【摘要】：急性腎損傷(acute kidney injury,AKI)是以快速腎功能惡化為特征的一種嚴(yán)重的臨床綜合征,具有非常高的發(fā)病率和死亡率,已經(jīng)成為了世界性的公共衛(wèi)生問題。腎臟缺血再灌注損傷,腎毒性藥物的使用以及感染導(dǎo)致的膿毒癥是導(dǎo)致AKI的重要因素。盡管誘發(fā)AKI機制非常復(fù)雜,但是越來越多的文獻研究表明炎癥反應(yīng)在AKI的病理進程中發(fā)揮重要的作用。固有免疫是機體在發(fā)育過程中形成的天然免疫防御功能,是機體對抗多種抗原物質(zhì)的排斥反應(yīng)。適應(yīng)性免疫則是在后天病原體感染中使機體獲得的抵抗感染的能力。研究發(fā)現(xiàn),固有免疫和適應(yīng)性免疫都參與到了 AKI相關(guān)的炎性反應(yīng)中,即腎臟固有免疫系統(tǒng)的過度激活,導(dǎo)致適應(yīng)性免疫功能紊亂并引發(fā)腎臟炎癥反應(yīng)。在AKI中,除腎臟局部浸潤的炎性細(xì)胞外,腎臟固有細(xì)胞也可通過自分泌或旁分泌的方式產(chǎn)生更多的炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子等,進而促進炎癥病變的持續(xù)進展,最終加重腎臟功能損傷。模式識別受體(pattern recognition receptors,PRRs)是固有免疫系統(tǒng)發(fā)揮免疫調(diào)控功能,引發(fā)炎癥反應(yīng)并驅(qū)動和調(diào)控適應(yīng)性免疫應(yīng)答的重要分子。PRRs通過識別病原相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)及受損組織、細(xì)胞釋放的損傷相關(guān)分子模式(damage-associated molecular patterns,DAMP),激活下游信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo),產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子或Ⅰ型干擾素,進而促進炎癥并驅(qū)動和調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。NOD樣受體(NOD-like receptor,NLR)是細(xì)胞內(nèi)PRRs中的一個重要家族,目前已發(fā)現(xiàn)23個成員,根據(jù)效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的不同分為四個亞家族。NLRC5(NLR family,CARD domain containing 5,也稱為 NOD4 或 NOD27)是 NOD 受體家族中分子量最大的成員。研究表明NLRC5廣泛表達于各種器官和組織中,尤其高表達于免疫組織和免疫器官中,如脾臟、淋巴結(jié)、骨髓和胸腺等。此外,NLRC5也較高的表達于肺和腸這種接觸病原微生物較多的器官中。NLRC5具有多種生物學(xué)功能,并廣泛參與多種疾病進程,如腫瘤、心肌纖維化、病毒感染等。NLRC5是MHCⅠ基因表達的主要調(diào)控子,可以通過調(diào)控MHCⅠ的轉(zhuǎn)錄來調(diào)控其表達。近年來,NLRC5的在炎性反應(yīng)中的作用受到廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn),NLRC5可能通過影響TLR調(diào)控NF-κB的激活和Ⅰ型干擾素信號通路和炎性體的激活來調(diào)控固有免疫應(yīng)答。但也有研究表明,NLRC5可以通過結(jié)合NLRP3和ASC共同形成炎性體,從而促進caspase1,IL-1β和IL-18的表達,增強機體的炎性反應(yīng)。特別是NLRC5在腎臟中的表達和病理生理條件下的作用尚不清楚。因此,深入研究NLRC5在急性腎損傷中的表達變化和作用機制具有十分重要的意義。研究目的:1.明確NLRC5在急性腎損傷中的表達變化和發(fā)生發(fā)展中的作用,并闡明是否在不同誘因引起的急性腎損傷中發(fā)揮相同的作用。2.深入研究NLRC5在急性腎損傷中的作用機制,進一步明確腎臟實質(zhì)細(xì)胞或骨髓造血細(xì)胞NLRC5缺失對急性腎損傷的影響和分子作用機制。研究方法第一部分 NLRC5在腎缺血再灌注損傷中的表達變化及作用1.1 NLRC5在急性腎缺血再灌注損傷中的表達變化1.1.1小鼠組織器官和腎臟細(xì)胞系中NLRC5表達的檢測RT-PCR檢測野生型(WT)小鼠心、肝、脾、肺、腎、腦、胃和小腸組織中NLRC5的mRNA含量。