【摘要】：腎臟是人體的重要器官,主要行使兩方面功能,一是清除血液中由細(xì)胞生命活動產(chǎn)生的含氮廢物,二是維持體液滲透壓和pH值穩(wěn)定。腎臟對生命活動的維持至關(guān)重要,腎臟功能缺陷和紊亂所導(dǎo)致的腎病種類繁多,發(fā)病率高,目前的研究表明腎病的發(fā)病原因,特別是人類的遺傳性腎臟疾病是由于調(diào)控腎臟發(fā)育的相關(guān)基因突變導(dǎo)致的,因此,腎臟發(fā)育的研究有利于對腎臟疾病發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識、腎病快速診斷方法的建立、腎病臨床治療策略新的探索。在脊椎動物由低等向高等進(jìn)化的過程中,哺乳動物由中間中胚層形成的腎臟出現(xiàn)了三種形態(tài)和結(jié)構(gòu)逐漸復(fù)雜化的形式:前腎、中腎以及后腎。在魚類以及兩棲動物中,前腎會在胚胎期形成,然后形成最終的成熟腎臟-中腎�，F(xiàn)有的研究表明在分子進(jìn)化水平上腎臟發(fā)育是保守的,低等動物與高等動物具有類似的腎臟發(fā)生過程。斑馬魚是一種腎臟結(jié)構(gòu)簡單的低等脊椎動物,其前腎僅由兩個(gè)腎單元組成,包含了哺乳動物腎臟中的所有細(xì)胞類型,而且調(diào)控前腎器官形成的轉(zhuǎn)錄因子在哺乳動物的腎臟發(fā)育中有高度保守的功能,因此斑馬魚前腎是一種良好的腎臟研究模型。斑馬魚作為模式生物,有較多顯著的優(yōu)勢。斑馬魚的卵子采用體外受精方式;受精卵快速生長,在24小時(shí)內(nèi)已經(jīng)完成了三個(gè)胚層、胚胎體軸、以及血管、神經(jīng)等組織或器官的發(fā)育;胚胎體外發(fā)育,且呈半透明狀,便于體外觀察;斑馬魚生長周期短,3個(gè)月即可性成熟;斑馬魚具有較強(qiáng)的繁殖能力,每條母魚每次可產(chǎn)上百顆卵,且產(chǎn)卵間期短;斑馬魚體型小,約三至四厘米長;尤其是已經(jīng)在斑馬魚中開發(fā)出了越來越多的應(yīng)用研究技術(shù),如基因敲除技術(shù),轉(zhuǎn)基因技術(shù)等;這些優(yōu)勢有利于實(shí)驗(yàn)室開展大規(guī)模的斑馬魚養(yǎng)殖以及科學(xué)研究。我們通過化學(xué)誘變劑ENU對斑馬魚進(jìn)行誘變,使其在斑馬魚基因組中隨機(jī)地引起突變,用正向遺傳篩選的方法,篩選出感興趣的前腎發(fā)育缺陷的突變體。這樣可以更加系統(tǒng)、無基因歧視地研究調(diào)控腎臟發(fā)育的基因,為腎臟研究以及腎臟疾病的防治提供更多的科學(xué)依據(jù)。本次篩選采用經(jīng)典的F2代自交產(chǎn)生F3代胚胎篩選隱性遺傳突變的策略。目前關(guān)于斑馬魚腎臟突變體的篩選的研究報(bào)道基本是采用在顯微鏡下直接觀察斑馬魚腎臟形態(tài)的方法,并不能分辨出表型不明顯或表型出現(xiàn)較晚的突變體。為了彌補(bǔ)這一缺陷,我們利用堿性磷酸酶染色的方法對斑馬魚腎管進(jìn)行染色標(biāo)記,然后在顯微鏡下觀察斑馬魚腎管的形態(tài),并進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄和結(jié)果分析。前期經(jīng)過4代的傳代和篩選,我們保留了 24個(gè)穩(wěn)定遺傳的F5斑馬魚腎臟遺傳突變品系。通過堿性磷酸酶染色的結(jié)果分析,我們將這些突變體分為四大類,分別為腎管偏細(xì)型、腎管偏粗型、腎管短縮型以及腎V⒅仔�。升r芷感凸?fàn)N

本文編號：2780258