發(fā)布時(shí)間：2020-08-22 21:21

【摘要】：目的:建立苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate,EB)損傷雄性小鼠動(dòng)物模型,分析EB對(duì)小鼠睪丸細(xì)胞增殖及睪丸組織中ATP含量、糖酵解產(chǎn)物、限速酶及單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的變化,探討EB導(dǎo)致小鼠生精功能損傷的機(jī)制。方法:90只健康清潔級(jí)雄性昆明小鼠隨機(jī)分為三組,即對(duì)照組(玉米油),5、10 mg/kg EB染毒組。對(duì)照組肌肉注射150μl玉米油,實(shí)驗(yàn)組按體重分別注射含5 mg/kg、10mg/kg EB的玉米油150μl,隔天1次,持續(xù)4周。建模后進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn):第一部分:(1)每組隨機(jī)選6只雄性小鼠按1:2比例與健康雌性小鼠合籠,記錄雌性小鼠受孕數(shù)和產(chǎn)仔數(shù)以評(píng)估父代小鼠生育力。(2)其余各組雄性小鼠全部頸椎脫臼處死,取睪丸、附睪稱其重量并計(jì)算臟器系數(shù)。(3)附睪尾制備精子懸液,顯微鏡下計(jì)數(shù)精子數(shù)量;制備附睪尾石蠟切片,蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色觀察附睪尾組織結(jié)構(gòu)變化。(4)制備睪丸石蠟切片,HE染色觀察睪丸組織結(jié)構(gòu)變化,過(guò)碘酸-雪夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色對(duì)生精上皮進(jìn)行分期并計(jì)數(shù)生精上皮(第VII期)精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、圓形精子細(xì)胞數(shù)量;制備睪丸組織電鏡切片,觀察睪丸生精上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。(5)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)睪丸細(xì)胞周期各時(shí)相所占比例。(6)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PT-PCR)技術(shù)檢測(cè)睪丸組織Cyclin A1、Cyclin B1、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Vasa m RNA表達(dá)。(7)睪丸組織勻漿,化學(xué)比色法檢測(cè)睪丸組織超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過(guò)氧化氫酶(catelase,CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)含量變化;q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)睪丸組織SOD、CAT、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4(glutathione peroxidase4,GPx4)m RNA表達(dá)。第二部分:(1)高效液相色譜法檢測(cè)睪丸組織三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量變化。(2)睪丸組織勻漿,化學(xué)比色法檢測(cè)葡萄糖、丙酮酸、乳酸含量和己糖激酶(hexokinase,HK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性。(3)q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)睪丸組織單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(monocarboxylate transporter 2,MCT2)、MCT4 m RNA表達(dá)。結(jié)果:第一部分:EB染毒組與對(duì)照組相比:(1)雌性小鼠與對(duì)照組雄性小鼠合籠均成功妊娠、產(chǎn)仔,平均產(chǎn)仔數(shù)為11±0.58只;與EB染毒組雄性小鼠合籠的均未妊娠。(2)睪丸、附睪重量和臟器系數(shù)顯著下降(P0.05);(3)對(duì)照組精子懸液顯微鏡下可見(jiàn)大量精子,而EB染毒組精子懸液顯微鏡下未見(jiàn)精子;光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)對(duì)照組附睪管管腔大而規(guī)則,可見(jiàn)大量精子,EB染毒組附睪管管腔未見(jiàn)精子。(4)對(duì)照組小鼠睪丸生精上皮細(xì)胞排列緊密,生精小管管腔內(nèi)有大量精子;EB染毒組小鼠睪丸生精上皮細(xì)胞排列稀釋,生精小管管腔內(nèi)無(wú)精子,生精上皮精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、圓形精子細(xì)胞數(shù)量顯著下降(P0.05);透射電鏡觀察EB染毒組睪丸精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和支持細(xì)胞線粒體出現(xiàn)空泡,細(xì)胞間出現(xiàn)大量空隙。(5)睪丸細(xì)胞G0/G1期和S期細(xì)胞所占比例下降(P0.05);G2/M期所占比例顯著升高(P0.05)。(6)睪丸組織中Cyclin A1、Cyclin B1、PCNA m RNA表達(dá)隨EB劑量升高顯著下調(diào)(P(27)0.05);Vasa m RNA表達(dá)10 mg/kg組顯著下調(diào)(P(27)0.01),5mg/kg組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P0.05)。(7)睪丸組織中SOD、CAT、GSH-Px活力及m RNA表達(dá)水平顯著降低,NOS活力和NO、MDA含量顯著升高(P0.05)。第二部分:EB染毒組與對(duì)照組相比,睪丸組織中:(1)ATP含量顯著下降(P0.05)。(2)葡萄糖、丙酮酸含量顯著升高(P0.05),各組間乳酸的含量無(wú)顯著差異(P0.05);HK、PK活力顯著下降(P0.05),LDH活力各組間無(wú)顯著差異(P0.05)。(3)MCT2和MCT4 m RNA表達(dá)顯著下降(P0.05)。結(jié)論:第一部分:1.EB通過(guò)下調(diào)睪丸組織Cyclin A1、Cyclin B1、Vasa和PCNA m RNA表達(dá),阻滯細(xì)胞周期,延遲有絲分裂,抑制細(xì)胞增殖,引起生精細(xì)胞數(shù)量減少。2.EB降低睪丸組織抗氧化能力,誘發(fā)氧化應(yīng)激損傷,破壞生精細(xì)胞和支持細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu),導(dǎo)致睪丸生精障礙。第二部分:EB通過(guò)降低睪丸組織中ATP含量、HK和PK活性及下調(diào)MCT4、MCT2 m RNA表達(dá),抑制葡萄糖分解為丙酮酸,降低乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)能力,推測(cè)糖代謝紊亂、能量缺乏是EB導(dǎo)致睪丸生精障礙的重要原因。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R698

