【摘要】：腎臟是人體的重要器官,主要行使兩方面功能,一是清除血液中由細胞生命活動產生的含氮廢物,二是維持體液滲透壓和pH值穩(wěn)定。腎臟對生命活動的維持至關重要,腎臟功能缺陷和紊亂所導致的腎病種類繁多,發(fā)病率高,目前的研究表明腎病的發(fā)病原因,特別是人類的遺傳性腎臟疾病是由于調控腎臟發(fā)育的相關基因突變導致的,因此,腎臟發(fā)育的研究有利于對腎臟疾病發(fā)病機理的認識、腎病快速診斷方法的建立、腎病臨床治療策略新的探索。在脊椎動物由低等向高等進化的過程中,哺乳動物由中間中胚層形成的腎臟出現了三種形態(tài)和結構逐漸復雜化的形式:前腎、中腎以及后腎。在魚類以及兩棲動物中,前腎會在胚胎期形成,然后形成最終的成熟腎臟-中腎�，F有的研究表明在分子進化水平上腎臟發(fā)育是保守的,低等動物與高等動物具有類似的腎臟發(fā)生過程。斑馬魚是一種腎臟結構簡單的低等脊椎動物,其前腎僅由兩個腎單元組成,包含了哺乳動物腎臟中的所有細胞類型,而且調控前腎器官形成的轉錄因子在哺乳動物的腎臟發(fā)育中有高度保守的功能,因此斑馬魚前腎是一種良好的腎臟研究模型。斑馬魚作為模式生物,有較多顯著的優(yōu)勢。斑馬魚的卵子采用體外受精方式;受精卵快速生長,在24小時內已經完成了三個胚層、胚胎體軸、以及血管、神經等組織或器官的發(fā)育;胚胎體外發(fā)育,且呈半透明狀,便于體外觀察;斑馬魚生長周期短,3個月即可性成熟;斑馬魚具有較強的繁殖能力,每條母魚每次可產上百顆卵,且產卵間期短;斑馬魚體型小,約三至四厘米長;尤其是已經在斑馬魚中開發(fā)出了越來越多的應用研究技術,如基因敲除技術,轉基因技術等;這些優(yōu)勢有利于實驗室開展大規(guī)模的斑馬魚養(yǎng)殖以及科學研究。我們通過化學誘變劑ENU對斑馬魚進行誘變,使其在斑馬魚基因組中隨機地引起突變,用正向遺傳篩選的方法,篩選出感興趣的前腎發(fā)育缺陷的突變體。這樣可以更加系統(tǒng)、無基因歧視地研究調控腎臟發(fā)育的基因,為腎臟研究以及腎臟疾病的防治提供更多的科學依據。本次篩選采用經典的F2代自交產生F3代胚胎篩選隱性遺傳突變的策略。目前關于斑馬魚腎臟突變體的篩選的研究報道基本是采用在顯微鏡下直接觀察斑馬魚腎臟形態(tài)的方法,并不能分辨出表型不明顯或表型出現較晚的突變體。為了彌補這一缺陷,我們利用堿性磷酸酶染色的方法對斑馬魚腎管進行染色標記,然后在顯微鏡下觀察斑馬魚腎管的形態(tài),并進行數據記錄和結果分析。前期經過4代的傳代和篩選,我們保留了 24個穩(wěn)定遺傳的F5斑馬魚腎臟遺傳突變品系。通過堿性磷酸酶染色的結果分析,我們將這些突變體分為四大類,分別為腎管偏細型、腎管偏粗型、腎管短縮型以及腎V⒅仔�。升r芷感凸燦

本文編號：2780258