RT-PCR分別檢測小鼠足細(xì)胞(MPC)、大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E)、大鼠腎小球系膜細(xì)胞(RMC)和大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞(GENC)中NLRC5 的 mRNA 含量。1.1.2小鼠腎缺血再灌注模型的構(gòu)建及NLRC5表達的檢測選取12周齡的WT雄性小鼠(C57BL/6)和NLRC5缺失型雄性小鼠(Nlrc5-/-)。麻醉小鼠后,用線繩固定小鼠四肢,使用碘伏消毒腹部皮膚后沿中線剖開腹腔,使用動脈夾夾住雙側(cè)腎蒂,缺血30min后松開動脈夾,觀察3min后待腎臟血流恢復(fù)并開始計時,分別于24h和48h處死小鼠并灌流取材。使用實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time RT-PCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot,WB)和免疫組化染色(immunohistochemical staining,IHC)檢測NLRC5在缺血再灌注腎臟組織中的表達。1.1.3 NLRC5與不同部位腎小管標(biāo)記物的共定位通過免疫熒光(immunofluoresce,IF)雙標(biāo)NLRC5和不同部位腎小管標(biāo)記物檢測NLRC5在腎臟不同部位的表達。1.1.4 NLRC5與免疫細(xì)胞標(biāo)記物的共定位通過IF方法分別對NLRC5和各免疫細(xì)胞標(biāo)志物進行熒光標(biāo)記。1.1.5 體外模型的建立及NLRC5的檢測體外培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E),使用三種不同處理方法模擬體內(nèi)缺氧環(huán)境,分別是細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基和低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)90min后轉(zhuǎn)為正常培養(yǎng);細(xì)胞在含有抗霉素A/2-脫氧葡萄糖的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)60min后換液轉(zhuǎn)為正常培養(yǎng);細(xì)胞在含有不同濃度氯化鈷(CoCl2)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h。WB檢測三種處理條件下NLRC5在NRK-52E細(xì)胞中的蛋白表達水平。1.1.6 NLRC5在急性腎小管壞死病人腎臟中的表達使用免疫組化染色法檢測腎癌病人癌旁組織和急性腎小管壞死病人腎活檢切片標(biāo)本中NLRC5的表達。1.2 NLRC5在小鼠腎缺血再灌注損傷中的功能1.2.1 WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟損傷指標(biāo)的檢測采用全自動生化分析儀檢測WT與Nlrc5-/-小鼠血清中尿素氮的含量。采用高效液相色譜儀(high-performance liquid chromatography,HPLC)檢測 WT 與 Nlrc5-/-小鼠血清中肌酐的含量。1.2.2 WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟形態(tài)學(xué)損傷的檢測采用蘇木素-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)檢測WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟形態(tài)學(xué)損傷情況,并進行評分。采用組織IF方法檢測腎臟損傷分子-1(Kidney injurymolecule 1,KIM-1)在WT與Nlrc5--小鼠腎臟中的表達情況,并對其相對表達量進行統(tǒng)計學(xué)分析。原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labeling,TUNEL)檢測 Sham 組和模型組 WT 與 Nlrc5-/-小鼠腎臟細(xì)胞死亡情況,并進行統(tǒng)計學(xué)分析。使用Caspase3活性檢測試劑盒檢測WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟中Caspase3的活性。