【摘要】：研究背景 近年來,我國前列腺癌的發(fā)病率明顯呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。隨著前列腺癌的進展,有相當(dāng)一部分患者出現(xiàn)了骨骼、肺部等轉(zhuǎn)移,使預(yù)后變得較差。針對前列腺癌的轉(zhuǎn)移行為的研究已經(jīng)成為近年來的關(guān)注熱點之一。研究表明,上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是前列腺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移行為的關(guān)鍵啟動步驟,而TGF-β則是公認的誘導(dǎo)EMT發(fā)生的主要因素。研究表明,SMAD4蛋白在介導(dǎo)TGF-β調(diào)控EMT的過程中發(fā)揮著重要的作用；然而,也有觀點認為SMAD4在前列腺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移過程中起著抑制性作用。關(guān)于SMAD4在前列腺癌進展中的作用,目前尚無定論。結(jié)合當(dāng)前的研究現(xiàn)狀,組蛋白去乙�；敢种苿�(HDACi)能夠在多方面抑制前列腺癌的進展,包括增殖、自嗜、血管生成以及EMT等,是一類強有力的前列腺癌抑制劑。目前,關(guān)于HDACi類藥物抑制前列腺癌EMT的作用是否與調(diào)控SMAD4的表達水平有關(guān),尚無相關(guān)文獻報道。 目的 研究HDACi類藥物丙戊酸(VPA)對前列腺癌細胞株DU145和PC3的侵襲能力的影響,以及同時對SMAD4表達水平的影響,探討SMAD4在VPA抑制前列腺癌細胞侵襲過程中發(fā)揮的作用。 方法 在所有的實驗分組中,VPA的處理時間均為48h, PC3和DU145細胞均置于5%CO2、37°C下的恒溫孵育箱內(nèi)培養(yǎng)。 1. Transwell實驗：將前列腺癌細胞株P(guān)C3和DU145各自分為對照組、VPA2.0mM/L實驗組和VPA5.0mM/L實驗組,將PC3和DU145細胞分別經(jīng)過相應(yīng)濃度的VPA處理48h后,接種于預(yù)鋪膠的Transwell小室的上室中,在給予相同濃度的胎牛血清刺激的條件下培養(yǎng)48h后,取出小室并固定、染色,然后于鏡下隨機選取5-10個視野統(tǒng)計計數(shù),觀察VPA處理后PC3和DU145細胞的侵襲能力的改變； 2.免疫熒光檢測：將前列腺癌細胞株P(guān)C3和DU145各自分為對照組和VPA5.0mM/L實驗組,將PC3和DU145細胞接種于蓋玻片上,并置于6孔板內(nèi)培養(yǎng),分別經(jīng)過相應(yīng)濃度的VPA處理48h后,經(jīng)過固定、打孔、抗體孵育、洗脫等步驟后,置于熒光顯微鏡下觀察PC3和DU145細胞中SMAD4的定位部位以及表達水平； 3. Western blot檢測：將前列腺癌細胞株P(guān)C3和DU145各自分為對照組、VPA2.0mM/L實驗組和VPA5.0mM/L實驗組,將PC3和DU145細胞接種于6孔板內(nèi)培養(yǎng),分別經(jīng)過相應(yīng)濃度的VPA處理48h后,應(yīng)用BCA試劑盒法提取SMAD4蛋白、p-AKT蛋白并測定蛋白濃度,經(jīng)過電泳、轉(zhuǎn)膜、抗體孵育等步驟后,應(yīng)用ECL發(fā)光系統(tǒng)檢測PC3和DU145細胞各組中SMAD4蛋白以及p-AKT蛋白的表達水平。 結(jié)果 1.[answell實驗：VPA能夠明顯地抑制PC3和Du145細胞的侵襲能力,且抑制水平與VPA的濃度成正相關(guān)(p0.01)； 2.免疫熒光實驗：熒光標(biāo)記后的SMAD4主要表達于PC3和Du145細胞的胞質(zhì)內(nèi),細胞核內(nèi)熒光強度較微弱,這與SMAD4的功能學(xué)相符合；VPA處理組的SMAD4蛋白熒光強度明顯弱于對照組的熒光強度； 3.Western blot實驗：VPA抑制了p-AKT的表達水平(劑量依賴,p0.05),這與本課題組前期發(fā)表的研究結(jié)果一致,證明VPA在本實驗中確實發(fā)揮了作用；VPA同時也明顯地抑制了Du145(p0.05)和PC3(p0.01)細胞內(nèi)SAMD4蛋白的表達水平,并且抑制程度與VPA濃度成正比。 結(jié)論 VPA能夠明顯地抑制前列腺癌細胞PC3和DU145的侵襲能力,同時也抑制了SMAD4蛋白水平的表達。這提示我們,VPA能夠抑制前列腺癌細胞的侵襲力,這一過程可能與阻斷了SMAD4參與的TGF-β誘導(dǎo)EMT的過程有關(guān),進一步闡明了VPA抑制前列腺癌細胞侵襲能力的機制。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 祝宇,吳瑜璇,芮文斌,張烙

本文編號：2800318