發(fā)布時間：2020-08-26 17:31

【摘要】：目的:探討miR-34a對前列腺癌細胞株的化療敏感性的影響方法:第一部分,MTT檢測miR-34a、5-Aza對兩株PCa細胞增殖的影響:1.mimicNC、miR-34a mimic轉染與5-Aza去甲基化分別處理兩株PCa細胞PC-3、DU145 48h;2.MTT檢測各組PCa細胞在波長為570nm的吸光值(時間0/24/48/72h)分組:PC-3:Con組、pre-Con組、pre-miR-34a組、5-Aza組;DU145:Con組、pre-Con組、pre-miR-34a組、5-Aza組。第二部分,MTT檢測miR-34a、5-Aza對兩株PCa細胞耐藥性的影響:1.mimicNC、miR-34a mimic轉染與5-Aza去甲基化分別處理兩株PCa細胞PC-3、DU145 48h;2.同時分別選擇不同濃度的Dox和Topo作用于各組PCa細胞48h(Dox濃度:0、0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0umol/L;Topo濃度:0、0.0195、0.078、0.3125、1.25、5.0mg/L);3.MTT檢測各組PCa細胞在波長為570nm的吸光值,并分別計算Dox和Topo在各組PCa細胞中的IC50值。分組(兩種化療藥物):Con組、pre-con組、pre-miR-34a組、5-Aza組。第三部分,流式細胞術檢測Dox、Topo、5-Aza與miR-34a對兩株PCa細胞凋亡的影響:1.miR-34a mimic轉染與5-Aza去甲基化分別處理兩株PCa細胞PC-3、DU145細胞48h;2.流式細胞術檢測各組PCa細胞的凋亡率;分組(兩株PCa細胞):Con組、Dox組、Topo組、pre-miR-34a組、pre-miR-34a+Dox組、pre-miR-34a+Topo組、5-Aza組、5-Aza+Dox組、5-Aza+Topo組。結果:mimicNC、miR-34a mimic轉染和5-Aza去甲基化分別處理PCa細胞PC-3、DU145后,MTT檢測結果顯示:miR-34a mimic轉染或5-Aza去甲基化處理組的兩株PCa細胞在波長為570nm的吸光值低于mimicNC處理組和空白處理組;表明miR-34a mimics轉染或5-Aza去甲基化誘導miR-34a表達上調能抑制PCa細胞PC3、DU145的增殖。添加不同濃度的Dox、Topo藥物處理后,MTT測定Dox、Topo在各組PCa細胞中的IC50值顯示:miR-34a mimic轉染組或5-Aza去甲基化組處理后的兩株PCa細胞,Dox、Topo的IC50值比mimicNC處理組和空白處理組低;表明miR-34a mimics轉染或5-Aza去甲基化誘導miR-34a表達上調能夠降低Dox、Topo對兩株PCa細胞的IC50值,提示miR-34a mimics轉染或5-Aza去甲基化誘導miR-34a上調能提高Dox、Topo對PCa細胞PC3、DU145的化療敏感性。進一步通過流式細胞術檢測結果顯示:Dox組、Topo組、pre-miR-34a組、5-Aza組與Con組相比,兩株PCa細胞的凋亡率顯著增加;pre-miR-34a+Dox(Topo)組與單獨Dox組、Topo組、pre-miR-34a組相比,兩株PCa細胞的凋亡率增加;同樣,5-Aza+Dox(Topo)組與單獨Dox組、Topo組、5-Aza組相比,兩株PCa細胞的凋亡率增加;這表明,miR-34a mimics轉染或5-Aza去甲基化誘導miR-34a上調能促進PCa細胞PC-3、DU145的凋亡,增強Dox、Topo對PCa細胞PC-3、DU145的化療敏感性。結論:1.miR-34a可能抑制PCa細胞的增殖。2.miR-34a可能促進PCa細胞的凋亡。3.miR-34a可能增加PCa細胞的化療敏感性。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.25
【圖文】：

圖 3.1 PC-3 細胞 MTT 生長曲線圖與 Con 組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05），▲與 pre-Con 組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05）表 3.2 DU145 細胞 MTT 結果數(shù)據(jù)（ x±s，n=5）Con 組 pre-Con 組 pre-miR-34a 組 5-Aza 組0h 0.458±0.016 0.436±0.011 0.427±0.027 0.438±0.04024h 0.748±0.034 0.730±0.033 0.668±0.021＊▲0.715±0.024＊48h 1.250±0.033 1.210±0.043 1.019±0.022＊▲1.169±0.043＊72h 1.749±0.034 1.729±0.059 1.248±0.029＊▲1.552±0.036＊

圖 3.2 DU145 細胞 MTT 生長曲線圖與 Con 組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05），▲與 pre-Con 組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05）.2 miR-34a、5-Aza 對兩株 PCa 細胞耐藥性的影響本實驗設置 Con 組；pre-Con 組；5-Aza 組；pre-miR-34a 組，不同濃度的兩種療藥物 Dox、Topo 處理各組 PCa 細胞，通過 MTT 法測定各組 PCa 細胞在波長為 57處的 OD 值，計算 Dox、Topo 在各組 PCa 細胞中的 IC50 值，所得數(shù)據(jù)如表（表 表 3.4）所示，所得 Dox 藥物 IC50 值直方圖和 Topo 藥物 IC50 值直方圖，如圖所示（3.3、圖 3.4），兩種化療藥物 Dox、Topo 的 IC50 值在 pre-miR-34a 處理組中低于組和 pre-Con 組，組間比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；同樣，兩種化療藥物 Dox、T的 IC50 值在 5-Aza 處理組中也低于 Con 組和 pre-Con 組，組間比較有統(tǒng)計學意義

南華大學碩士學位論文表 3.3 PC-3、DU145 細胞對 Dox 藥物耐藥性 MTT 結果數(shù)據(jù)（ x±s，n=5）Con 組 pre-Con 組 pre-miR-34a 組 5-Aza 組DU145 0.566±0.024 0.542±0.023 0.305±0.018＊▲0.432±0.017＊▲PC-3 0.666±0.026 0.617±0.026 0.389±0.015＊▲0.452±0.017＊▲＊與 Con 組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05），▲與 pre-Con 組比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05）

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本文編號：2805475