1.2.3 WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟組織炎癥反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)的檢測采用Real-time RT-PCR檢測WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟組織中炎癥因子的mRNA水平。IF檢測WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟腎臟組織中四種免疫細(xì)胞的浸潤情況,包括中性粒細(xì)胞標(biāo)記蛋白-Ly6B,巨噬細(xì)胞標(biāo)記蛋白-CD68,CD4+T細(xì)胞標(biāo)記蛋白-CD4以及樹突狀細(xì)胞標(biāo)記蛋白-CD11c。1.2.4沉默NLRC5的表達對低氧培養(yǎng)誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞炎癥及凋亡的影響Real-time RT-PCR檢測siRNA沉默NLRC5后在低氧培養(yǎng)條件下NRK-52E細(xì)胞中炎性因子表達水平。采用AnnexinV/PI染色,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測siRNA沉默NLRC5對低氧培養(yǎng)條件下NRK-52E細(xì)胞凋亡的影響。第二部分NLRC5通過調(diào)控CEACAM1信號通路導(dǎo)致腎缺血再灌注損傷的分子機制2.1 NLRC5對CEACAM1表達的影響使用安捷倫小鼠全基因組表達譜芯片(Agilent Whole Mouse Genome OligoMicroarray for global gene expression analysis)分析 WT 與 Nlrc5-/-小鼠差異基因。Real-time RT-PCR 檢測 WT 與 Nlrc5-/-小鼠腎臟 CEACAM1的 mRNA 水平。WB 和 IF檢測WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟CEACAM1的蛋白水平。WB檢測si-RNA沉默NLRC5對低氧培養(yǎng)條件下NRK-52E細(xì)胞中CEACAM1蛋白表達的影響。IF方法檢測NRK-52E細(xì)胞和CD4+ T細(xì)胞中NLRC5和CEACAM1的蛋白表達水平。2.2腎小管上皮細(xì)胞NLRC5-CEACAM1信號通路對MAPK/ERK和PI3K/Akt通路激活的影響WB檢測WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟MAPK/ERK和PI3K/Akt信號通路激活情況。WB檢測si-RNA沉默NLRC5和CEACAM1對低氧培養(yǎng)條件下NRK-52E細(xì)胞中MAPK/ERK和PI3K/Akt信號通路的影響。2.3 NLRC5對CD4+ T cell激活和增殖的影響流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry,FC)檢測WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟和脾臟中CD4+T細(xì)胞的比例。流式細(xì)胞術(shù)檢測WT與Nlrc5-/-小鼠脾臟中CD4+ T細(xì)胞的激活情況。使用美天旎免疫磁珠提取脾臟中的CD4+T細(xì)胞,取2×1O5分離的CD4+T細(xì)胞,加入到含有板包被的1μg/ml CD3抗體、游離的1μμg/mlCD28抗體以及rIL-2的96孔板中,在含有5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h,檢測CD4+T細(xì)胞的激活情況。取2×105個分離的CD4+T細(xì)胞,加入到含有板包被的5μg/mlCD3抗體、游離的2μg/mlCD28抗體的96孔板中,在含有5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h,流式檢測,細(xì)胞事先用羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(carboxyfluorescein succinimidyl ester,cfse)標(biāo)記。2.4 CEACAM1對CD4+ T cell激活和增殖的影響使用腺病毒作為載體,沉默CD4+T細(xì)胞中的CEACAM1的表達,用流式細(xì)胞術(shù)檢測沉默效率。