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉玲;趙建龍;王建剛;;齊墩果酸誘導(dǎo)人肝癌Bel-7402細(xì)胞G_2/M期阻滯及凋亡的機(jī)制研究[J];中國(guó)中藥雜志;2015年24期

2 黃文捷;馮為;李陽(yáng);陳于;;褪黑素對(duì)鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯致雄性小鼠生殖細(xì)胞DNA損傷的拮抗作用[J];四川動(dòng)物;2015年04期

3 何佩儀;江燕妮;譚宇蕙;杜標(biāo)炎;邵紅偉;賀振泉;張廣獻(xiàn);;吳茱萸堿誘導(dǎo)腎癌786-0細(xì)胞G2/M期阻滯及其分子機(jī)制[J];廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2015年05期

4 宋晴雯;常秀麗;周志俊;;化學(xué)物睪丸毒性機(jī)制的研究現(xiàn)狀[J];癌變·畸變·突變;2015年02期

5 李堂林;翁治委;周少虎;;生殖系統(tǒng)氧化應(yīng)激損傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年06期

6 季加芬;李會(huì)麗;楊培培;趙月華;劉長(zhǎng)云;;外源性雌激素苯甲酸雌二醇對(duì)青春期前雄性大鼠生殖系統(tǒng)的影響[J];中國(guó)兒童保健雜志;2013年08期

7 Pengpeng Jin;Xiaoli Wang;Fei Chang;Yinyang Bai;Yingchun Li;Rong Zhou;Ling Chen;;Low dose bisphenol A impairs spermatogenesis by suppressing reproductive hormone production and promoting germ cell apoptosis in adult rats[J];The Journal of Biomedical Research;2013年02期

8 田艷;王厚照;田豐豐;肖金生;;少、弱精子癥精液pH值和精子形態(tài)的改變及其臨床意義[J];職業(yè)與健康;2011年11期

9 李健;位蘭;薛幫群;司麗芳;張自強(qiáng);李夢(mèng)云;李翔;;環(huán)境雌激素的雄性生殖毒性作用及機(jī)制[J];畜牧與飼料科學(xué);2011年03期

10 陳玉冬;鄒志華;王藝?yán)?張子平;;vasa基因研究進(jìn)展[J];動(dòng)物學(xué)雜志;2010年04期

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1 房彥樂(lè);環(huán)境激素丙烯酰胺對(duì)SD大鼠生精細(xì)胞端粒酶活性及增殖的表達(dá)影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2801162