匯編暨男科提高班講義[C];2007年

相關重要報紙文章 前2條

1 通訊員 江勝強 陳思宇 記者 程守勤;弱精癥新發(fā)病機制被發(fā)現[N];健康報;2017年

2 通訊員 杜恩;常洗桑拿浴 易得弱精癥[N];家庭醫(yī)生報;2009年

相關碩士學位論文 前10條

1 郭曉彬;弱精癥患者精液精子中miR-525-3p及其靶基因SEMG1表達水平變化及其臨床意義研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

2 高軻;顯微鏡下精索靜脈結扎術臨床效果評估[D];蘭州大學;2019年

3 李博;補腎衍精湯治療腎虛型弱精癥臨床療效研究[D];湖南中醫(yī)藥大學;2018年

4 楊倩倩;補腎法治療少弱精癥隨機對照試驗的系統(tǒng)評價[D];第四軍醫(yī)大學;2016年

5 武鴻斌;生精沖劑對特發(fā)性少、弱精癥患者精液指標及精漿中HSP70影響的臨床研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2005年

6 任東;疏肝補腎活血法治療精索靜脈曲張少弱精癥的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學;2011年

7 傅建波;人成熟精子中l(wèi)ncRNA鑒定及其異常表達與弱精癥的相關性研究[D];南昌大學;2017年

8 焦瑞寶;弱精癥患者精子運動參數及DNA碎片化指數特征研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

9 謝亞蘭;重度少弱精癥患者中醫(yī)體質分型與ICSI治療結局的相關性研究[D];大連醫(yī)科大學;2016年

10 劉超;十一酸睪酮聯合左卡尼汀口服液治療男性少弱精癥120例臨床分析[D];新疆醫(yī)科大學;2014年

本文編號：2807165