取2×105分離的CD4+ T細(xì)胞,加入到含有板包被的1μg/ml CD3抗體、游離的1μg/ml CD28抗體以及rIL-2的96孔板中,在含有5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h,流式細(xì)胞術(shù)檢測WT、Nlrc5-/-以及Nlrc5-/-+shRNA-CEACAM1組中CD4+ T細(xì)胞的激活情況以及IFN-γ釋放情況。使用CFSE檢測各個組的細(xì)胞增殖情況。2.5腎臟實質(zhì)細(xì)胞和骨髓造血細(xì)胞中NLRC5缺失對腎臟缺血再灌注損傷的影響使用致死劑量的x射線對WT與Nlrc5--小鼠照射,清除小鼠的骨髓,6小時后進行骨髓造血細(xì)胞移植,構(gòu)建骨髓嵌合體小鼠。6周后對嵌合體小鼠構(gòu)建腎缺血再灌注模型,采用HPLC系統(tǒng)檢測WT與Nlrc5--小鼠血清中肌酐的含量。采用HE染色法檢測WT與Nlrc5--小鼠腎臟形態(tài)學(xué)損傷情況,并進行評分。IF檢測KIM-1在WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟中的表達情況,并對其相對表達量進行統(tǒng)計學(xué)分析。第三部分NLRC5在順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷中的作用及機制3.1 NLRC5在順鉑誘導(dǎo)的小鼠AKI中的作用3.1.1構(gòu)建順鉑誘導(dǎo)的小鼠AKI模型及NLRC5表達的檢測選取12周齡WT(C57BL/6)雄性小鼠和Nlrc5-/-雄性小鼠,通過腹腔注射順鉑(劑量30mg/kg體重)構(gòu)建小鼠AKI模型。WB檢測順鉑注射后各時間點WT小鼠腎臟組織中NLRC5的蛋白水平。3.1.2 NLRC5缺失對順鉑誘導(dǎo)的AKI的影響采用全自動生化分析儀檢測WT與Nlrc5-/-小鼠血清中尿素氮的含量。采用高HPLC法檢測WT與Nlrc5-/-小鼠血清中肌酐的含量。采用HE染色法檢測WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟形態(tài)學(xué)損傷情況,并進行評分。TUNEL染色檢測WT與Nlrc5--小鼠腎臟細(xì)胞凋亡情況,并進行統(tǒng)計學(xué)分析。Real-time RT-PCR檢測WT與Nlrc5--小鼠腎勻漿中促炎因子的mRNA含量。WB檢測順鉑誘導(dǎo)下NRK-52E細(xì)胞中NLRC5蛋白水平的變化。流式細(xì)胞術(shù)檢測檢測沉默NLRC5對順鉑誘導(dǎo)NRK-52E細(xì)胞凋亡的影響。3.1.3檢測在順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷中NLRC5對CEACAM1表達的影響WB檢測WT與Nlrc5-/-小鼠腎臟CEACAM1的蛋白水平。研究結(jié)果第一部分NLRC5在腎缺血再灌注損傷中的作用1.1 NLRC5在急性腎缺血再灌注損傷中的表達顯著升高1.1.1小鼠組織器官和腎臟細(xì)胞系中NLRC5的表達通過RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),NLRC5在脾和胃中高表達,在腎臟中有表達。進一步檢測小鼠腎臟細(xì)胞系,包括小鼠足細(xì)胞(MPC)、大鼠近曲小管上皮細(xì)胞(NRK-52E)、大鼠腎小球系膜細(xì)胞(RMC)和大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞(GENC)中NLRC5的mRNA表達水平,結(jié)果表明NLRC5在NRK-52E細(xì)胞中高表達。1.1.2小鼠腎缺血再灌注損傷模型腎臟組織中NLRC5表達顯著升高Real-time RT-PCR及WB檢測小鼠腎臟組織中NLRC5的mRNA和蛋白水平。結(jié)果顯示,模型組小鼠腎臟組織中NLRC5的mRNA與蛋白水平較Sham組顯著升高,并且隨著再灌注時間延長表現(xiàn)出時間依賴性,IHC數(shù)據(jù)證實了上述實驗結(jié)果,并且表明NLRC5表達升高主要集中于腎小管中。1.1.3 NLRC5主要表達于近曲小管與遠(yuǎn)曲小管中IF結(jié)果表明,NLRC5主要表達在腎皮質(zhì)與外髓質(zhì)的近曲小管和遠(yuǎn)曲小管中,并且在缺血再灌注損傷腎臟組織中的表達明顯升高;在髓質(zhì)集合管中表達較弱,且在缺血再灌注損傷腎臟組織中的表達無明顯變化。1.1.4 NLRC5表達于腎臟浸潤的免疫細(xì)胞中IF檢測發(fā)現(xiàn),NLRC5在缺血再灌注腎臟浸潤的巨噬細(xì)胞,中性粒細(xì)胞,CD4+T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞中均有表達。