【摘要】：目的急性缺血性腎小球內(nèi)皮細(xì)胞受損機(jī)制尚不清楚。本研究擬探討缺血缺氧/低氧導(dǎo)致Syndecan-1表達(dá)減少在腎小球內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用及機(jī)制。方法我們首先通過免疫組化和Western blot檢測(cè)缺血缺氧或低氧狀態(tài)下腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Syndecan-1表達(dá)水平變化;其次,通過siRNA技術(shù)敲低腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Syndecan-1表達(dá)(分別予以Cocl_2、VEGF、Dynasore、MDC、Nystatin或aPKC抑制劑干預(yù)),利用流式細(xì)胞儀、Western blot、CCK-8及細(xì)胞通透性實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞凋亡、活力和細(xì)胞通透性變化;Western blot檢測(cè)VEGF-VEGFR-2通路靶基因、總VEGFR-2、胞膜VEGFR-2、Dab2、p-Dab2、PAR-3、aPKC及p-aPKC表達(dá)水平變化;Real-time RT-PCR檢測(cè)VEGFR-2、Dab2及PAR-3在mRNA表達(dá)水平變化;免疫共沉淀檢測(cè)VEGFR-2與小窩蛋白相互作用情況;細(xì)胞免疫熒光和免疫共沉淀檢測(cè)Syndecan-1與VEGR-2之間是否存在共定位及相互作用;最后,利用siRNA分別敲低腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Dab2或PAR-3的表達(dá)(予以VEGF干預(yù)),流式細(xì)胞儀及CCK-8分別檢測(cè)細(xì)胞凋亡及活力變化情況;Western blot檢測(cè)VEGF-VEGFR-2通路靶基因、胞膜VEGFR-2及總VEGFR-2表達(dá)水平變化等。結(jié)果(1)缺血缺氧/低氧刺激可導(dǎo)致腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Syndecan-1表達(dá)下調(diào);(2)Syndecan-1表達(dá)下調(diào)可通過阻斷VEGF-VEGFR-2通路靶基因的表達(dá)導(dǎo)致腎小球內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能受損;(3)Dynasore及MDC可阻斷腎小球內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-VEGFR-2通路的激活;Nystatin則可激活VEGF-VEGFR-2通路靶基因的表達(dá);(4)siRNA敲低腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Syndecan-1的表達(dá)可導(dǎo)致VEGFR-2與小窩蛋白相互作用顯著增多;(5)Syndecan-1與VEGFR-2存在共定位及相互作用;(6)Dab2或PAR-3表達(dá)下調(diào)可通過阻斷VEGF-VEGFR-2通路靶基因表達(dá)導(dǎo)致腎小球內(nèi)皮細(xì)胞活力下降及凋亡增加;(7)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Syndecan-1表達(dá)水平下調(diào)可誘導(dǎo)aPKC介導(dǎo)的Dab2磷酸化增加;與Syndecan-1 siRNA轉(zhuǎn)染組相比,aPKC抑制劑干預(yù)組腎小球內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-VEGFR-2通路靶基因的表達(dá)明顯增加。結(jié)論缺血缺氧/低氧可降低腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Syndecan-1的表達(dá);Syndecan-1表達(dá)下調(diào)通過阻斷VEGF-VEGFR-2通路的表達(dá)導(dǎo)致腎小球內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能受損;Syndecan-1可通過誘導(dǎo)aPKC介導(dǎo)的Dab2磷酸化干預(yù)VEGFR-2參與的內(nèi)吞作用,從而調(diào)控VEGF-VEGFR-2通路的表達(dá)。該研究為腎小球內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)的治療提供了新靶點(diǎn),具有重要的臨床價(jià)值與實(shí)踐意義。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R692

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本文編號(hào)：2788066