【摘要】：目的:闡明circPRKD3抑制前列腺癌細(xì)胞增殖的作用及機制。方法:1.收集前列腺癌與前列腺增生組織標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)方向的檢測,選取差異性表達(dá)明顯的環(huán)狀RNA進(jìn)一步實驗。2.通過RT-PCR技術(shù)檢測前列腺癌、前列腺增生組織中circPRKD3的表達(dá)水平,通過免疫熒光染色原位雜交技術(shù)在細(xì)胞水平比較circPRKD3在前列腺癌和前列腺增生組織中的表達(dá)水平。3.體外實驗:適宜環(huán)境中培養(yǎng)正常前列腺上皮細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞,通過RT-PCR和免疫熒光染色原位雜交實驗檢測RWPE-1細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞中circPRKD3的表達(dá)水平。4.將PC3細(xì)胞作為前列腺癌細(xì)胞的代表進(jìn)一步實驗。在體外適宜環(huán)境中培養(yǎng)PC3細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)circPRKD3,然后采用實時定量PCR、Western blot、Transwell、創(chuàng)傷愈合實驗等實驗方法檢測circPRKD3的作用。5.設(shè)計可以低表達(dá)circPRKD3的實驗方法,并在前列腺癌細(xì)胞內(nèi)低表達(dá)circPRKD3,隨后進(jìn)行定量PCR、Western blot實驗、Transwell實驗、創(chuàng)傷愈合實驗驗證circPRKD3的作用。結(jié)果:1.檢測前列腺癌、前列腺增生組織中存在的差異性環(huán)狀RNA。隨機選取了三例人體前列腺癌組織和與其配對的前列腺增生組織,在這些標(biāo)本中總共發(fā)現(xiàn)了15個不同的circRNA,選取差異性較大circPRKD3作為研究對象。2.circPRKD3在前列腺癌組織中低表達(dá)。實時定量PCR、FISH實驗證實:與前列腺增生組織相比較,circPRKD3在前列腺癌組織中的表達(dá)水平明顯下調(diào)。3.circPRKD3在前列腺癌細(xì)胞中低表達(dá)前列腺癌細(xì)胞中circPRKD3表達(dá)水平均低于前列腺上皮細(xì)胞,PC3細(xì)胞差異性最明顯,以PC3細(xì)胞為代表進(jìn)一步實驗。免疫熒光實驗顯示:circPRKD3在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)量下調(diào)。綜上結(jié)果表明:circPRKD3在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著下調(diào)。4.過表達(dá)circPRKD3能夠抑制前列腺癌細(xì)胞的體外增殖和遷移能力。PCR、Transwell實驗、創(chuàng)傷愈合實驗、Western Blot實驗結(jié)果表明:過表達(dá)circPRKD3能夠抑制前列腺癌細(xì)胞的體外增殖與遷移。5.敲低circPRKD3能夠促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的體外增殖和遷移能力。PCR、Transwell實驗、創(chuàng)傷愈合實驗、Western Blot實驗結(jié)果表明:敲低circPRKD3能夠促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的體外增殖與遷移。結(jié)論:1.circPRKD3存在于正常的前列腺組織中,并且其在前列腺癌組織表達(dá)下調(diào)。2.circPRKD3是一種與前列腺癌細(xì)胞增殖與遷移有關(guān)的基因。3.過表達(dá)circPRKD3能夠抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖與遷移。4.敲低circPRKD3能夠促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖與遷移。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.25
【圖文】：

圖 1 標(biāo)本中中差異性表達(dá)的 circRNA（circPRKD3）。g.1Analysis of circRNA（circPRKD3）expression in clinical tishical clustering analysis shows distinguishable circRNA expression pros of cancerous and adjacent tissues. (T1/T2/T3 for prostate cancer and P1/ adjacent nontumorous tissues). Each column represents the expression prsample, and each row corresponds to a circRNA. ‘‘Red’’ indicates higher end ‘‘green’’indicates lower expression level.

圖2鑒別和驗證circPRKD3為環(huán)形RNA。PRKD3 was identified and verified as a circular RNrgent) primers were used to detect circPRKD3 via RT-PCRcRNAs in cDNA but not genomic DNA (gDNA). GAPin base pairs. confirmed head-to-tail splicing of circPRKD3.

30圖 3 circPRKD3 在前列腺癌組織的表達(dá)下調(diào)。.3 circPRKD3 was downregulated remarkably in clinical tiR analysis results of hsa_circ_0001296(circPRKD3) expressiong divergent primers. **P < 0.01 vs. BPH, n = 21.ybridization (ISH) of circPRKD3 (green) combined with nuclear-spue) in clinical tissues. Scale bars = 50μm.

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 高春成;circPRKD3抑制前列腺癌細(xì)胞增殖的作用及機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號：2779921