1.1.5 NLRC5在急性腎小管壞死病人腎臟中的表達升高IHC檢測發(fā)現(xiàn),在急性腎小管壞死病人的腎臟組織切片中發(fā)現(xiàn)NLRC5的表達明顯高于腎癌病人癌旁組織。1.1.6體外低氧培養(yǎng)條件下腎小管上皮細(xì)胞NLRC5的蛋白水平顯著升高體外培養(yǎng)NRK-52E細(xì)胞,采用低氧培養(yǎng)、抗霉素A/2-脫氧葡萄糖、CoCl2處理模擬體內(nèi)低氧環(huán)境。WB結(jié)果表明,三種處理條件下,NLRC5的蛋白水平均顯著升高。1.2 NLRC5缺失在腎缺血再灌注損傷中具有保護作用1.2.1 NLRC5缺失減輕腎缺血再灌注損傷模型組中,Nlrc5-/-小鼠血清中肌酐和尿素氮水平較WT小鼠明顯降低;腎臟形態(tài)學(xué)損傷明顯減輕,KIM-1的表達明顯減少,細(xì)胞死亡數(shù)顯著減少;腎臟組織勻漿中炎癥因子的mRNA水平明顯降低,浸潤的中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和CD4+ T細(xì)胞的數(shù)量明顯減少。1.2.2 NLRC5缺失減輕了低氧誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞的炎癥反應(yīng)與凋亡NLRC5缺失顯著抑制了低氧誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞中的炎性反應(yīng)和凋亡細(xì)胞的增多。第二部分NLRC5通過調(diào)控CEACAM1信號通路致腎缺血再灌注損傷的分子機制2.1 NLRC5負(fù)調(diào)控CEACAM1的表達在腎缺血再灌注損傷中的CEACAM1的表達明顯降低,NLRC5的缺失恢復(fù)了腎缺血再灌注損傷小鼠腎臟中CEACAM1蛋白水平的降低。低氧誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞中CEACAM1的表達明顯降低,使用si-RNA沉默NLRC5可以恢復(fù)低氧誘導(dǎo)下NRK-52E細(xì)胞中CEACAM1的降低。2.2 NLRC5負(fù)調(diào)控CEACAM1介導(dǎo)的下游信號通路在腎缺血再灌注損傷腎臟組織中ERK1/2和PI3K/Akt信號通路明顯激活,NLRC5的缺失可以進一步激活ERK1/2信號通路,而對PI3K/Akt信號通路無明顯影響。在體外低氧培養(yǎng)條件下NRK-52E細(xì)胞中ERK1/2和PI3K/Akt信號通路明顯激活,基因沉默NLRC5可以進一步激活ERK1/2和PI3K/Akt信號通路,使用si-RNA同時沉默NLRC5和CEACAM1的表達可以下調(diào)NLRC5缺失而誘導(dǎo)的ERK1/2和PI3K/Akt信號通路的激活,表明在腎小管上皮細(xì)胞中NLRC5負(fù)調(diào)控CEACAM1介導(dǎo)的下游信號通路。2.3 NLRC5可以誘導(dǎo)缺血再灌注損傷腎臟組織中CD4+T細(xì)胞的浸潤和激活在腎缺血再灌注條件下,NLRC5缺失型小鼠腎臟和脾臟中的CD4+ T細(xì)胞數(shù)量明顯減少,CD4+T細(xì)胞的激活收到抑制,表明NLRC5可以誘導(dǎo)缺血再灌注損傷腎臟中CD4+ T細(xì)胞的浸潤和激活。2.4 NLRC5通過調(diào)控CEACAM1信號通路激活CD4+ T細(xì)胞體外實驗中,NLRC5缺失可以抑制CD3/CD28抗體誘導(dǎo)的CD4+ T細(xì)胞的激活和增殖。使用腺病毒作為載體,沉默CD4+T細(xì)胞中的CEACAM1的表達,發(fā)現(xiàn)CEACAM1沉默可以逆轉(zhuǎn)NLRC5的缺失對CD4+ T細(xì)胞的激活和增殖的抑制,增加CD4+IFN-γ+細(xì)胞的數(shù)量,表明NLRC5通過調(diào)控CEACAM1信號通路激活CD4+ T細(xì)胞。2.5 NLRC5缺失對腎臟實質(zhì)細(xì)胞和射線敏感的造血細(xì)胞的影響通過對骨髓嵌合體小鼠構(gòu)建腎缺血再灌注模型,檢測腎臟損傷情況發(fā)現(xiàn),Nlrc5-/-→WT嵌合體小鼠腎臟損傷程度高于WT體Nlrc5-/-嵌合體小鼠,說明NLRC5的缺失在腎臟實質(zhì)細(xì)胞中的保護作用高于射線敏感的造血細(xì)胞。第三部分NLRC5在順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷中的作用及機制3.1 NLRC5在順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷中表達顯著升高通過對WT小鼠腹腔注射順鉑構(gòu)建AKI模型,WB檢測結(jié)果顯示,NLRC5在順鉑誘導(dǎo)的AKI腎臟組織中蛋白表達顯著升高。體外培養(yǎng)NRK-52E細(xì)胞,給予順鉑刺激,WB檢測結(jié)果顯示,順鉑刺激后細(xì)胞中NLRC5的蛋白表達顯著升高。3.2 NLRC5的缺失可以減輕順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷通過對WT和Nlrc5-/-小鼠腹腔注射順鉑構(gòu)建AKI模型,檢測NLRC5對順鉑誘導(dǎo)的AKI的作用。血清肌酐尿素氮檢測結(jié)果表明,與WT模型組相比,Nlrc5--模型組血清肌酐尿素氮水平明顯降低。HE染色結(jié)果表明NLRC5的缺失可以明顯減輕順鉑誘導(dǎo)的腎臟組織損傷。TUNEL染色和FC結(jié)果顯示,NLRC5的缺失可以明顯減輕順鉑誘導(dǎo)的腎臟細(xì)胞凋亡。Real-timeRT-PCR檢測結(jié)果顯示,NLRC5的缺失可以減輕順鉑誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)。以上結(jié)果表明,NLRC5的缺失可以減輕順鉑導(dǎo)致的急性腎損傷。3.3順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷中NLRC5的缺失可以上調(diào)CEACAM1的表達WB檢測結(jié)果顯示,NLRC5的缺失可以上調(diào)CEACAM1的表達,表明NLRC5對CEACAM1表達的調(diào)控在不同致病因素引起的急性腎損傷中具有普遍性。研究結(jié)論與創(chuàng)新性1.本研究首次闡明了 NLRC5在急性腎損傷中的作用,發(fā)現(xiàn)在缺血再灌注和順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷中,NLRC5的表達明顯升高。NLRC5的缺失可以通過減輕腎小管細(xì)胞的凋亡,炎性細(xì)胞的浸潤和炎性因子的釋放進而減輕急性腎損傷。2.本研究發(fā)現(xiàn)NLRC調(diào)控CEACAM1信號通路,影響其下游的ERK1/2和PI3K/Akt信號通路從而加重缺血再灌注引起的腎小管上皮細(xì)胞的損傷。同時NLRC5還可以通過調(diào)控CEACAM1的表達調(diào)控小鼠CD4+T細(xì)胞激活和增殖。進一步通過骨髓移植實驗證明了 NLRC5在腎臟實質(zhì)細(xì)胞中的作用更為重要。本研究有助于進一步闡明模式識別受體在小鼠AKI中的作用,拓寬對于NLRC5在固有免疫和獲得性免疫中作用的認(rèn)識,為尋找和發(fā)現(xiàn)防治急性腎損傷的靶點提供了重要的理論和實驗基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R692
【圖文】：

ＲＴ－ＰＣＲ檢測小鼠各個組織器官，包括心、肝、脾、肺、腎、腦、胃和小腸組織逡逑在內(nèi)的ＮＬＲＣ５的ｍＲＮＡ水平，結(jié)果表明ＮＬＲＣ５在脾和胃中高表達，在腎臟中有逡逑較高表達（圖１．１ａ）。進一步檢測小鼠腎臟細(xì)胞系，包括小鼠足細(xì)胞（ＭＰＣ）、大鼠逡逑近曲小管上皮細(xì)胞（ＮＲＫ－５２Ｅ）、大腎小球系膜細(xì)胞（ＲＭＣ）和大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)逡逑胞（ＧＥＮＣ）中ＮＬＲＣ５的ｍＲＮＡ水平，結(jié)果表明ＮＬＲＣ５在ＮＲＫ－５２Ｅ細(xì)胞中高表逡逑達（圖邋１．１ｂ）。逡逑ＮＬＲＣ５邐ＮＬＲＣ５逡逑（３－Ａｃｔｉｎ邐３－Ａｃｔｉｎ逡逑ＩｌｉｌｌｌｉＪｉ邋ｆｊｌＬｌ逡逑１彟f佩澹義賢跡保卞澹危蹋遙茫翟諦∈笞櫓鞴俸蛻鱸嘞赴抵械謀澩鎩＃徨澹遙裕校茫壹觳廡∈笞櫓鞴僦校危蹋遙茫靛義系模恚遙危簾澩鎪�。ｂ邋＿b裕校茫壹觳饃鱸嘞赴抵校危蹋遙茫檔模恚遙危簾澩鎪�。辶x希保采鋈毖俟嘧⑺鶘誦∈笊鱸嘧櫓校危蹋遙茫檔謀澩鏘災(zāi)咤義希遙澹幔歟簦椋恚邋澹遙裕校茫遙ㄍ跡保玻幔┮約埃祝攏ㄍ跡保玻猓┙峁允荊Ｐ妥橛爰偈質(zhì)酰ǎ櫻瑁幔恚╁義獻橄啾齲∈笊鱸嘧櫓校危蹋遙茫檔模恚遙危了膠偷鞍姿矯饗隕擼⑶宜孀旁馘義瞎嘧⑹奔淶難映�，ＮＬ＿b茫當(dāng)澩鍔叱氏質(zhì)奔湟覽敵�。Ｉ｝x眉觳猓ㄍ跡保玻悖┬∈笊鱸噱義獻櫓校危蹋遙茫檔牡鞍妝澩錚⑾幟Ｐ妥橛耄櫻瑁幔磣橄啾齲∈笊鱸嘧櫓校危蹋遙茫靛義系牡鞍妝澩鎪矯饗隕擼⑺孀旁俟嘧⑹奔淶難映こ氏置饗緣氖奔湟覽敵�，且主辶x希矗峰義

本文編號：2794587